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兔血铜锌超氧化物歧化酶的纯化及其性质

复旦学报（自然科学版） 1994年第5期33卷 577-583页

作者：林锐施巍王孟丽黄伟达顾其敏复旦大学生物化学系

用乙醇—氯仿处理、丙酮分级沉淀、ＤＥＡＥ—纤维层析等方法，从兔血红细胞中纯化出钢锌超氧化物歧化酶（ＳＯＤ），产率为５１％，比活力为１２４３０ｕ／ｍｇ·该酶经冷冻干燥后呈淡蓝色．天然状态下，该酶的分子量约为３００００，... 详细信息

用乙醇—氯仿处理、丙酮分级沉淀、ＤＥＡＥ—纤维层析等方法，从兔血红细胞中纯化出钢锌超氧化物歧化酶（ＳＯＤ），产率为５１％，比活力为１２４３０ｕ／ｍｇ·该酶经冷冻干燥后呈淡蓝色．天然状态下，该酶的分子量约为３００００，由相同的两个亚基组成．紫外扫描表明纯酶在２６５ｎｍ处有最大光吸收值．经聚丙烯酸胺凝胶电泳后，用蛋白染色及ＮＢＴ活性染色均显示出三条带．结果表明用该纯化方法得到的ＳＯＤ为均一性纯酶．氨基酸组成分析及元素分析表明兔血铜锌与采用其他来源的酶基本相同．化学修饰结果表明兔血铜锌ＳＯＤ没有游离巯基．

关键词：血液铜锌超氧化物歧化酶兔血纯化

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抽提大豆各组织总DNA方法的比较研究

生物化学杂志 1997年第6期13卷 719-721页

作者：忻骅袁卫明顾其敏上海复旦大学生物化学系

抽提大豆各组织总ＤＮＡ方法的比较研究忻骅袁卫明顾其敏（上海复旦大学生物化学系，上海２００４３３）十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）选择性沉淀ＤＮＡ的方法被广泛用于抽提生物组织，特别是植物组织的总ＤＮＡ，它简便快速，所得... 详细信息

抽提大豆各组织总ＤＮＡ方法的比较研究忻骅袁卫明顾其敏（上海复旦大学生物化学系，上海２００４３３）十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）选择性沉淀ＤＮＡ的方法被广泛用于抽提生物组织，特别是植物组织的总ＤＮＡ，它简便快速，所得ＤＮＡ的纯度好，适用于进一步的酶切...

关键词：大豆 DNA 提取

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细茎大豆(***)rbcS基因结构与分子进化分析

复旦学报（自然科学版） 1998年第2期37卷 151-156页

作者：张二荃王喜萍曹凯鸣顾其敏庄炳昌复旦大学吉林省农科院大豆所

从细茎大豆的嫩叶中提取总ＤＮＡ，用ＰＣＲ方法扩增得到包含完整编码区的ｒｂｃＳ基因并将其克隆到ＰＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ载体中．完成全基因１０８９个核苷酸测序后，运用ＰＣ－ＧＥＮＥ进行顺序编辑和同源比较，并应用ＭＥＧＡ... 详细信息

从细茎大豆的嫩叶中提取总ＤＮＡ，用ＰＣＲ方法扩增得到包含完整编码区的ｒｂｃＳ基因并将其克隆到ＰＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ载体中．完成全基因１０８９个核苷酸测序后，运用ＰＣ－ＧＥＮＥ进行顺序编辑和同源比较，并应用ＭＥＧＡ１．０２软件中的Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ方法画出Ｒｕｂｉｓｃｏ小亚基分子的系统进化树．

关键词：大豆序列分析分子进化 rbcs基因细茎大豆

与小麦高分子量谷蛋白基因探针杂交的阳性克隆分离及基因在重组子上的定位

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复旦学报（自然科学版） 1992年第3期31卷 312-317页

作者：忻骅李育庆曹凯鸣顾其敏孙崇荣复旦大学生物化学系

将经San 3A部分酶切后的小麦总DNA片段克隆到λCharon40载体上构建了小麦基因文库.以两个人工合成的同源于小麦高分子量(HMW)谷蛋白基因的片段对此基因库进行筛选,获得了两个阳性克隆,推测其中一个包含了HMW谷蛋白全部的基因顺序.两个... 详细信息

将经San 3A部分酶切后的小麦总DNA片段克隆到λCharon40载体上构建了小麦基因文库.以两个人工合成的同源于小麦高分子量(HMW)谷蛋白基因的片段对此基因库进行筛选,获得了两个阳性克隆,推测其中一个包含了HMW谷蛋白全部的基因顺序.两个克隆的部分限制性内切酶位点已被确定.在Southern杂交中,用位于基因编码区内的寡核苷酸片段作探针,将阳性部分定位在一定的酶切片段上.

关键词：小麦寡核苷酸 HMW 谷蛋白基因

麦麸中多酚氧化酶的分离纯化及其性质的初步研究

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复旦学报（自然科学版） 1990年第3期29卷 320-326页

作者：赵志安李万水彭金荣顾其敏复旦大学生物化学系

通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素层析和Sephadex G200层析等方法,从小麦麸皮中分离并纯化了多酚氧化酶。该酶在60℃保温1h仍有44%的活性,最适反应pH为5.6。该酶可作用于多巴胺、多巴及邻苯二酚,但对绿原酸和酪氨酸没有作用。在以多巴... 详细信息

通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素层析和Sephadex G200层析等方法,从小麦麸皮中分离并纯化了多酚氧化酶。该酶在60℃保温1h仍有44%的活性,最适反应pH为5.6。该酶可作用于多巴胺、多巴及邻苯二酚,但对绿原酸和酪氨酸没有作用。在以多巴胺为底物时,该酶的K_m为5.0 mmol/L。低浓度的亚硫酸氢钠、L-抗坏血酸和苯基硫脲对该酶均有抑活作用。

关键词：酶提纯麦麸特性多酚氧化酶

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野生大豆rbcS基因的克隆及结构分析

Acta Botanica Sinica 1996年第9期38卷 753-756页

作者：曹凯鸣袁卫明詹树萱顾其敏徐豹复旦大学生物化学系上海200433 吉林省农业科学院大豆研究所公主岭136100

About 1 kb fragment of rbcS (ribulose 1,5 bisphosphate carboxylase small subunit) gene in wild soybean (Glycine soja, Ji 50017) was amplified from total DNA by PCR assay. Sequence analysis of the fragment indicated that 1089 bp sequenced included the whole coding region for Rubisco small subunit. The rbcS gene in wild soybean encoded a precursor composed of a transit peptide of 55 amino acids and a mature protein of 123 amino acids. There were two introns found in the rbcS gene as other dicotyledonous species previously *** of DNA sequences showed high degree homology of rbcS genes between wild soybean and cultivated soybean (Glycine max var. wayne). Some changes of amino acids emerged from the diverse nucleotides did not affect the function of the small subunit. These results may contribute some basic data in molecular biology to study the origin and evolution of soybean.

关键词：大豆野生大豆 rbcS基因克隆结构分析