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细胞骨架结合蛋白酪氨酸磷酸化在小鼠黑色素瘤细胞分化诱导中的作用

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科学通报 1998年第17期43卷 1842-1846页

作者：颜春洪韩锐中国协和医科大学中国医学科学院药物研究所北京100050

为探讨影响癌细胞分化的因素 ,分析了诱导分化与细胞内蛋白酪氨酸磷酸化的关系 .蛋白酪氨酸激酶抑制剂 genistein诱导B1 6_BL6黑色素瘤细胞分化 .诱导分化前后 ,总蛋白抽提物中磷酸酪氨酸蛋白含量没有明显改变 ;但不溶于TritonX_1 0 0... 详细信息

为探讨影响癌细胞分化的因素 ,分析了诱导分化与细胞内蛋白酪氨酸磷酸化的关系 .蛋白酪氨酸激酶抑制剂 genistein诱导B1 6_BL6黑色素瘤细胞分化 .诱导分化前后 ,总蛋白抽提物中磷酸酪氨酸蛋白含量没有明显改变 ;但不溶于TritonX_1 0 0的细胞骨架结合蛋白的酪氨酸磷酸化水平下降 ,其中明显降低的有 3种蛋白 ( 5 3,6 0和 6 5ku) .表明细胞骨架结合蛋白酪氨酸磷酸化在癌细胞的分化调节中发挥重要作用 .

关键词：酪氨酸磷酸化癌细胞分化黑色素瘤 CAPs

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抗恶性肿瘤转移药的实验研究

中华肿瘤杂志 1996年第6期18卷 479-481页

作者：颜春洪韩锐中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所

纤粘连蛋白诱导卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-2基因表达

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中华肿瘤杂志 2000年第2期22卷 109-112页

作者：颜春洪李春海田方孙丽亚军事医学科学院附属医院肿瘤分子生物学室北京100850

目的　研究细胞外基质蛋白对肿瘤细胞基质金属蛋白酶 (MMP)基因表达的影响及机理。方法　以纤粘连蛋白处理SKOV3卵巢癌细胞后 ,用明胶酶谱法和反转录PCR观察MMP分泌及基因表达。以MMP 2启动子转染细胞 ,通过测定萤火虫酶活性 ,观察纤... 详细信息

目的　研究细胞外基质蛋白对肿瘤细胞基质金属蛋白酶 (MMP)基因表达的影响及机理。方法　以纤粘连蛋白处理SKOV3卵巢癌细胞后 ,用明胶酶谱法和反转录PCR观察MMP分泌及基因表达。以MMP 2启动子转染细胞 ,通过测定萤火虫酶活性 ,观察纤粘连蛋白对MMP 2启动子活性的影响。细胞p5 3含量采用Westernblot分析。结果　 5 μg/mL纤粘连蛋白刺激MMP 2分泌 ,但不影响MMP 9分泌 ,这一作用随纤粘连蛋白浓度增加而增强。经 10 μg/mL纤粘连蛋白刺激 1h后 ,细胞内MMP 2mRNA量显著增加 ;作用时间延长 ,诱导作用减弱。纤粘连蛋白可诱导转染细胞中萤火虫酶活性增加 ,AP 1功能抑制剂姜黄素 (5 0 μmol/L)不能阻断这一作用。经纤粘连蛋白处理后 ,细胞内p5 3含量明显增加。结论　纤粘连蛋白可刺激卵巢癌细胞中MMP 2分泌 ,诱导MMP 2启动子活性增强及mRNA含量增加 ,这一作用可能与p5 3蛋白转录因子活性有关 ,而与AP 1通路无关。

关键词：纤粘连蛋白基质金属蛋白酶卵巢癌细胞

黏附诱导卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-9基因的表达

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中华肿瘤杂志 2002年第1期24卷 17-19页

作者：颜春洪田方肖风君李克勤李春海军事医学科学院附属医院肿瘤分子生物学室北京100039

目的　观察黏附纤黏连蛋白后肿瘤细胞基质金属蛋白酶 (MMP)基因的表达 ,揭示细胞侵袭发生的机理。方法　纤黏连蛋白与A2 780人卵巢癌细胞相互作用后 ,用反转录PCR观察MMPmRNA的表达 ;从HT10 80细胞基因组DNA克隆MMP9启动子区基因 ,构建M... 详细信息

目的　观察黏附纤黏连蛋白后肿瘤细胞基质金属蛋白酶 (MMP)基因的表达 ,揭示细胞侵袭发生的机理。方法　纤黏连蛋白与A2 780人卵巢癌细胞相互作用后 ,用反转录PCR观察MMPmRNA的表达 ;从HT10 80细胞基因组DNA克隆MMP9启动子区基因 ,构建MMP 9 pGL2报告基因载体 ,瞬时转染A2 780细胞 ,通过测定萤火虫酶活性 ,观察纤黏连蛋白对MMP9启动子活性的影响。结果　A2 780细胞不表达MMP基因 ,黏附后细胞内MMP 9mRNA含量明显增加 ,这一作用与黏附时间有关。克隆MMP 9基因启动子并转染细胞 ,黏附后转染细胞内MMP 9基因启动子活性明显增强。结论　细胞细胞外基质黏附可刺激MMP基因转录活性 ,诱导MMP基因表达 ,进而促进细胞侵袭。

关键词：卵巢肿瘤基质金属蛋白酶基因表达黏附纤连蛋白卵巢癌

远缘杂种孤雌生殖系Giemsa C-带的遗传稳定性分析

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Acta Genetica Sinica 1997年第2期24卷 170-177页

作者：颜春洪宋运淳谷明光何锶洁武汉大学生命科学院中国科学院遗传研究所

利用ＧｉｅｍｓａＣ－显带方法发现在玉米自交系自３３０和二倍体多年生类玉米远缘杂交孤雌生殖后代中出现广泛的Ｃ－带结构异染色质变异，表现为Ｃ－带数目和分布位置的变化以及异配型Ｃ－带的出现。这种变异不仅存在于表型不稳定的早... 详细信息

利用ＧｉｅｍｓａＣ－显带方法发现在玉米自交系自３３０和二倍体多年生类玉米远缘杂交孤雌生殖后代中出现广泛的Ｃ－带结构异染色质变异，表现为Ｃ－带数目和分布位置的变化以及异配型Ｃ－带的出现。这种变异不仅存在于表型不稳定的早代孤雌系中，而且还存在于表型稳定的高代系中。造成这种变异的原因可能是因为远缘种质的引入影响到遗传平衡进而引起染色体发生结构重排并引起染色质的变化，这种变化与玉米染色体组中非同源染色体间存在的同源片段和因此造成的减数分裂过程中非同源染色体配对有着直接的关系。这些研究对于认识孤雌生殖育种的理论基础和应用价值具有重要意义。

关键词：遗传稳定性玉米远缘杂交孤雌生殖系 C带

EFFECTS OF GENISTEIN ON INVASION AND MATRIX METALLOPROTEINASE ACTIVITIES OF HT1080 HUMAN FIBROSARCOMA CELLS

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Chinese Medical Sciences Journal 1999年第3期14卷 129-133页

作者：颜春洪韩锐 Institute of Materia Medica CAMS &amp

Effects of genistein on invasion and matrix metalloproteinase activities were investigated in HT1080 human sarcoma *** of HT1080 cells through reconstituted basement membrane was inhibited when the cells were treated with 100 μ mol/L and 200 μ mol/L *** the same concentrations,genistein not only suppressed latent forms of matrix metalloprotinese 2 and 9(MMP 2 and MMP 9) to convert into active forms,but also increase dramatically the tissue inhibitor of metalloproteinase(TIMP 1) mRNA contents and reverse the imbalance of MMPs and ***,expressions of MMP 2 and MMP 9 were not significantly *** of MMP activation and increase of TIMP 1 expression will decrease matrix degradation by MMPs,and consequently inhibit invasions of the *** results emphasized the existence of the imbalance between MMPs and TIMPs in tumor invasion and metastasis *** value of genistein as a drug for antiinvasion and anti metastasis chemotherapy was suggested.

关键词： nvasion matrix metalloproteinases tissue inhibitors of metalloproteinase genistein

Genistein抑制HT1080人纤维肉瘤细胞的体外侵袭作用

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中华肿瘤杂志 1999年第3期21卷 171-174页

作者：颜春洪韩锐中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所北京100050

目的　观察ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ对恶性肿瘤细胞侵袭及侵袭相关性质的影响，探讨蛋白酪氨酸激酶抑制剂用于肿瘤转移治疗的可能性。方法　ＨＴ１０８０细胞经２０ μｍｏｌ／Ｌ或４０ μｍｏｌ／ＬＧｅｎｉｓｔｅｉｎ处理３天后，分别... 详细信息

目的　观察ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ对恶性肿瘤细胞侵袭及侵袭相关性质的影响，探讨蛋白酪氨酸激酶抑制剂用于肿瘤转移治疗的可能性。方法　ＨＴ１０８０细胞经２０ μｍｏｌ／Ｌ或４０ μｍｏｌ／ＬＧｅｎｉｓｔｅｉｎ处理３天后，分别用重建基底膜侵袭模型、粘附基质分析、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室趋化运动模型以及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析来研究药物处理后细胞侵袭、粘附、运动以及基质蛋白酶基因表达的改变。结果　经ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ处理后，ＨＴ１０８０细胞的侵袭能力明显下降，趋化运动能力降低，基质金属蛋白酶抑制剂（ＴＩＭＰ１）基因相对表达量增加，但粘附率没有降低。结论　ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可降低恶性肿瘤细胞的侵袭能力。

关键词： Genistein 纤维肉瘤蛋白酪氨酸激酶肿瘤侵袭

人基质金属蛋白酶-9在酵母Pichia pastoris中的表达

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中国生物化学与分子生物学报 2000年第2期16卷 194-199页

作者：颜春洪李春海田方朱运峰孙丽亚军事医学科学院附属医院北京100850

基质金属蛋白酶 - 9( MMP- 9)可促进恶性肿瘤的侵袭、转移 ,并在组织重建、胚胎发育以及伤口愈合等生理过程中发挥重要作用 .为研究这一蛋白的性质 ,并以之为靶标筛选抗肿瘤转移药物 ,在酵母 Pichia pastoris中实现了重组人 MMP- 9蛋白... 详细信息

基质金属蛋白酶 - 9( MMP- 9)可促进恶性肿瘤的侵袭、转移 ,并在组织重建、胚胎发育以及伤口愈合等生理过程中发挥重要作用 .为研究这一蛋白的性质 ,并以之为靶标筛选抗肿瘤转移药物 ,在酵母 Pichia pastoris中实现了重组人 MMP- 9蛋白的高效、高活性、分泌表达 .首先用 PCR扩增了 MMP- 9基因编码区 (不含信号肽序列 ) ,经测序证实后 ,将其插入 p PIC9质粒中 ,构建表达载体 .用 Li C1 - PEG法转化酵母后 ,采用明胶 -酶谱法筛选获得 5株高效分泌表达 MMP- 9的克隆 ,经PCR证实 MMP- 9基因整合在阳性克隆的染色体中 .重组蛋白分子量为 93k D,表达量为 1 0 mg/L.重组蛋白可水解明胶及型胶原 ,并可经有机汞 APMA诱导发生自剪切 ,转换成 85k D的激活形式 ,表明重组蛋白具有与天然人 MMP- 9蛋白相似的底物水解活性和自剪切激活特性 .

关键词：基质金属蛋白酶-9 酵母表达系统重组蛋白

癌侵袭、转移分子机理与抗转移药物的研究进展

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国外医学（药学分册） 1997年第4期24卷 193-197页

作者：施波颜春洪中国医学科学院

近年来 ,癌侵袭、转移的机理探讨和药物研究取得了明显的进展 ,特别是对肿瘤新血管生成、基质金属蛋白酶以及细胞信号传导紊乱在癌侵袭、转移中的重要作用有了深入的认识。目前已有金属蛋白酶抑制剂 BB94、血管生成抑制剂 TNP 470和钙... 详细信息

近年来 ,癌侵袭、转移的机理探讨和药物研究取得了明显的进展 ,特别是对肿瘤新血管生成、基质金属蛋白酶以及细胞信号传导紊乱在癌侵袭、转移中的重要作用有了深入的认识。目前已有金属蛋白酶抑制剂 BB94、血管生成抑制剂 TNP 470和钙通道拮抗剂CAI进入临床研究 ,为癌侵袭、转移治疗的突破带来了希望。

关键词：癌转移癌侵袭基质金属蛋白酶抑制剂血管生成