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转导JAK2基因可促进原始多能造血细胞在体外的长期扩增

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中华医学杂志 2004年第11期84卷 949-953页

作者：赵声明常乃柏顾惜春北京医院血液科 100730

目的　探讨激活JAK2信号通路是否能够长期扩增调控造血干祖细胞并评价扩增细胞的定向分化潜能。方法　构建克隆 1个含有JAK2基因和二聚化化学诱导物 (AP2 0 187)结合位点所组成的逆转录病毒载体。AP2 0 187可以使JAK2二聚化激活细胞内... 详细信息

目的　探讨激活JAK2信号通路是否能够长期扩增调控造血干祖细胞并评价扩增细胞的定向分化潜能。方法　构建克隆 1个含有JAK2基因和二聚化化学诱导物 (AP2 0 187)结合位点所组成的逆转录病毒载体。AP2 0 187可以使JAK2二聚化激活细胞内信号传导。将该载体转入小鼠原始骨髓造血细胞 ,在无血清培养基中 ,将JAK2转基因的细胞分为 :①空白对照组 ,②AP2 0 187组 ,③细胞因子联合组 [干细胞因子 (SCF) +Flt3 配体 (Flt3 L) ],④AP2 0 187+SCF +Flt3 L组。对扩增的细胞进行免疫表型、定向分化、造血祖细胞集落分析及脾集落形成单位的研究。结果　只有AP2 0 187+SCF+Flt3 L组能够使JAK2转基因的骨髓细胞持续大量对数级增殖。约 8d时 ,细胞数量可以达到扩增前的 10 19倍。扩增的细胞经流式细胞仪检测为 :Sca1阳性细胞为 5 2 %～ 98% ,C kit阳性率为 5 6 %～6 9 % ,CD34阳性率 4 0 %～ 85 % ;而其他表型TER119阳性 0～ 2 0 % ,CD4 1阳性 5 %～ 36 % ,B2 2 0阳性12 %～ 4 6 % ,Gr1阳性 6 %～ 17% ,CD11b阳性 35 %～ 4 6 % ,CD3为阴性。扩增细胞在SCF/粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF) /白介素 (IL) 3条件下 ,可分化形成明显的粒细胞和巨噬细胞 ;在SCF/红细胞生成素 (EPO)条件下 ,可分化为红细胞 ;

关键词：转导JAK2基因原始多能造血细胞体外扩增造血干细胞基因扩增定向分化

基因重组人粒细胞集落刺激因子在急性白血病化疗后的临床应用

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中国肿瘤临床 1999年第10期26卷 767-768页

作者：赵声明顾惜春臧华魏建萍范云卫生部北京医院血液科北京市100730 解放军302医院

目的：急性白血病，大剂量化疗后，白细胞平均降至１．０３３ ×１０９／Ｌ时，应用重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ），使白细胞恢复。方法：每天２５０μｇ皮下注射，直至连续两次复查中性粒细胞绝对计数（ＡＮＣ）... 详细信息

目的：急性白血病，大剂量化疗后，白细胞平均降至１．０３３ ×１０９／Ｌ时，应用重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ），使白细胞恢复。方法：每天２５０μｇ皮下注射，直至连续两次复查中性粒细胞绝对计数（ＡＮＣ）超过１．５ ×１０９／Ｌ后停药，平均用药时间５．９天。结果：与未采用ｒｈＧ－ＣＳＦ治疗的对照组１３．２天ＡＮＣ超过１．５ ×１０９／Ｌ相比，粒细胞缺乏的恢复时间明显缩短。ｒｈＧ－ＣＳＦ能够明显增加白血病患者化疗后白细胞的恢复，缩短白细胞减少症的恢复时间。结论：ｒｈＧ－ＣＳＦ能够保证白血病患者接受并完成强烈化疗，从而提高患者生存率。

关键词： rhG-CSF 白血病急性治疗

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慢性淋巴细胞白血病34例长期随访观察

中华内科杂志 2009年第1期48卷 49-51页

作者：李江涛常乃柏范芸顾惜春卫生部北京医院血液科 100730

慢性淋巴细胞白血病（CLL）是一种以老年人发病为主，起病隐匿，发展缓慢的克隆性疾病，以外周血淋巴细胞明显增高、骨髓成熟淋巴细胞浸润为血液学特征，晚期出现贫血和血小板减少。我科以干扰素为主，部分病例联合化疗治疗34例CLL患者... 详细信息

慢性淋巴细胞白血病（CLL）是一种以老年人发病为主，起病隐匿，发展缓慢的克隆性疾病，以外周血淋巴细胞明显增高、骨髓成熟淋巴细胞浸润为血液学特征，晚期出现贫血和血小板减少。我科以干扰素为主，部分病例联合化疗治疗34例CLL患者并长期随访观察，现报告如下。

关键词：慢性淋巴细胞白血病随访观察外周血淋巴细胞淋巴细胞浸润联合化疗治疗克隆性疾病血液学特征血小板减少

JAK2转基因骨髓造血干/祖细胞体外长期扩增调控及定向分化的研究

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中华血液学杂志 2004年第2期25卷 65-69页

作者：赵声明顾惜春常乃柏 Tim Clackson C Anthony Blau 北京医院血液科 100730 ARIAD Pharmaceuticals Division of Hematology

目的　探讨酪氨酸激酶JAK2转基因骨髓造血干祖细胞体外长期扩增调控和定向分化潜能的可行性。方法　克隆了一个MSCV based逆转录病毒载体称作MGI F2Jak2 ,它编码一个绿色荧光蛋白 (GFP)和两个改进的FK5 0 6结合蛋白 (F36v)与JAK2组成... 详细信息

目的　探讨酪氨酸激酶JAK2转基因骨髓造血干祖细胞体外长期扩增调控和定向分化潜能的可行性。方法　克隆了一个MSCV based逆转录病毒载体称作MGI F2Jak2 ,它编码一个绿色荧光蛋白 (GFP)和两个改进的FK5 0 6结合蛋白 (F36v)与JAK2组成的融合蛋白 ,F36v是二聚化化学诱导物AP2 0 187的结合位点。应用该载体转染GpE +86包装细胞株 ,将C5 7BL 6小鼠的骨髓细胞与照射过15 0 0cGy的GpE +86产毒细胞株共同培养实现基因转导。转导后的细胞在X VIVO 15培养体系中扩增 ,分为①空白对照组 ;②AP2 0 187组 ;③干细胞因子 (SCF)组 ;④AP2 0 187+SCF组。扩增的细胞用直接法标记藻红蛋白荧光素 (PE)结合的抗Sca1、c kit、CD34 、Gr1、CD1 1b、TER 119、CD4 1 、B2 2 0和CD3单克隆抗体以流式细胞仪检测 ,并进行定向分化、祖细胞集落培养和脾细胞集落形成单位 (CFU S)的研究。结果　只有AP2 0 187+SCF组可以持续地使转基因的骨髓造血干祖细胞大量增殖 ,扩增 80d后细胞可达10 1 4倍 ,细胞倍增时间约 30h ,扩增细胞的表型为CD34 、c kit和Sca1等干细胞表面标志强阳性 ,其它细胞表面标志如Gr1、CD1 1b、TER119、CD4 1 、B2 2 0、CD3接近阴性。所扩增的细胞在不同的细胞因子组合下 ,可定向分化为粒细胞、巨噬细胞、红细胞、

关键词： JAK2转基因骨髓造血干细胞体外扩增定向分化骨髓造血祖细胞酪氨酸激酶基因治疗

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生白能的不良反应观察

中国药学杂志 1997年第8期32卷 499-500页

作者：张兵谭玲傅得兴顾惜春许佩珉卫生部北京医院

生白能的不良反应观察张兵谭玲傅得兴顾惜春许佩珉（北京１００７３０卫生部北京医院）粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（生白能，ＧＭＣＳＦ）是一种调节造血和白细胞功能所必需的蛋白质，能刺激粒细胞、单核细胞和Ｔ淋巴细胞的生长，... 详细信息

生白能的不良反应观察张兵谭玲傅得兴顾惜春许佩珉（北京１００７３０卫生部北京医院）粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（生白能，ＧＭＣＳＦ）是一种调节造血和白细胞功能所必需的蛋白质，能刺激粒细胞、单核细胞和Ｔ淋巴细胞的生长，使其成熟细胞数目增多。临床上用于治...

关键词：生白能粒细胞巨噬细胞集落刺激因子

骨髓增生异常综合征CD_(34)^+细胞对不同生长因子的反应性研究

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中华血液学杂志 1997年第7期18卷 354-357页

作者：杨晓云顾惜春裴雪涛朱玲北京医院血液科军事医学科学院放射医学研究所

目的：更准确地研究造血生长因子对骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）造血干、祖细胞的影响及临床治疗效果。方法：利用吸附单克隆抗体的免疫磁珠分离系统分离纯化ＭＤＳ患者ＣＤ３４＋细胞，在体外半固体培养体系中，研究ＭＤＳＣＤ３４＋... 详细信息

目的：更准确地研究造血生长因子对骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）造血干、祖细胞的影响及临床治疗效果。方法：利用吸附单克隆抗体的免疫磁珠分离系统分离纯化ＭＤＳ患者ＣＤ３４＋细胞，在体外半固体培养体系中，研究ＭＤＳＣＤ３４＋细胞对粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、白细胞介素３（ＩＬ－３）、红细胞生成素（Ｅｐｏ）、干细胞因子（ＳＣＦ）单独及联合应用的反应。结果：ＭＤＳＣＤ３４＋细胞在增殖分化过程中存在一定程度缺陷，单独应用生长因子不能有效地改善其缺陷，ＳＣＦ与ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、Ｅｐｏ等生长因子的联合应用可提高一部分患者造血祖细胞的集落形成能力，但在ＭＤＳ高危组，部分患者在正常集落形成能力改善的同时，白血病细胞集落也有不同程度的增长。结论：治疗ＭＤＳ患者须合理地联合应用造血生长因子。

关键词：骨髓增生异常综合征造血细胞生长因子

bcrabl融合基因对β1整合素和L-选择素基因表达的影响

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中华血液学杂志 2003年第7期24卷 337-339页

作者：王伟良沈悌惠玉荣顾惜春李蓉生卫生部北京医院血液科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院血液科

目的　研究bcr abl融合基因对 β1整合素和L 选择素表达的影响。方法　应用半定量RT PCR方法检测bcr abl融合基因阴性和阳性的慢性髓系白血病 (CML)细胞中 β1整合素和L 选择素mRNA的表达水平。同时观察酪氨酸激酶抑制剂Rb C Box基因转... 详细信息

目的　研究bcr abl融合基因对 β1整合素和L 选择素表达的影响。方法　应用半定量RT PCR方法检测bcr abl融合基因阴性和阳性的慢性髓系白血病 (CML)细胞中 β1整合素和L 选择素mRNA的表达水平。同时观察酪氨酸激酶抑制剂Rb C Box基因转染bcr abl基因阳性细胞后 β1整合素和L 选择素mRNA表达水平的变化。结果　在bcr abl基因阳性细胞中 ,L 选择素mRNA表达水平明显低于bcr abl阴性细胞 ,转入Rb C Box基因后 ,L 选择素mRNA的表达水平与bcr abl阴性细胞相似。bcr abl阴性和阳性细胞及转染Rb C Box基因细胞中 β1整合素mRNA表达水平差异均无显著性。结论　bcr abl融合基因可抑制CML细胞中L 选择素mRNA的表达 ,对 β1整合素mRNA的表达影响较小。

关键词：慢性髓系白血病 β1整合素 L-选择素 bcr/abl融合基因基因表达 RT-PCR法

重组人粒细胞集落刺激因子对人外周血及骨髓CD_（34）~＋细胞及其亚群影响的动态观察

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中华血液学杂志 1996年第3期17卷 155-156页

作者：常乃柏孙芾靳黎清顾惜春杨振华北京医院

重组人粒细胞集落刺激因子对人外周血及骨髓ＣＤ３４＋细胞及其亚群影响的动态观察常乃柏孙芾靳黎清顾惜春杨振华我们动态观察了重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）对人外周血及骨髓ＣＤ３４＋细胞扩增作用。现报告如下。材料... 详细信息

重组人粒细胞集落刺激因子对人外周血及骨髓ＣＤ３４＋细胞及其亚群影响的动态观察常乃柏孙芾靳黎清顾惜春杨振华我们动态观察了重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）对人外周血及骨髓ＣＤ３４＋细胞扩增作用。现报告如下。材料和方法１研究对象所有病例均为初治病...

关键词：人粒细胞集落刺激因子外周血骨髓何杰金病

联合化疗加重组人粒细胞集落刺激因子动员自体外周血干细胞

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中华肿瘤杂志 2001年第2期23卷 159-161页

作者：施红顾惜春朱玲杨晓云魏建平裴蕾赵夷年北京医院血液内科 100730

目的　观察环磷酰胺 (CTX)为主的联合化疗加重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)对自体外周血干细胞 (APBSC)的动员效果。方法　CTX(2 5± 1 0 )g/m2 静脉点滴 ,第 1天 ;足叶乙甙(Vp 16 ) 6 0 0～ 80 0mg和 (或 )阿糖胞苷 (Ara C) 1 0... 详细信息

目的　观察环磷酰胺 (CTX)为主的联合化疗加重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)对自体外周血干细胞 (APBSC)的动员效果。方法　CTX(2 5± 1 0 )g/m2 静脉点滴 ,第 1天 ;足叶乙甙(Vp 16 ) 6 0 0～ 80 0mg和 (或 )阿糖胞苷 (Ara C) 1 0～ 2 0g/m2 静脉点滴 ,第 2天。白细胞 (WBC)降至最低点时开始皮下注射rhG CSF 30 0 μg/d ,直至采集结束前一天。当WBC上升至 >3 0× 10 9/L时开始连日采集APBSC ,当单个核细胞 (MNC)累计达到 4× 10 8/kg以上时停止采集 ,并检测APBSC中的CFU GM和CD34 + 细胞。结果　 2 0例患者APBSC动员后 (8 5± 1 5 )dWBC最低 ,为 (1 2± 0 8)× 10 9/L ,(9 0±2 0 )d时开始给予rhG CSF ,持续 (6 0± 1 0 )d ,(12 0± 2 0 )d时开始采集APBSC ,持续 (4 0± 1 0 )d。采集的MNC为 (6 14± 2 34 )× 10 8/kg ,CD34 + 细胞为 (2 3 2 5± 30 5 6 )× 10 6/kg ,CD34 + 细胞升至峰值时间在化疗后 (14 6± 1 8)d ,在用rhG CSF后 (4 9± 1 6 )d ,CFU GM为 (2 1 6 8± 15 39)× 10 4 /kg;全组无严重毒副反应 ;全部移植患者造血功能均获满意重建。结论　CTX为主的联合化疗加rhG CSF是一种安全、可行的APBSC动员方法。

关键词：肿瘤联合化疗药物疗法重组人粒细胞集落刺激因子自体外周血干细胞