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RNA干扰在植物中的作用机理及其应用研究进展

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西北植物学报 2008年第9期28卷 1920-1927页

作者：马超郝青南马兵钢石河子大学农学院新疆石河子832003

RNA干扰(RNAi)是广泛存在于生物中的一种现象,它是小干扰RNA诱导的转录后基因沉默,是生物抵抗异常DNA的一种保护机制,同时在生物生长发育过程中调控基因的表达.本文综述了近年来有关RNA干扰的发现、作用过程及其机理,分析了它与反义寡... 详细信息

RNA干扰(RNAi)是广泛存在于生物中的一种现象,它是小干扰RNA诱导的转录后基因沉默,是生物抵抗异常DNA的一种保护机制,同时在生物生长发育过程中调控基因的表达.本文综述了近年来有关RNA干扰的发现、作用过程及其机理,分析了它与反义寡核苷酸、核酶、脱氧核酶的不同,并介绍了RNA干扰在植物基因功能、植物抗病毒、作物品种改良等方面的应用,为siRNA干扰的进一步利用提供参考资料.

关键词： RNA干扰 siRNA干扰植物病毒

库尔勒香梨的苹果褪绿叶斑病毒cDNA探针检测技术研究

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西北农业学报 2005年第2期14卷 58-63页

作者：牛建新朱军马兵钢石河子大学农学院园艺系

以库尔勒香梨叶片和皮层为材料,对两种植物总RNA提取方法进行了比较研究,从中筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法;并利用RT-PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针,在此基础上,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了实验研究。结果表明... 详细信息

以库尔勒香梨叶片和皮层为材料,对两种植物总RNA提取方法进行了比较研究,从中筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法;并利用RT-PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针,在此基础上,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了实验研究。结果表明,当探针浓度为400ng/mL,甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应6h,可获得最高灵敏度。Tween20的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测,并对库尔勒地区香梨带毒情况进行了检测。结果表明,不论幼叶、老叶、皮层及冷冻叶片均可出现杂交信号,两种提取方法提取的总RNA也都出现了杂交信号,库尔勒香梨样品有45%的带苹果褪绿叶斑病毒。

关键词：苹果褪绿叶斑病毒 cDNA探针库尔勒香梨检测技术 RNA提取方法 PCR反应体系 Tween20 牛血清白蛋白总RNA 杂交信号生物素标记库尔勒地区比较研究实验研究杂交反应高灵敏度杂交检测甲酰胺皮层叶片浓度幼叶老叶

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大豆异黄酮分离检测及保健功效的研究

食品与生物技术学报 2008年第6期27卷 6-13页

作者：马兵钢郝青南马超石河子大学农学院新疆石河子832003

针对近年来国内外大豆异黄酮的保健功能及结构的相关研究,分析了层析法、高效液相色谱法、高速逆流色谱法分离大豆异黄酮的方法,讨论了紫外分光光度法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱法、气相色谱法、毛细管电泳法、薄层扫描色谱... 详细信息

针对近年来国内外大豆异黄酮的保健功能及结构的相关研究,分析了层析法、高效液相色谱法、高速逆流色谱法分离大豆异黄酮的方法,讨论了紫外分光光度法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱法、气相色谱法、毛细管电泳法、薄层扫描色谱法、双向纸层析色谱法及免疫法等检测大豆异黄酮的方法及其这些分离检测方法的特点。

关键词：大豆异黄酮分离方法检测方法保健功效

番茄红素β环化酶基因(Lyc-β)RNAi载体构建及表达鉴定

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农业生物技术学报 2010年第1期18卷 10-17页

作者：马超马兵钢郝青南何娟鲁晓燕吴志苹石河子大学农学院园艺系新疆生产建设兵团绿洲生态农业重点实验室

从番茄(Lycopersicun esculentumMill)中提取总RNA,根据GenBank中番茄红素β环化酶基因(Lyc-β)序列(X86452),经mRNA反转录扩增出2段Lyc-β基因高度保守的300bpDNA片段,从β-葡萄糖苷酶基因(gusA)中扩增出170bp的内含子片段。分别将两... 详细信息

从番茄(Lycopersicun esculentumMill)中提取总RNA,根据GenBank中番茄红素β环化酶基因(Lyc-β)序列(X86452),经mRNA反转录扩增出2段Lyc-β基因高度保守的300bpDNA片段,从β-葡萄糖苷酶基因(gusA)中扩增出170bp的内含子片段。分别将两段不同的Lyc-β片段的正、反向序列与内含子连接,构建出两套干扰Lyc-β基因的植物表达载体。经根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciems)介导转化番茄,22株转基因植株通过荧光定量PCR分析干扰效果,结果显示,2套干扰载体的干扰效率表现出一定的差异,Lyc-β基因mRNA平均含量分别为对照的11.78%和13.86%,进一步用HPLC分析转化株的番茄红素含量,结果表明,转基因植株中番茄红素的含量最高可达13.84μg/gFW,是对照的4.26倍。

关键词：番茄类胡萝卜素番茄红素番茄红素β环化酶基因 RNAi

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几种大粒鲜食葡萄品种无核化处理

北方园艺 2001年第6期 15-17页

作者：冯建荣马兵钢李宏伟罗琳石河子大学农学院园艺工程系新疆832003

用GA、BA处理新疆地区主栽的几种大粒鲜食葡萄品种 ,结果表明GA能促进葡萄无籽果粒的形成 ,混用BA可使处理效果稳定。

关键词：葡萄 GA 6-BA 果实性状鲜食葡萄大粒葡萄无核化处理

库尔勒香梨的苹果茎痘病毒cDNA探针检测技术研究

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中国农业科学 2004年第1期37卷 99-105页

作者：牛建新朱军马兵钢覃伟铭王小兵吴忠华新疆兵团绿洲生态农业重点实验室沈阳110161 沈阳农业大学园艺学院石河子832003 石河子大学农学院园艺系石河子大学农学院园艺系石河子832003

以库尔勒香梨叶片和皮层为材料 ,对 2种总RNA提取方法进行了比较研究 ,从中行筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法 ;并利用RT PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针 ,在此基础上 ,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了试验研究 ,结果表... 详细信息

以库尔勒香梨叶片和皮层为材料 ,对 2种总RNA提取方法进行了比较研究 ,从中行筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法 ;并利用RT PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针 ,在此基础上 ,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了试验研究 ,结果表明 ,当探针浓度为 4 0 0ng·ml-1,甲酰胺浓度为 4 5 % ,4 2℃杂交反应 6h ,可获得最高灵敏度。进口硝酸纤维素膜的灵敏度最好 ,基本无背景。Tween2 0的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测 ,结果表明 ,不论幼叶、老叶、皮层及冷冻叶片均可出现杂交信号 ,2种提取方法提取的总RNA也都出现了杂交信号

关键词：库尔勒香梨苹果茎痘病毒 cDNA探针

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白藜芦醇的药理功能及分离检测研究进展

北方园艺 2008年第4期 61-65页

作者：马超郝青南马兵钢石河子大学农学院新疆石河子832003

综述了近年来有关白藜芦醇的药理学及化学研究进展。包括白藜芦醇的抗氧化作用、抗菌作用、抗癌作用、预防心血管疾病的作用、保护肝脏的作用、免疫调节作用和激素调节作用。介绍了有机溶剂浸提法、碱溶酸沉淀法提取法、微波辅助提取法... 详细信息

综述了近年来有关白藜芦醇的药理学及化学研究进展。包括白藜芦醇的抗氧化作用、抗菌作用、抗癌作用、预防心血管疾病的作用、保护肝脏的作用、免疫调节作用和激素调节作用。介绍了有机溶剂浸提法、碱溶酸沉淀法提取法、微波辅助提取法、超临界CO2萃取法和超声波辅助处理提取法从虎杖等植物中提取白藜芦醇。分析了白藜芦醇的检测方法,包括分光光度法、高效液相色谱法、荧光法等及这些方法的特点。为白藜芦醇的开发利用提供参考资料。

关键词：白藜芦醇药理学提取检测

利用内标为基础的RT-PCR技术检测葡萄茎痘伴随病毒

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园艺学报 2006年第5期33卷 1083-1086页

作者：牛建新李西平赵英张强马兵钢石河子大学农学院园艺系

选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的‘全球红’葡萄品种。以葡萄叶片、韧皮部作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830bp的预期目的片段。以线粒体nad5基因... 详细信息

选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的‘全球红’葡萄品种。以葡萄叶片、韧皮部作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830bp的预期目的片段。以线粒体nad5基因为内标,建立了GRSPaV与nad5共扩增体系,将扩增的GRSPaV特异性片段及nad5目的片段分别克隆测序,与NCBI中所提交的核酸序列进行比对,GRSPaV与序列号AF057136的同源性达96%;nad5与序列号D37958的同源性达96·67%。

关键词：葡萄茎痘伴随病毒 RT-PCR had5 检测

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3种梨树病毒cDNA探针检测

西北农业学报 2006年第2期15卷 54-58页

作者：马兵钢牛建新张虎平石河子大学农学院园艺系新疆兵团绿洲生态农业重点实验室新疆石河子832003

利用Biotin-16-dUTP标记的cDNA探针分子杂交检测分析了新疆梨树上的3种主要病毒(梨环纹花叶病毒、梨脉黄病毒、苹果茎沟病毒)并优化了杂交反应体系。结果表明,这3种病毒探针的检测灵敏度分别为5、10和10 pg。用文中的方法提取的RNA均能... 详细信息

利用Biotin-16-dUTP标记的cDNA探针分子杂交检测分析了新疆梨树上的3种主要病毒(梨环纹花叶病毒、梨脉黄病毒、苹果茎沟病毒)并优化了杂交反应体系。结果表明,这3种病毒探针的检测灵敏度分别为5、10和10 pg。用文中的方法提取的RNA均能在10-3稀释后显色。该方法与RT-PCR方法对样品带毒状况的检测结果一致。

关键词：梨脉黄病毒梨环纹花叶病毒苹果茎沟病毒 cDNA探针