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粘毛黄芩CHS基因植物表达载体的构建及其在烟草中的功能验证

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粘毛黄芩CHS基因植物表达载体的构建及其在烟草中的功能验证

作者：饶灿西南大学

学位级别：硕士

粘毛黄芩(Scutellaria viscidula Bunge)的干燥根是我国常用的中药材之一,其主要的有效成分黄岑苷为黄酮类化合物。目前市场上的黄芩苷供不应求,急需提高它的产量。查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是黄酮类化合物生物合成的第一个... 详细信息

粘毛黄芩(Scutellaria viscidula Bunge)的干燥根是我国常用的中药材之一,其主要的有效成分黄岑苷为黄酮类化合物。目前市场上的黄芩苷供不应求,急需提高它的产量。查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是黄酮类化合物生物合成的第一个关键酶,在黄酮类化合物合成代谢中有着极其重要的作用。由于近年米植物基因工程的应用蓬勃发展,因而通过CHS基因工程提高粘毛黄芩中黄岑苷的含量具有重大的实际意义和广泛的应用前景。本研究是将粘毛黄芩止反义CHS基因构建到植物表达载体pCAMBIA1304+上,得到CHS基因正反义植物表达载体,然后通过遗传转化烟草米验证CHS基因在黄酮类化合物生物合成中的作用。为获得高产黄岑苷的转CHS基因粘毛黄芩植株奠定基础。研究内容如下 ***基因止反义植物表达载体的构建 PCR扩增得到带酶切位点BlgⅡ和BstEⅡ的正义CHS基因schs和反义CHS基因achs,回收片段与pMD18-T连接,得到正反义克隆载体pMD18-schs和pMD18-achs。用BlgII和BstEII双酶切pMD18-schs, pMD18-achs质粒及表达载体质粒pCAMBIA1304+,胶回收,将正反义CHS基因片段利载体大片段分别进行连接,建成正反义中间表达载体pCAMBIA1304+-schs和pCAMBIA1304+-achs。采用冻融法将pCAMBIA1304+-schs和pCAMBIA1304+-achs分别导入农杆菌LBA4404。 2.农杆菌LBA4404介导的CHS基因转化烟草及分子检测取烟草幼嫩无菌叶片,剪成约0.5 cm×0.5cm的小方块,放入制备好的LBA4404菌液中,浸泡5～8min。用无菌滤纸上吸干多余菌液,放在共培养基(MS+1.0mg／L6-BA+0.1mg/LNAA)上暗培养48h。然后转到选择生芽培养基(MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg／L NAA+50mg/LHyg+300mg／L Cef)上进行脱菌选择培养,经过20d左右的光照培养,叶片开始分化出抗性芽。待不定芽长到2～3cm,将其切下放到选择生根培养基(MS+0.1mg／L NAA+25mg／L Hyg+300mg／L Cef)上进行进一步的抗性筛选和生根培养,7天后开始长出不定根。再过二至三周,烟草根系发达,成苗。结果获得转化烟草41株,其中转pCAMBIA1304+-schs(正义)烟草20株,转pCAMBIA1304+-achs(反义)烟草13株,转pCAMBIA1304+(空载体)烟草8株。在转基因烟草植株有3～4片叶时,进行GUS组织化学染色,检测结果为阳性的植株移栽至温室。对GUS检测为阳性且生长较好的转基因烟草植株进行PCR检测,得到5株阳性正义转基因植株,6株阳性反义转基因植株,3株阳性转空载体植株。选取PCR检测为阳性且长势较一致的转基因植株进行RT-PCR检测,与对照(未转化的野生型植株WT和转空载体植株P3)相比,正义转基因植株CS3、CS4和CS6的cDNA都能扩增出1170 bp大小的目的片段ochs,而反义转基因植株CA2、CA4和CA6的cDNA均完全不能扩增出¨目的片段ochs。说明外源止义CHS基因schs在正义转基因植株中已转录为nRNA,使烟草中CHS基因超量表达;而整合到反义转基因烟草基因组的反义CHS基因achs,抑制了烟草CHS基因的表达。 3.转基因烟草总黄酮和芦丁含量的测定以分子检测为阳性的转基因烟草和未转化的野生型烟草(对照)为材料,用紫外分光光度法测定其总黄酮含量,HPLC法测定其芦丁含量。结果显示,转空载体植株与对照的总黄酮和芦丁含量均相近;正义转基因植株中总黄酮含量都高于对照植株,其中CS4的总黄酮含量最高,比对照提高了4mg／g DW左右,与对照相比,CS4的芦丁含量也显著增加：反义转基因植株的总黄酮含量均低于对照植株,其中CA2的总黄酮含量最低,比对照降低了约6mg／gDW,与对照相比,CA2中的芦丁含量也明显降低。说明,CHS基因的表达量直接影响黄酮类化合物的合成量,它是黄酮类化合物生物合成代谢调控的一个重要作用靶点

关键词：粘毛黄芩查尔酮合成酶转基因烟草总黄酮芦丁

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子阵间约束自适应和差单脉冲测角算法

华中科技大学学报（自然科学版） 2013年第9期41卷 6-10页

作者：李荣锋饶灿戴凌燕王永良空军预警学院雷达兵器运用工程军队重点实验室湖北武汉430019 空军预警学院科研部湖北武汉430019

提出了一种子阵间约束自适应和差单脉冲测角算法.该方法先联合各子阵和波束输出进行自适应处理,形成合成的自适应和波束,再对各子阵差波束输出进行自适应处理并同时约束单脉冲比,得到合成的约束差波束.由于在差波束自适应权形成中增加... 详细信息

提出了一种子阵间约束自适应和差单脉冲测角算法.该方法先联合各子阵和波束输出进行自适应处理,形成合成的自适应和波束,再对各子阵差波束输出进行自适应处理并同时约束单脉冲比,得到合成的约束差波束.由于在差波束自适应权形成中增加了全阵列单脉冲比约束,新方法自适应抑制主副瓣干扰的同时还能较好地保持单脉冲比不失真,并克服了子阵自适应处理带来的孔径损失,提高了目标角度的估计精度.计算机仿真实验证明了该方法的有效性.

关键词：子阵约束自适应主瓣干扰单脉冲测角和差波束

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GIS在房屋全生命周期管理中的应用研究

测绘通报 2012年第8期 83-86页

作者：龚杰樊文有饶灿武汉中地数码科技有限公司湖北武汉430074 中国地质大学(武汉)信息工程学院湖北武汉430074

因缺乏空间位置信息,自然房屋与权属信息可能存在一对多的关系,容易导致权属登记错误。为了能在房屋全生命周期中实现以图管房,图、属、档一体化管理,充分运用GIS对图形和属性信息进行科学管理与分析的功能,提出基于GIS的房屋全生命周... 详细信息

因缺乏空间位置信息,自然房屋与权属信息可能存在一对多的关系,容易导致权属登记错误。为了能在房屋全生命周期中实现以图管房,图、属、档一体化管理,充分运用GIS对图形和属性信息进行科学管理与分析的功能,提出基于GIS的房屋全生命周期的综合信息管理体系,在空间数据和非空间数据异化管理的基础上实现了数据的高度共享和一致,为相关主管部门提供了一套便捷的综合信息管理系统,以优化政府部门办公效率、提升公众服务水平。

关键词：产权产籍全生命周期数字房产 GIS

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吡喹酮治疗囊虫病61例

中国新药与临床杂志 1989年第6期 367-368页

作者：饶灿德陈云英云南省大理州血防所云南省大理州血防所大理 671000

吡喹酮治疗猪囊尾蚴病61例,采用总剂量120mg-140mg/kg。全疗程不超过6d。治程中药物反应轻微,仅个别出现颅内高压症;治后0.5-1yr,有效率67％。

关键词：吡喹酮囊尾蚴病地塞米松

平武板状绿柱石{0001}晶面的溶蚀像特征与晶体生长

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矿物学报 2012年第1期32卷 1-8,171页

作者：张良钜阮青锋饶灿桂林理工大学地球科学学院广西桂林541004 广西地质工程中心重点实验室广西桂林541004 南京大学地球科学系江苏南京210093

板状绿柱石产于花岗岩云英岩化边部或晶洞壁的白云母-钠长石-绿柱石-水晶的矿物组合中,钠长石呈自形晶,绿柱石的洁净度与透明度相对较差。晶体测量表明,晶体的单形晶面发育依次为c{0001}→s{11 2-1}→p{10 1-1}→m{10 1-0}→v{21 3-1}、... 详细信息

板状绿柱石产于花岗岩云英岩化边部或晶洞壁的白云母-钠长石-绿柱石-水晶的矿物组合中,钠长石呈自形晶,绿柱石的洁净度与透明度相对较差。晶体测量表明,晶体的单形晶面发育依次为c{0001}→s{11 2-1}→p{10 1-1}→m{10 1-0}→v{21 3-1}、n{45 9-4}、a{11 2-0}。微分干涉显微镜(DIC)及扫描电镜(SEM)研究表明:各单形晶面上生长纹(微形貌)反映面网结构的对称性,c{0001}单形晶面上的六边形溶蚀坑(50～170μm)是由平行晶体C轴的各单形晶面生长层从晶体中心向外叠堆组成,层生长机理制约晶体生长全过程,平行双面(c)的生长层较薄(5～8μm)且较稳定,六方双锥(s)生长层较厚且圆滑,六方柱(m)生长层由晶体中心往外其厚度由厚逐渐变薄(12～20μm),台间隔由窄变宽。晶体溶蚀是从面网密度最大的c{0001}开始,溶蚀面积依平行双面(c)、六方双锥(s)单形晶面由大变小,六方柱(a)、复六方双锥(v、n)单形晶面因面网密度小而未受到溶蚀。据矿物共生组合、流体包裹体均一法测量与拉曼光谱(LRS)分析表明板状绿柱石是在中–高温(303℃)、过饱和度较大、成矿介质的钠长石化发育且热动力环境相对稳定的条件下形成,气液包裹体主要由H2O、CO2及微量CH4、N2组成,CO2及微量CH4、N2可能与碳酸盐围岩有关。

关键词：板状绿柱石表面微形貌层生长机理溶蚀像成因四川平武

新疆阿尔泰协库斯特伟晶岩中锂的矿物学行为及其启示

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高校地质学报 2019年第3期25卷 321-332页

作者：徐遥辰卢奂饶灿浙江大学地球科学学院

协库斯特伟晶岩位于新疆阿尔泰可可托海镇,属于典型的Li-Cs-Ta(LCT)伟晶岩,发育大量锂的磷酸盐矿物和硅酸盐矿物。文章利用电子探针和X射线衍射等分析手段,结合野外观察,系统研究了协库斯特伟晶岩中锂的矿物学行为,探讨花岗质岩浆—热... 详细信息

协库斯特伟晶岩位于新疆阿尔泰可可托海镇,属于典型的Li-Cs-Ta(LCT)伟晶岩,发育大量锂的磷酸盐矿物和硅酸盐矿物。文章利用电子探针和X射线衍射等分析手段,结合野外观察,系统研究了协库斯特伟晶岩中锂的矿物学行为,探讨花岗质岩浆—热液过程中锂矿物的结晶演变与热液蚀变过程。研究表明:协库斯特伟晶岩中锂矿物结晶于两个阶段,花岗质岩浆阶段,锂矿物主要有锂辉石、磷锂铝石与磷锰锂矿,而锂电气石、多硅锂云母、锂白云母等形成于岩浆—热液过渡阶段至热液阶段。磷锰锂矿与羟磷锂铝石团块包体反映协库斯特伟晶岩中锂的磷酸盐熔体与硅酸盐熔体的不混溶机制。磷锰锂矿逐渐蚀变形成黄白色—红色的结构相似的矿物相,揭示了磷锰锂矿的氧化过程以及锂的释放过程。早期锂辉石、磷锰锂矿、磷锂铝石等锂矿物热液蚀变释放出Li进入热液,这种富Li热液作用形成了次生富锂矿物,显示了协库斯特伟晶岩内部Li的地球化学循环过程。

关键词：锂矿物锂的地球化学循环矿物学行为伟晶岩阿尔泰

浙东南吴小垟矿床晚白垩世铌成矿特征及其找矿指示意义

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地质学报 2023年第11期97卷 3825-3845页

作者：丁绵绵车旭东饶灿李晓峰李伟南京大学内生金属矿床成矿机制研究国家重点实验室南京大学地球科学与工程学院江苏南京210023 浙江大学地球科学学院浙江省地学大数据与地球深部资源重点实验室浙江杭州310027 中国科学院地质与地球物理研究所岩石圈演化国家重点实验室北京100029 浙江省第十一地质大队浙江温州325006

稀有金属铌钽在我国华南存在多时代成矿特征,前人对其最晚成矿期晚白垩世成矿事件报道较少。本文以浙东南的吴小垟铌矿床为研究对象,结合野外调查、岩石学、矿物原位微区分析和同位素年代学等研究,确定矿床铌成矿岩体为细粒黑云母花岗岩... 详细信息

稀有金属铌钽在我国华南存在多时代成矿特征,前人对其最晚成矿期晚白垩世成矿事件报道较少。本文以浙东南的吴小垟铌矿床为研究对象,结合野外调查、岩石学、矿物原位微区分析和同位素年代学等研究,确定矿床铌成矿岩体为细粒黑云母花岗岩,成岩成矿年龄分别为89.2±0.8 Ma和86.5±1.0 Ma,揭示了该区存在晚白垩世花岗岩侵位及其相关铌成矿事件。铌除了以独立矿物的形式赋存在铌铁矿、铌铁金红石、铅烧绿石中,还有部分铌赋存于黑云母中。在岩浆-热液作用下,云母类型发生了从铁云母→黑鳞云母→铁锂云母的变化。铁云母Nb含量最高可达1253×10^(-6),黑鳞云母-铁锂云母铌含量最高至794×10^(-6),黑云母极度富铌的特征,指示该花岗岩具有非常好的铌找矿潜力,富铌黑云母可以作为一种铌钽找矿指示性矿物。综合上述矿物学特征,得出吴小垟矿床存在两阶段铌成矿事件:岩浆期原生铌铁矿族矿物、原生富铌黑云母和铌铁金红石的形成;以及后期热液作用下铌从岩浆和原生含铌矿物中迁移出形成次生的含铌氧化物。

关键词：铌矿床铌铁矿U-Pb定年富铌黑云母晚白垩世吴小垟浙东南

福建南平31号花岗伟晶岩脉中绿柱石的电子探针成分与成因

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高校地质学报 2009年第4期15卷 496-505页

作者：饶灿王汝成胡欢南京大学地球科学与工程学院内生金属矿床成矿机制研究国家重点实验室南京210093 桂林理工大学地球科学学院桂林541004

福建南平花岗伟晶岩是中国重要的稀有金属花岗伟晶岩之一,其中31号脉是分异程度最高、稀有金属成矿作用最重要的岩脉,绿柱石是其中最主要的铍矿物。利用电子探针和背散射电子成像技术对该岩脉中绿柱石进行了较系统分析。结果表明,南平3... 详细信息

福建南平花岗伟晶岩是中国重要的稀有金属花岗伟晶岩之一,其中31号脉是分异程度最高、稀有金属成矿作用最重要的岩脉,绿柱石是其中最主要的铍矿物。利用电子探针和背散射电子成像技术对该岩脉中绿柱石进行了较系统分析。结果表明,南平31号花岗伟晶岩中绿柱石可分为原生绿柱石和晚期绿柱石。原生绿柱石形成于早期岩浆阶段,与造岩矿物石英、白云母、钠长石、锂辉石共生。晚期绿柱石与原生绿柱石密切伴生,是富铍流体沿原生绿柱石的边缘结晶而成,或热液沿原生绿柱石的解理、裂隙或孔隙度较大部位进行交代的产物。电子探针成分分析显示,南平31号花岗伟晶岩脉中原生绿柱石除含主要化学成分SiO2,Al2O3和BeO外还含Na,Cs,Fe,Mg等元素;FeO,MgO,Na2O和Cs2O的最高含量分别为0.28%,0.89%,1.36%和3.92%。总体上,从I带至IV带,原生绿柱石的FeO和MgO含量逐渐降低,Na2O和Cs2O的含量逐渐升高,尤其是Cs2O的含量变化较大。III—IV带中少量原生绿柱石分布于锂辉石中,具有富FeO和MgO的特征。晚期绿柱石的Cs2O含量较低,可能是由于铯沸石和南平石(铯云母)等铯矿物的结晶,导致晚期熔体-热液中相对贫铯,而热液流体与富铯绿柱石之间可能存在铯的化学再平衡。

关键词：绿柱石热液流体花岗伟晶岩南平福建

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九龙绿柱石晶体形貌研究

矿物学报 2005年第2期25卷 191-196页

作者：张良钜饶灿雷威桂林工学院资源与环境工程系广西桂林541004

四川九龙绿柱石晶体形态有短柱状、板柱状、扁平板状以及板锥状晶体,晶体上出现的单形有平行双面c{0001}、六方双锥p{1011}s、{1121}、六方柱m{1010}、a{1120}以及复六方双锥v{2131}、n{3141}。利用微分干涉显微镜等手段,对九龙绿柱石... 详细信息

四川九龙绿柱石晶体形态有短柱状、板柱状、扁平板状以及板锥状晶体,晶体上出现的单形有平行双面c{0001}、六方双锥p{1011}s、{1121}、六方柱m{1010}、a{1120}以及复六方双锥v{2131}、n{3141}。利用微分干涉显微镜等手段,对九龙绿柱石晶体进行了形貌研究,发现{0001}{、1121}和{1010}面上具有丰富的表面微形貌。晶面上的六边形溶蚀丘、六边形生长丘、拉长六边形螺旋生长纹和三角生长丘体现了相应面网结构的对称性,螺旋生长纹发生束合、三角形圆化等现象均反映了环境条件的变化。

关键词：绿柱石晶体形貌表面微形貌晶体结构环境条件九龙