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家蝇MdSirt1和MdSirt4基因的克隆及功能分析

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家蝇MdSirt1和MdSirt4基因的克隆及功能分析

作者：顾冀海河北大学

学位级别：硕士

随着对Sirtuins家族蛋白研究的不断深入,关于其功能的报道也越来越广泛。通过转录组和数字表达谱分析,我们发现家蝇在受到细菌刺激后体内Sirt1和Sirt4基因表达水平发生显著变化,提示它们可能参与家蝇免疫应答过程。本文基于此,本工作以... 详细信息

随着对Sirtuins家族蛋白研究的不断深入,关于其功能的报道也越来越广泛。通过转录组和数字表达谱分析,我们发现家蝇在受到细菌刺激后体内Sirt1和Sirt4基因表达水平发生显著变化,提示它们可能参与家蝇免疫应答过程。本文基于此,本工作以此为出发点对家蝇应激过程中Sirt1和Sirt4基因表达的变化规律及其可能存在的调控机制进行了研究。主要内容包括:1、克隆了家蝇Sirt1和Sirt4基因c DNA序列,分别命名为Md Sirt1和Md Sirt4,并对其进行了生物信息学分析。两条基因所编码的蛋白Md SIRT和Md SIRT4各具有一段保守的SIR2保守结构域,两者氨基酸序列与其它物种中的同源蛋白之间均具有较高的同源性。2、利用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹方法对Md Sirt1和Md Sirt4在家蝇不同发育时期、不同组织和应激过程中的表达量变化进行了分析。Md Sirt1和Md Sirt4在家蝇受到细菌刺激时分别上调和下调,同时检测到Md SIRT4在蛋白水平也发生了相似的变化。3、Md Sirt1和Md Sirt4在家蝇受到热激处理时m RNA表达量分别上调和下调,同时检测到Md SIRT4在蛋白水平也发生了相似的变化。4、Md Sirt1和Md Sirt4在家蝇受到重金属影响后m RNA表达量均上调,同时检测到Md SIRT4在蛋白水平也发生了相似的变化。5、在对Md Sirt1干扰后我们发现家蝇幼虫应对细菌刺激的能力下降;而对Md Sirt4进行了干扰后,我们发现家蝇核转录因子Md NF-κB表达量上升,同时检测到家蝇抗菌肽的表达量上调。

关键词：家蝇 MdSirt1 MdSirt4 免疫

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E2F家族转录因子在肿瘤发生中的作用

遗传 2023年第7期45卷 580-592页

作者：李飞飞王韵顾冀海张玉明柳峰松倪志华河北大学生命科学学院保定071002 河北省动物系统学与应用重点实验室保定071002

肿瘤严重威胁人类健康,转录因子是肿瘤治疗的潜在靶点。作为重要的转录因子家族,E2F在细胞增殖与调控进程中发挥重要作用。然而,E2F家族转录因子在肿瘤发生进程中的表达规律、基因功能和分子互作等关键信息尚不清晰。基于此,本研究对TCG... 详细信息

肿瘤严重威胁人类健康,转录因子是肿瘤治疗的潜在靶点。作为重要的转录因子家族,E2F在细胞增殖与调控进程中发挥重要作用。然而,E2F家族转录因子在肿瘤发生进程中的表达规律、基因功能和分子互作等关键信息尚不清晰。基于此,本研究对TCGA数据库中我国10种高发肿瘤的转录组测序数据、突变数据和蛋白质互作数据进行整合分析,探究E2F家族转录因子的表达、结构、功能、突变和系统发生特征。结果显示,E2F家族转录因子中的E2F1和E2F7基因在多种肿瘤样本中规律性上调表达,参与调控细胞周期、细胞衰老等信号通路;其中,E2F1作为重要的调控因子与其他蛋白的相互作用最多。值得指出的是,E2F家族转录因子的基因突变类型在肿瘤类型和患者性别中均存在差异,基因扩增占比最大。系统发生分析显示,E2F家族转录因子的结构在包括果蝇、线虫和人类在内41个物种中保守,并且它们在物种演化过程中表现出基因扩张倾向。综上所述,本研究阐明了E2F家族转录因子在我国高发肿瘤中的表达规律、突变特征和演化规律,提示E2F家族转录因子是相关肿瘤疾病的新型分子诊断标志物,为抗肿瘤靶向药物研发提供理论依据。

关键词： E2F1 E2F7 基因家族结构

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杆菌肽生产菌种选育及发酵新工艺研究

科学技术与工程 2015年第33期35卷 137-141页

作者：张玉明赵泽顾冀海倪志华河北大学生命科学学院保定071002 河北大河北省生物工程技术研究中心保定071002

杆菌肽是一种重要的饲料添加剂,开展菌种选育和发酵工艺研究提高杆菌肽产量十分必要。使用紫外线诱变技术选育淀粉酶分泌能力增强菌种,以加快杆菌肽积累速率。通过静态吸附和解吸实验筛选吸附杆菌肽的树脂。借助发酵吸附分离耦合试验以... 详细信息

杆菌肽是一种重要的饲料添加剂,开展菌种选育和发酵工艺研究提高杆菌肽产量十分必要。使用紫外线诱变技术选育淀粉酶分泌能力增强菌种,以加快杆菌肽积累速率。通过静态吸附和解吸实验筛选吸附杆菌肽的树脂。借助发酵吸附分离耦合试验以解除产物反馈抑制,并考察树脂加入时间对杆菌肽产量的影响。选育得到的菌株Bacillus licheniformis Y8226A发酵周期明显缩短。借助发酵吸附分离耦合策略,发酵开始30 h后在50 m L发酵液加入D152树脂1.0 g,最终杆菌肽产量与对照组相比提高了27.40%。通过紫外线诱变选育得到杆菌肽高效生产菌种,使用D152树脂开展发酵吸附分离耦合试验可显著提高杆菌肽产量。

关键词：杆菌肽树脂发酵地衣芽胞杆菌

家蝇Mdsirt1基因在细菌、高温和重金属胁迫下的表达分析

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昆虫学报 2017年第12期60卷 1394-1402页

作者：顾冀海李亚静李文倩唐婷柳峰松河北大学生命科学学院河北保定071002

【目的】探究家蝇Musca domestica sirt1基因(Mdsirt1)在各种胁迫条件下的表达模式。【方法】以家蝇2龄幼虫cDNA为模板,PCR扩增Mdsirt1基因序列并进行生物信息学分析;实时定量PCR(qRT-PCR)检测Mdsirt1在家蝇不同发育阶段(卵、1龄幼虫、... 详细信息

【目的】探究家蝇Musca domestica sirt1基因(Mdsirt1)在各种胁迫条件下的表达模式。【方法】以家蝇2龄幼虫cDNA为模板,PCR扩增Mdsirt1基因序列并进行生物信息学分析;实时定量PCR(qRT-PCR)检测Mdsirt1在家蝇不同发育阶段(卵、1龄幼虫、2龄幼虫、3龄幼虫、蛹和成虫)的表达变化,2龄幼虫不同组织(表皮、肠道、脂肪体和血细胞)中的表达分布,以及胁迫条件(细菌刺激、热激及CdCl_2刺激)下的转录水平变化;通过RNAi干扰Mdsirt1基因表达,观察敲低Mdsirt1表达后家蝇幼虫抗病能力变化,并检测机体氧化应激水平。【结果】家蝇Mdsirt1基因编码蛋白含有SIR2结构域,与厩螫蝇Stomoxys calcitrans SIR2氨基酸序列一致性为66%。qRT-PCR结果显示,Mdsirt1基因主要在家蝇蛹期表达,在家蝇2龄幼虫脂肪体中表达量较高。家蝇幼虫Mdsirt1分别在大肠杆菌Escherichia coli刺激3 h,金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus刺激6 h,42℃热激30min以及30 mmol/L CdCl_2刺激48 h时表达量达到最高峰。敲低Mdsirt1表达的家蝇幼虫受到细菌感染(大肠杆菌和金黄色葡萄球菌1∶1混合感染)后存活率较对照组显著降低1.47倍,且敲低Mdsirt1后机体处于氧化应激状态,活性氧自由基水平和丙二醛含量较对照组分别升高1.58和1.59倍。【结论】Mdsirt1参与家蝇幼虫的抗菌免疫应答和抗逆反应。

关键词：家蝇 Sirtuins蛋白免疫热激重金属胁迫

肽聚糖识别蛋白PGRP-SC在家蝇肠道免疫中的功能分析

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昆虫学报 2016年第3期59卷 269-277页

作者：路永鹏顾冀海高一夫唐婷柳峰松黄大卫河北大学生命科学学院河北保定071002

【目的】探究家蝇Musca domestica幼虫肽聚糖识别蛋白PGRP-SC在应对肠道入侵细菌中的作用。【方法】通过投喂表达Md PGRP-SC dsRNA的宿主大肠杆菌Escherichia coli干扰家蝇初孵幼虫Md PGRP-SC基因表达,并利用q PCR技术检测干扰效果;在... 详细信息

【目的】探究家蝇Musca domestica幼虫肽聚糖识别蛋白PGRP-SC在应对肠道入侵细菌中的作用。【方法】通过投喂表达Md PGRP-SC dsRNA的宿主大肠杆菌Escherichia coli干扰家蝇初孵幼虫Md PGRP-SC基因表达,并利用q PCR技术检测干扰效果;在荧光显微镜下观察干扰后试虫肠道内表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的大肠杆菌存活情况,同时通过比色法检测干扰后试虫肠道组织内的H2O2含量,利用q PCR检测试虫肠道内抗菌肽基因的表达情况。【结果】q PCR结果显示,投喂干扰24 h后家蝇幼虫体内Md PGRP-SC基因的相对表达量显著降低。对PGRP-SC干扰组和GFP对照组试虫投喂表达GFP的大肠杆菌,30 min后干扰组家蝇肠道内荧光亮度弱于GFP对照组。同时,干扰组试虫肠道内H2O2含量与空白对照或GFP对照组相比均没有显著差异,而干扰组中抗菌肽表达水平显著高于GFP对照组。【结论】Md PGRP-SC在控制家蝇幼虫肠道免疫敏感程度中起作用。

关键词：家蝇肠道免疫肽聚糖识别蛋白活性氧抗菌肽

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基于风格记忆的跨域小样本异常检测

计算机辅助设计与图形学学报 2024年

作者：杨太海顾智浩马利庄华东师范大学计算机科学与技术学院上海交通大学电子信息与电气工程学院

小样本异常检测仅利用少量正常样本进行检测和异常定位，现有的小样本异常检测方法的训练和测试都在相同的域中进行. 对于跨域场景的研究尚处于空白. 针对跨域小样本异常检测问题，为了将源域学到的知识迁移到目标域中进行小样本异常... 详细信息

小样本异常检测仅利用少量正常样本进行检测和异常定位，现有的小样本异常检测方法的训练和测试都在相同的域中进行. 对于跨域场景的研究尚处于空白. 针对跨域小样本异常检测问题，为了将源域学到的知识迁移到目标域中进行小样本异常检测，提出基于风格记忆的跨域小样本异常检测方法. 该方法包含2个模块，首先将域差异定义为风格特征差异，设计风格记忆模块存储来自源域的域内统计特征，并将学习到的特征集成到目标域中，减轻域差异带来的影响，提升性能; 然后引入对比学习策略，区分不同类别的增强查询特征，进一步加强模型对源域中不同类别的表征能力，提高小样本检测性能. 在MVTec AD， MPDD和MVTec LOCO-AD数据集间进行跨域小样本异常检测任务实验，结果表明，与最新小样本方法相比，所提方法取得了最佳性能，其中，图像AUROC指标提升3%～5%; 在本域内小样本异常检测任务上，该方法仍然有优异的表现.

关键词：异常检测小样本学习域差异

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前挡板结构对指尖密封泄漏和温度影响分析

润滑与密封 2024年

作者：徐伟王娟顾典海胡雪峰昆明理工大学机电工程学院

研究了不同前挡板结构对指尖密封泄漏量以及温度分布的影响，将指尖密封组片区域视为多孔介质，建立了常规型、2孔前板、4孔前板、无隔片和无前挡板五种结构的指尖密封模型，利用流体力学的方法进行计算求解。计算结果表明：随着指尖密... 详细信息

研究了不同前挡板结构对指尖密封泄漏量以及温度分布的影响，将指尖密封组片区域视为多孔介质，建立了常规型、2孔前板、4孔前板、无隔片和无前挡板五种结构的指尖密封模型，利用流体力学的方法进行计算求解。计算结果表明：随着指尖密封上下游压差的增大泄漏量近似线性增加，在同一压差下，无隔片指尖密封的泄漏量均小于其余四种结构的泄漏量，而其余四种结构的泄漏量相当；前挡板厚度的改变对指尖密封的泄漏量影响不大；转子转速对指尖密封泄漏量影响也不大；五种结构指尖密封的最高温度均分布于指尖靴与转子接触的下游表面上，其中4孔前板和无前板结构指尖密封上游区域在径向方向上有较大的温度梯度变化；前板结构的改变，会使指尖密封上游泄漏流体的流向发生改变。本研究在提升指尖密封性能方面具有一定的指导意义。

关键词：指尖密封多孔介质前挡板泄漏量温度分布

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精囊镜在泌尿外科中应用的效果观察

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2024年第10期 0025-0028页

作者：冀增海平山县人民医院河北石家庄050499

针对泌尿外科的男性患者,研究运用经尿道精囊镜技术的效果。方法选择2021年3月至2023年3月本院收治的21例经尿道精囊镜技术患者临床资料。全部病例在导丝法的指引下,通过前列腺小囊管进入储精囊。结果 19例顽固性血精病人中,有12例存... 详细信息

针对泌尿外科的男性患者,研究运用经尿道精囊镜技术的效果。方法选择2021年3月至2023年3月本院收治的21例经尿道精囊镜技术患者临床资料。全部病例在导丝法的指引下,通过前列腺小囊管进入储精囊。结果 19例顽固性血精病人中,有12例存在着精囊结石的情况,9个在左侧,3个在右侧。前期3例精囊镜手术由于无法找到射精管开口及难以进入储精囊,其他手术都获得了成功,经过6-12月的追踪,14名难治性血精病人的症状得到改善或消失,2名精囊囊肿在随访中没有出现任何的复发,也没有出现严重的并发症。结论经尿道精囊镜治疗顽固性血精症是一种安全、有效的治疗方法,具有一定的临床价值。

关键词：经尿道精囊镜检泌尿外科

探讨脑外手术薄膜在腔内泌尿外科微创手术中的应用

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中国科技期刊数据库医药 2024年第1期 0040-0043页

作者：冀增海平山县人民医院河北石家庄050499

探讨脑外科袋式手术薄膜在经尿道电切术中的应用。方法选取2021年3月-2023年3月本院收治的120例行经尿道前列腺电切术患者为研究对象,采用随机分组方法,将患者分成两组,观察组和对照组。对照组60例,观察组采用囊袋式脑手术膜治疗60例... 详细信息

探讨脑外科袋式手术薄膜在经尿道电切术中的应用。方法选取2021年3月-2023年3月本院收治的120例行经尿道前列腺电切术患者为研究对象,采用随机分组方法,将患者分成两组,观察组和对照组。对照组60例,观察组采用囊袋式脑手术膜治疗60例。观察两组患者术中术野周边无菌巾、被单及患者血液污染的次数,以及术后清洗时间;并对样本是否能够完全采集,进行对比分析。结果治疗组的平均操作时间比对照组稍短,但没有显著性差异(P>0.05)。而观察组患者术中清洁时间、无菌单子及操作人员受污染情况均显著少于对照组,而完成标本采集的病例数显著高于对照组(P<0.05)。结论采用脑外科袋式薄膜可有效地减少冲洗液和血液对无菌单和操作人员的污染,且能较好地采集标本,大大减少了手术后的清洗时间。

关键词：脑外袋式手术薄膜经尿道电切术泌尿外科