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人骨髓间充质干细胞向角膜上皮干细胞分化的初步研究

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人骨髓间充质干细胞向角膜上皮干细胞分化的初步研究

作者：顾绍峰中国医科大学

学位级别：硕士

目的骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是存在于骨髓中的成体干细胞群,具有高度自我更新能力和多向分化潜能。虽然目前人们还没有发现MSCs高度特异的表面标记抗原,但其表面有多种特异性抗原,以及多种细胞因子和生长因子... 详细信息

目的骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是存在于骨髓中的成体干细胞群,具有高度自我更新能力和多向分化潜能。虽然目前人们还没有发现MSCs高度特异的表面标记抗原,但其表面有多种特异性抗原,以及多种细胞因子和生长因子受体的表达。如SH-2、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a、Stro-1等,其中作为造血细胞典型的表面抗原CS45、CD34和CD14呈阴性表达。 MSCs的多向分化潜能已经在很多体内外试验中得到验证。2002年,Poulsom等发现MSCs可分化为机体三个胚层几乎所有的组织,包括:脑、肝、肾、脾、骨、血液、视网膜、皮肤等等,这种强大的分化能力远远超出了人们的想象。MSCs的这一特性,暗示人们它在机体组织损伤修复过程中具有潜在的重大应用价值。正常角膜表面由角膜上皮所覆盖,表层上皮细胞的不断脱落和基底层细胞的不断增殖处于一种动态平衡状态。研究发现这一动态平衡的维持有赖于角膜缘基底层的一种成体干细胞——角膜上皮干细胞(Corneal epithelial stem cells,CESCs)。CESCs是角膜上皮细胞脱落更新的源泉,它通过自身的增殖和分化,引起邻近上皮细胞的向心性移动,使脱落死亡的细胞不断得以补充,从而维持了整个眼表结构和功能的完整。虽然人们认为角膜缘基底处的某些细胞是干细胞,但目前还没有发现CESCs的特异性标记物。在实验和临床工作中较为常用方法是,利用CK3和CK19免疫组化染色法对CESCs进行标记。当角膜缘受损,引起CESCs缺乏或功能缺陷时,就会发生持续性角膜上皮糜烂,角膜结膜上皮化,新生血管长入和假性翼状胬肉形成等一系列病理改变,给患者带来巨大的痛苦,甚至最终导致失明。随着CESCs理论研

关键词：人骨髓间充质干细胞人角膜上皮干细胞分化细胞融合

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利用长期气象预报资料进行水库优化调度

人民长江 2002年第3期33卷 44-46页

作者：吴建国顾绍峰湖北省黄龙滩水力发电厂水工分场湖北十堰442005

黄龙滩水电厂位于汉江流域上游的堵河干流上 ,坝址流域面积 1114 0km2 ,多年平均径流量 60 .2亿m3 。利用历史资料和现有气象预报条件 ,建立降雨径流之间确定性模型 ,利用中长期降雨预报资料来推求径流 ,再引用动态规划法计算和制定长... 详细信息

黄龙滩水电厂位于汉江流域上游的堵河干流上 ,坝址流域面积 1114 0km2 ,多年平均径流量 60 .2亿m3 。利用历史资料和现有气象预报条件 ,建立降雨径流之间确定性模型 ,利用中长期降雨预报资料来推求径流 ,再引用动态规划法计算和制定长期调度计划 ,选用丰水年 (2 0 0 0 )巫溪气象台、枯水年 (1999)十堰气象台两个代表年份的预报降雨资料推求水库径流过程 ,应用动态规划法编制水库优化调度计划 ,与综合法编制的水库调度计划以及实际调度过程作对比分析。预报法编制的优化调度计划较综合法更为科学合理 ,能够指导生产实践。

关键词：水库优化调度降雨径流气象预测资料黄龙滩水电站

共聚焦显微镜下后部多形性角膜营养不良的影像学特征

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中华眼科杂志 2022年第2期58卷 103-111页

作者：顾绍峰彭荣梅肖格格洪晶北京大学第三医院眼科眼部神经损伤的重建保护与康复北京市重点实验室北京100191

目的探讨后部多形性角膜营养不良(PPCD)在共聚焦显微镜下的影像学特征。方法回顾性病例系列研究。收集2013年1月至2019年12月期间在北京大学第三医院眼科诊断为PPCD的18例(27只眼)患者资料,其中男性10例,女性8例。年龄(23.61±14.81)岁... 详细信息

目的探讨后部多形性角膜营养不良(PPCD)在共聚焦显微镜下的影像学特征。方法回顾性病例系列研究。收集2013年1月至2019年12月期间在北京大学第三医院眼科诊断为PPCD的18例(27只眼)患者资料,其中男性10例,女性8例。年龄(23.61±14.81)岁。单眼和双眼发病的患者各9例。所有患者均行裂隙灯显微镜和共聚焦显微镜检查,分析视力、角膜内皮细胞密度及不同分型PPCD在共聚焦显微镜下的影像学特征。结果患眼最佳矫正视力为0.76±0.33,角膜内皮细胞密度为(1723.6±698.3)个/mm2。1型PPCD的主要共聚焦显微镜下影像学表现:Descemet膜可见鳞片状或同心圆状高反光区及圆形或椭圆形低反光暗区,角膜内皮层可见"弹坑状"或"火山口状"暗区;2型PPCD主要表现:Descemet膜条带状、片状高反光,可伴纤维条索样改变以及囊泡状低反光暗区,角膜内皮层可见脊状结构和沟槽状暗区;3型PPCD表现:角膜内皮细胞失去正常六边形的形态,呈上皮细胞样化生。结论PPCD主要累及Descemet膜和角膜内皮层,使用共聚焦显微镜可观察到Descemet膜高反光增厚、角膜内皮层暗区及角膜内皮细胞的上皮样化生等独特的影像学特征,是临床诊断及动态监测PPCD的重要方法。

关键词：角膜营养不良,遗传性显微镜检查,共焦角膜后弹力层内皮,角膜

猪急性创面不同部位组织匀浆液对体外培养的成纤维细胞凋亡的影响及其机制

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中国修复重建外科杂志 2005年第1期19卷 6-9页

作者：李金清付小兵孙同柱顾绍峰都义日解放军总医院304临床部全军创伤修复重点实验室

目的　探讨猪急性创面不同部位组织匀浆液对体外培养的成纤维细胞 (fibroblast,FB)凋亡的影响。　方法　在 6只小型猪的背部造成直径 4 cm的圆形全层皮肤缺损创面 ,用取下的真皮组织进行 FB原代培养。在创面形成后第 15天 ,取创面中心... 详细信息

目的　探讨猪急性创面不同部位组织匀浆液对体外培养的成纤维细胞 (fibroblast,FB)凋亡的影响。　方法　在 6只小型猪的背部造成直径 4 cm的圆形全层皮肤缺损创面 ,用取下的真皮组织进行 FB原代培养。在创面形成后第 15天 ,取创面中心及边缘新生上皮下的组织匀浆 ,离心后将上清液 - 70℃冰箱保存备用。用第 4代 FB进行实验 ,根据培养液的不同分成 7组 : 组 :DMEM+5 %胎牛血清 ; 组 :DMEM+5 %创面中心组织匀浆液 ; 组 :DMEM+5 %创面边缘组织匀浆液 ; 组 :DMEM+5 %创面中心组织匀浆液 +10μg/ ml广谱基质金属蛋白酶抑制剂 (GM6 0 0 1) ; 组 :DMEM+5 %创面边缘组织匀浆液 +10μg/ ml GM6 0 0 1; 组 :DMEM+5 %创面中心组织匀浆液 +10 ng/ ml酸性成纤维细胞生长因子 (acid fibroblast growth factor,a FGF) ; 组 :DMEM+5 %创面边缘组织匀浆液 +10 ng/ ml a FGF。在上述培养液中培养 16 h,均采用同一动物的匀浆液处理该动物来源的 FB(n=6 )。采用 PI和标记 FITC的 Annexin 作为探针 ,利用流式细胞仪检测细胞凋亡。　结果　各组细胞凋亡率分别为 : 组 4 .39%± 0 .4 1% , 组 10 .98%±1.4 2 % , 组 13.4 7%± 1.4 4 % , 组 7.2 %± 0 .4 6 % , 组 12 .1%± 0 .85 % , 组 3.9%± 0 .6 3% , 组 9.8%± 0 .5 0 % ;

关键词：创面组织匀浆液心组织 FB DMEM 凋亡体外培养 FGF 培养液成纤维细胞

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人皮肤成纤维细胞的培养和鉴定

中国危重病急救医学 2005年第2期17卷 89-91,F006页

作者：李海红周岗付小兵屈振亮孙同柱顾绍峰解放军总医院三○四临床部全军创伤修复重点实验室

目的　探索和建立人皮肤成纤维细胞体外分离、培养及鉴定的技术方法。方法　通过酶消化法分离人皮肤外分泌汗腺 ,在外分泌汗腺生长的同时 ,成纤维细胞也在生长 ;用质量分数为 0 .2 5 %的胰酶和0 .0 2 %的乙二胺四乙酸 (EDTA)消化分离汗... 详细信息

目的　探索和建立人皮肤成纤维细胞体外分离、培养及鉴定的技术方法。方法　通过酶消化法分离人皮肤外分泌汗腺 ,在外分泌汗腺生长的同时 ,成纤维细胞也在生长 ;用质量分数为 0 .2 5 %的胰酶和0 .0 2 %的乙二胺四乙酸 (EDTA)消化分离汗腺细胞和成纤维细胞 ;以 Dulbecco改良的 Eagle培养液 (DMEM)为基础培养基 ,添加胎牛血清 (体积分数 10 % )、青霉素 (10 0 k U/ L)和链霉素 (10 0 mg/ L) ,置 37℃、体积分数为 5 % CO2 、95 %空气、饱和湿度条件下培养。倒置相差显微镜和苏木素伊红染色 ,观察成纤维细胞形态 ,并对培养细胞行波形蛋白免疫组化及染色体鉴定。结果　分离的成纤维细胞可在体外快速贴壁生长、增殖 ,波形蛋白免疫组化染色为阳性 ,染色体分析为 4 6条。结论　该方法所获得的皮肤成纤维细胞可在体外稳定培养 ,为在细胞水平上研究伤口愈合的机制提供了充足、可靠的靶细胞。

关键词：皮肤成纤维细胞细胞培养免疫组化染色体细胞分离

体外诱导人骨髓间充质干细胞向角膜上皮细胞分化的初步研究

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眼科研究 2008年第7期26卷 512-516页

作者：顾绍峰付小兵洪晶北京大学第三医院北京大学眼科中心 100083 解放军304医院全军烧伤研究所基础部北京100039

目的探讨在体外损伤微环境下,人骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为角膜上皮细胞的可行性。方法体外分离培养人MSCs和人角膜缘干细胞(LSCs),检测细胞CD34、CD44、细胞角蛋白3(CK3)、细胞角蛋白19(CK19)的表达情况。制作人LSCs热损伤模型,加... 详细信息

目的探讨在体外损伤微环境下,人骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为角膜上皮细胞的可行性。方法体外分离培养人MSCs和人角膜缘干细胞(LSCs),检测细胞CD34、CD44、细胞角蛋白3(CK3)、细胞角蛋白19(CK19)的表达情况。制作人LSCs热损伤模型,加入增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)标记的人MSCs共同培养,2周后检测细胞CK19的表达情况。结果人MSCsCD44表达阳性、CD34表达阴性,流式细胞术显示CD44阳性率为92.59%,CD34阳性率为0.01%;人LSCsCK19表达阳性,CK3表达阴性。共同培养后部分人MSCsCK19表达阳性,并有多核细胞现象。结论在损伤微环境下,人MSCs可以转化为类角膜上皮细胞的细胞,在此过程中存在细胞融合现象。

关键词：人骨髓间充质干细胞人角膜缘干细胞转化细胞融合

潘口水库蓄水运行对黄龙滩水电厂中长期发电调度的影响

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水电能源科学 2013年第10期31卷 42-46,29页

作者：梁犁丽袁林山胡宇丰李匡顾绍峰中国水利水电科学研究院北京中水科水电科技开发有限公司北京100038 湖北黄龙滩水力发电厂湖北十堰442005

堵河中下游的潘口水库正常蓄水运行后,将会对下游的黄龙滩水电厂发电调度产生较大影响。在潘口水库调度方式确定的情况下,利用有、无对比法,采用调度图和离散微分动态规划算法,研究了潘口水库正常蓄水运行后在丰、平、枯三个典型年对黄... 详细信息

堵河中下游的潘口水库正常蓄水运行后,将会对下游的黄龙滩水电厂发电调度产生较大影响。在潘口水库调度方式确定的情况下,利用有、无对比法,采用调度图和离散微分动态规划算法,研究了潘口水库正常蓄水运行后在丰、平、枯三个典型年对黄龙滩水电厂中长期发电调度的影响。结果表明,潘口水库的调蓄可明显提高平水年黄龙滩水电厂的发电量,降低其年发电耗水率;对于丰水年和枯水年,潘口水库调度期期初水位高于345m时也可在一定程度上提高其发电效益;在潘口水库调度期期初水位低于345m时,黄龙滩水电厂宜采用优化调度方式,并尽量提高其期初水位至245m以上。

关键词：调度图离散微分动态规划法有无对比法潘口水库黄龙滩水电厂

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兔骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定

中国医科大学学报 2008年第1期37卷 4-5页

作者：邢承忠洪晶顾绍峰韩靖颐中国医科大学附属第一医院肿瘤外科沈阳110001 北京大学第三医院眼科中心北京100083 中国医科大学附属第一医院眼科沈阳110001

目的探讨兔骨髓间充质干细胞分离、培养和鉴定的方法,比较与人骨髓间充质干细胞表面抗原表达的差异。方法梯度离心法提取兔骨髓中的间充质干细胞,常规贴壁生长,免疫组化和流式细胞的方法检测细胞CD44、CD29、CD34的变化。结果培养的细... 详细信息

目的探讨兔骨髓间充质干细胞分离、培养和鉴定的方法,比较与人骨髓间充质干细胞表面抗原表达的差异。方法梯度离心法提取兔骨髓中的间充质干细胞,常规贴壁生长,免疫组化和流式细胞的方法检测细胞CD44、CD29、CD34的变化。结果培养的细胞呈纤维状、克隆样生长;免疫组化表明CD29、CD44呈阳性表达,CD34呈阴性表达,流式细胞的结果表明90.26%的细胞表达CD29,89.76%的细胞表达CD44,仅有5.15%的细胞表达CD34。结论兔骨髓间充质干细胞表面抗原的部分表达与人相同,可用于相关的基础研究。

关键词：兔间充质干细胞表面抗原

DSAEK手术植片厚度和大小对角膜内皮细胞密度的远期影响

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中华实验眼科杂志 2022年第12期40卷 1164-1169页

作者：顾绍峰彭荣梅肖格格冯云洪晶北京大学第三医院眼科、眼部神经损伤的重建保护与康复北京市重点实验室北京100191

目的探讨角膜后弹力层剥除联合自动角膜刀取材内皮移植术(DSAEK)供体中央植片厚度(CGT)和大小对角膜内皮细胞密度(ECD)的远期影响。方法采用系列病例观察研究,收集2013年1月至2017年12月因角膜内皮功能失代偿在北京大学第三医院眼科中... 详细信息

目的探讨角膜后弹力层剥除联合自动角膜刀取材内皮移植术(DSAEK)供体中央植片厚度(CGT)和大小对角膜内皮细胞密度(ECD)的远期影响。方法采用系列病例观察研究,收集2013年1月至2017年12月因角膜内皮功能失代偿在北京大学第三医院眼科中心接受DSAEK手术并严格完成2年或以上随访的患者134例144眼。采用角膜内皮镜测量术前供体ECD;术后1、3、6、12和24个月,采用激光扫描共聚焦显微镜测量术后ECD,计算角膜内皮细胞丢失率;采用眼前节光相干断层扫描仪测量供体CGT。根据术后3个月供体CGT将患者分为薄植片组45眼、中等厚植片组66眼和厚植片组33眼,分别为供体CGT0.05)。Spearman相关性分析显示,术后24个月时ECD与术前供体植片ECD呈强正相关(r_(s)=0.783,P<0.001),与供体植片大小和CGT均无明显相关性(r_(s)=0.141,P=0.093;r_(s)=-0.044,P=0.600)。结论术前供体植片ECD越大,术后ECD越大;供体植片越薄、直径越大,DSAEK术后远期角膜内皮细胞丢失率越低。

关键词：角膜内皮细胞角膜内皮细胞丢失角膜内皮细胞密度角膜后弹力层剥除内皮移植术供体植片厚度供体植片大小