检索结果-南通市图书馆

非洲猪瘟病毒CP312R蛋白的真核表达及单克隆抗体制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2024年第3期44卷 445-449,457页

作者：颜世君赵少若郝丽影白露露王同燕邓均华田克恭国家兽用药品工程技术研究中心河南洛阳471000 普莱柯生物工程股份有限公司河南洛阳471000 洛阳普泰生物技术有限公司河南洛阳471000

为制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CP312R蛋白的单克隆抗体,以真核表达ASFV的CP312R蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,并通过间接免疫荧光法(IFA)对获得的单克隆抗体进行反应性鉴定。结果利用杆状病毒表达系... 详细信息

为制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CP312R蛋白的单克隆抗体,以真核表达ASFV的CP312R蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,并通过间接免疫荧光法(IFA)对获得的单克隆抗体进行反应性鉴定。结果利用杆状病毒表达系统(baculovirus expression system,BES)构建获得重组转移载体pOET3-CP312R,与杆状病毒基因组flashBAC^(TM)ULTRA共转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒AcMNPV-CP312R,且该病毒以胞内可溶形式表达出重组ASFV CP312R蛋白质。通过蛋白质印迹法鉴定显示重组CP312R蛋白可以与ASFV阳性血清发生特异性反应。此外,筛选获得2株针对重组CP312R蛋白的单克隆抗体(McAb),间接ELISA方法鉴定抗体滴度不低于1∶1024000。IFA试验检测表明,单克隆抗体与非洲猪瘟抗原发生特异性反应。本研究为非洲猪瘟亚单位疫苗研发及血清学检测方法的建立提供物质储备。

关键词：非洲猪瘟 CP312R蛋白重组杆状病毒单克隆抗体间接ELISA

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

项目质量管理在电梯安装项目中的应用

项目质量管理在电梯安装项目中的应用

作者：颜世君天津大学

学位级别：硕士

21世纪世界发展迅速,各国科技和社会竞争已趋于白热化,随着我国城市化水平的不断提高,科学技术的进步和社会的发展,各行各业的竞争都演变的越来越激烈,对于工程建设领域,也变的复杂多样。人们日益关注和重视的问题是如何在规定的时间期... 详细信息

21世纪世界发展迅速,各国科技和社会竞争已趋于白热化,随着我国城市化水平的不断提高,科学技术的进步和社会的发展,各行各业的竞争都演变的越来越激烈,对于工程建设领域,也变的复杂多样。人们日益关注和重视的问题是如何在规定的时间期限内,按照预定的计划,保证质量的完成某项任务,来获得最大的经济效益。电梯安装项目是用于生产的专业建筑项目,是为了满足社会生产的需要,围绕最终建筑产品进行生产经营活动,制造出适用、安全、经济、环保的各类电梯。到了今日,电梯业在自己的产品生产上和经营管理上形成了一定的特点。电梯安装项目管理是一项系统工程,哪一个环节出问题势必对整个系统产生不利影响。因此,不能孤立地看待某一个环节。应以项目管理为中心,把项目管理涉及的多个环节作为系统工程来研究和处理。电梯企业应以企业的内部管理机制为切入点,逐步改变不适应科学项目管理的习惯作法,从管理的观念、方法、组织和手段方面积极创造条件,加速与国际项目管理体制的接轨,带动和促进企业管理水平的提高,从而提高企业市场竞争能力和持续盈利能力。电梯安装工程施工质量管理涉及多方面,且自始至终贯穿于安装施工的全过程。合理的质量控制问题要以预防为主,关键在于思想观念的转变,要将先前只对质量问题的事后检查把关,转向为对质量的事前预控、过程控制中,最后才是事后检测。唯有认真把好每一道电梯安装工序、每一个电梯安装环节质量关,才能保证整体工程的质量。同时提高监督工程师的素质,也是提高电梯安装质量不可忽视的环节。本文系统地介绍了项目、项目管理和项目质量管理基本概念和管理方法,并分析研究了项目质量管理中所涉及到的项目质量策划、项目质量控制和项目质量改进等问题。最后通过实际案例对天津站交通枢纽电梯安装项目的质量管理进行了系统分析。

关键词：项目管理项目质量管理电梯质量控制

重组新城疫病毒NDV-rAnh/EGFP的构建及其抑制肿瘤效果的研究

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

重组新城疫病毒NDV-rAnh/EGFP的构建及其抑制肿瘤效果的研究

作者：颜世君东北农业大学

学位级别：硕士

癌症是人类死亡的主要病因。在临床癌症治疗中,传统的化疗和放疗治疗疗效有限,并具有强烈的毒副作用,促使科研学者寻找新的肿瘤治疗手段。应用溶瘤病毒治疗肿瘤是近年来发展非常迅速的一种肿瘤治疗策略。新城疫病毒（Newacstle disease ... 详细信息

癌症是人类死亡的主要病因。在临床癌症治疗中,传统的化疗和放疗治疗疗效有限,并具有强烈的毒副作用,促使科研学者寻找新的肿瘤治疗手段。应用溶瘤病毒治疗肿瘤是近年来发展非常迅速的一种肿瘤治疗策略。新城疫病毒（Newacstle disease virus,NDV）为单股负链RNA病毒,隶属副粘病毒科禽副粘病毒属。NDV能够选择性在肿瘤细胞内复制,而对人正常细胞无明显影响。因此,目前新城疫病毒作为溶瘤病毒正在被广泛地应用于肿瘤治疗。而反向遗传学操作技术的应用使得通过对病毒基因组的改造进一步增加病毒的疗效及安全性成为可能。新城疫病毒Anhinga株最早是在美国佛罗里达州动物园圈养的鸟类中发现的,属于中等毒力株。目前,尚未有Anhinga株应用于肿瘤治疗的研究报告。本研究主要探讨利用反向遗传操作技术构建的重组新城疫病毒Anhinga株在癌症治疗中的有效性。首先在HN基因和L基因之间插入了增强型绿色荧光蛋白基因的开放阅读框,并同时添加了相应的转录调控序列GE和GS,最终构成了带有EGFP基因的NDV全长cDNA。携带全长cDNA的转录质粒与分别表达核衣壳蛋白、磷酸化蛋白、大聚合酶蛋白的辅助质粒共同转染能够稳定表达T7 RNA聚合酶的BSRT7/5细胞。拯救得到表达增强型绿荧光蛋白的重组新城疫病毒NDV-rAnh/EGFP首先通过鸡胚进行增殖并收获尿囊液。通过观察EGFP在NDV-rAnh/EGFP感染的活细胞中（BSRT7/5）的表达情况证实表达外源基因的重组新城疫病毒拯救成功。将NDV-rAnh/EGFP在鸡胚中连续传代15代,鉴定得知所插入的重组新城疫病毒外源基因可以持续稳定的表达。在HepG-2细胞中进行的重组病毒增殖实验表明,外源基因片段EGFP的插入并未对病毒的增殖造成影响。在体外实验中,利用MTT方法检测不同病毒滴度NDV-rAnh/EGFP对几种肿瘤细胞的抑制作用。结果表明,NDV-rAnh/EGFP可以有效地抑制肿瘤细胞的生长。但是,对于不同肿瘤细胞,抑制效果大不相同。NDV-rAnh/EGFP对肿瘤的抑制作用呈现剂量依赖性并且与病毒本身在不同肿瘤细胞中的复制能力有关。为了在体内试验中检测重组NDV-rAnh/EGFP对肿瘤的抑制作用,建立昆明小鼠H22腹水瘤模型和H22皮下实体瘤模型,分别通过腹腔注射和瘤内注射NDV-rAnh/EGFP治疗肿瘤,结果表明重组新城疫病毒可以有效延长H22腹水瘤模型小鼠的生存时间,抑制H22肝癌实体瘤生长。综上所述,本实验应用反向遗传操作技术,成功拯救重组新城疫病毒NDV-rAnh/EGFP株。在体外实验中证实NDV-rAnh/EGFP能够有效的杀伤多种肿瘤细胞,且对不同肿瘤细胞的抑制作用不同。同时在体内实验中,重组新城疫病毒也表现出良好的治疗效果。本研究为重组新城疫病毒作为病毒疫苗载体应用于肿瘤治疗搭建了重要的技术平台。

关键词：重组新城疫病毒反向遗传操作技术加强型绿色荧光蛋白肿瘤细胞荷瘤鼠模型

表达PEDV S1蛋白重组PRV的构建与鉴定

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2023年第8期53卷 1003-1009页

作者：侯晓璇穆永王彪王同燕颜世君王孟月谭菲菲田克恭河南农业大学动物医学院河南郑州450046 国家兽用药品工程技术研究中心河南洛阳471000 普莱柯生物工程股份有限公司河南洛阳471000

为了有效预防PED的感染,本研究将PEDV流行毒株的S1基因克隆至pcDNA3.1(+)载体中构建真核表达质粒,经鉴定S1蛋白表达后,获得S1基因表达盒,再将S1基因表达盒克隆至含有gG基因上下游同源臂以及抗性筛选基因的转移质粒PUC-ABK中,构建供体质... 详细信息

为了有效预防PED的感染,本研究将PEDV流行毒株的S1基因克隆至pcDNA3.1(+)载体中构建真核表达质粒,经鉴定S1蛋白表达后,获得S1基因表达盒,再将S1基因表达盒克隆至含有gG基因上下游同源臂以及抗性筛选基因的转移质粒PUC-ABK中,构建供体质粒PUC-ABK-CMV-S1,获得线性同源重组片段A-CMV-S1-K-B。利用Red同源重组技术将线性同源重组片段电转化至含有pPRVBac-GFP-TK--gE--gI--US9--2-的感受态中获得重组pPRVBac-S1,最后拯救获得重组病毒rPRV-S1。PCR及IFA鉴定结果显示S1基因成功转录且表达,为研制PEDV活载体疫苗提供了实验依据。

关键词： PEDV S1蛋白 Red同源重组重组PRV

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

塔器吊装经济性的探讨

石油施工技术 1981年第3期 37-40页

作者：颜世君石油部第一工程公司

炼油装置的安装中心是大型塔器的吊装,为了高速、优质、经济、安全地进行塔器吊装,首先要了解炼油装置塔器吊装的三个突出特点:1.塔器设备高、重、大,因此吊装机具要有一定的高度和很大的起重能力,同时又要求占地面积小,便于拆移和装卸... 详细信息

炼油装置的安装中心是大型塔器的吊装,为了高速、优质、经济、安全地进行塔器吊装,首先要了解炼油装置塔器吊装的三个突出特点:1.塔器设备高、重、大,因此吊装机具要有一定的高度和很大的起重能力,同时又要求占地面积小,便于拆移和装卸。2.因塔器吊装工艺难度大,属薄壳筒体结构,所以塔器的整体和局部稳定性差。3.施工中塔器吊装要先行,要求时间短,施工组织比较复杂。上述三个特点中,塔器的高、重、大是吊

关键词：吊装机具吊装工艺塔器塔设备分离设备桅杆式起重机桅杆起重机整体吊装减压塔经济性

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

山阳煤矿依法治企促进企业转型发展

山阳煤矿依法治企促进企业转型发展

第五届世纪之星创新教育论坛

作者：颜世君陕西澄合山阳煤矿有限公司

一、山阳煤矿依法治企的五条实践路径山阳煤矿在学习贯彻党的十八届四中全会精神,认真学习领会习总书记提出的四个全面战略的过程中敏锐地认识到——市场经济是法治经济,要想在煤炭行业面临的"四期叠加"的困局中成功突围,就必须坚持走...

一、山阳煤矿依法治企的五条实践路径山阳煤矿在学习贯彻党的十八届四中全会精神,认真学习领会习总书记提出的四个全面战略的过程中敏锐地认识到——市场经济是法治经济,要想在煤炭行业面临的"四期叠加"的困局中成功突围,就必须坚持走依法治企之路,只有通过依法治企,企业的改革才能少走弯路,经营转型才能够顺利迈向结构调整的新常态,依法治企是时代发展的必然选择。于是,山阳煤矿以法治为引领,从建立三个层面的全员普法教育的长效机制,制定适应

关键词：

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

主要禽用灭活疫苗种类及其应用

中国兽药杂志 2012年第B7期46卷 104-108页

作者：颜世君白朝勇国家兽用药品工程技术研究中心生物制品研究所洛阳471003 普莱柯生物工程股份有限公司洛阳471003

禽用灭活苗是当代养禽业中最常用的疫苗,但在实际应用时,往往因使用不当造成免疫失败等结果,给养禽业造成巨大损失。以禽流感、新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病、减蛋综合征、传染性脑脊髓炎、传染性鼻炎的代表性灭活疫苗为例,... 详细信息

禽用灭活苗是当代养禽业中最常用的疫苗,但在实际应用时,往往因使用不当造成免疫失败等结果,给养禽业造成巨大损失。以禽流感、新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病、减蛋综合征、传染性脑脊髓炎、传染性鼻炎的代表性灭活疫苗为例,介绍了各类常用灭活疫苗的特征、免疫剂量、免疫方法,并给出参考免疫程序,供禽养殖户借鉴参考。

关键词：禽用灭活疫苗应用

H9N2亚型禽流感病毒样颗粒制备及免疫原性评价

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国动物传染病学报 2023年第1期31卷 34-40页

作者：王同燕王玉娟仝晓丹张盼涛沈萌薛景景宋欢欢盛东北颜世君李胜强谭菲菲刘武杰田克恭国家兽用药品工程技术研究中心洛阳471003 普莱柯生物工程股份有限公司洛阳471000 洛阳普泰生物技术有限公司洛阳471003

H9N2亚型禽流感病毒近年来在家禽中普遍发生,可造成蛋鸡产蛋量下降,肉鸡复合型呼吸道疾病,给养禽业造成了巨大的经济损失。本研究筛选保护谱广的H9N2亚型禽流感病毒流行株的HA、NA、M1基因,以共表达的方式构建重组杆状病毒。通过血凝活... 详细信息

H9N2亚型禽流感病毒近年来在家禽中普遍发生,可造成蛋鸡产蛋量下降,肉鸡复合型呼吸道疾病,给养禽业造成了巨大的经济损失。本研究筛选保护谱广的H9N2亚型禽流感病毒流行株的HA、NA、M1基因,以共表达的方式构建重组杆状病毒。通过血凝活性检测、Western blot杂交、电镜观察等方法对蛋白表达及病毒样颗粒的组装进行鉴定。结果表明,构建的重组杆状病毒可同时表达HA、NA和M1蛋白,且表达的蛋白具有良好的血凝活性,电镜观察可见约100 nm的病毒样颗粒。将表达的蛋白制备油乳剂亚单位疫苗并免疫SPF鸡,免疫后诱导的HI抗体与全病毒灭活疫苗的HI抗体效价水平相当,且对异源毒株具有良好的交叉保护。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒样颗粒杆状病毒表达系统免疫原性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

伪狂犬病病毒gE基因在昆虫细胞中的表达

中国兽医科学 2016年第2期46卷 180-184页

作者：周金龙王同燕颜世君谭菲菲张许科河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 国家兽用药品工程技术研究中心河南洛阳471003

为获得具有天然活性的伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白,建立PRV gE抗体快速检测方法,将PRV gE基因克隆至p Fast Bac/HBM-TOPO载体,并转化含有杆状病毒穿梭质粒的DH10Bac E.coli,通过三重抗性和蓝白斑筛选,得到含有PRV gE基因的重组Bacmid,将其... 详细信息

为获得具有天然活性的伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白,建立PRV gE抗体快速检测方法,将PRV gE基因克隆至p Fast Bac/HBM-TOPO载体,并转化含有杆状病毒穿梭质粒的DH10Bac E.coli,通过三重抗性和蓝白斑筛选,得到含有PRV gE基因的重组Bacmid,将其转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。然后分别用间接免疫荧光、SDS-PAGE和Western-blot对表达蛋白进行鉴定和分析,结果表明,gE蛋白在杆状病毒表达系统中得到成功表达,并且具有良好的反应原性,这为建立PRV gE抗体快速检测方法提供了良好的抗原。

关键词：伪狂犬病病毒 gE基因杆状病毒表达