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不同人群肠道肺炎克雷伯菌毒力及耐药情况研究

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不同人群肠道肺炎克雷伯菌毒力及耐药情况研究

作者：顾丹霞浙江大学

学位级别：硕士

目的：研究住院患者、肠道门诊腹泻患者、健康体检者三个不同人群肠道中肺炎克雷伯菌的携带状况、毒力基因、耐药性及其分子流行病学特点。方法：采集三个目标人群新鲜粪便标本接种于培养基上,应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Ma... 详细信息

目的：研究住院患者、肠道门诊腹泻患者、健康体检者三个不同人群肠道中肺炎克雷伯菌的携带状况、毒力基因、耐药性及其分子流行病学特点。方法：采集三个目标人群新鲜粪便标本接种于培养基上,应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry, MALDI-TOF MS) Vitek MS质谱仪鉴定筛选出肺炎克雷伯菌,拉丝试验检测高粘液表型,K-B纸片扩散法进行药物敏感性试验;合成特异性引物对肺炎克雷伯菌株进行荚膜血清型(K1, K2, K5, K20, K54, K57)和相关毒力基因(wcaG, rmpA, magA和菌素)检测;PCR扩增广谱β-内酰胺酶基因、超广谱β-内酰胺酶基因、质粒介导的AmpC酶基因和碳青霉烯类耐药基因;扩增7对管家基因(rpoB, gapA, infB, gpi, PhoE, rpoB, tonB)对菌株进行多位点序列分型。结果：141株肺炎克雷伯菌分离自住院患者(54/125,携带率43.2%)、腹泻的门诊患者(44/257,携带率17.1%)和健康体检者(43/141,携带率30.5%)。共检测到49株产毒株,其中35株为高粘液表型菌株。K1型菌株检出14株(14/141,9.9%),K2型菌株检出15株(15/141,10.6%),K20和K57较少检出,而K54型菌株未检出;菌素基因检出率最高(30.5%),rmpA次之(19.9%),wcaG和magA检出率相对较低(分别为12.1%和9.9%)。健康体检者携带的肺炎克雷伯菌毒力检出率最高,其中K1/K2荚膜血清型、wcaG、rmpA、magA和菌素检出率显著高于住院患者来源的菌株,而对抗生素较敏感。住院患者携带的菌株抗生素耐药率最高,头孢菌素类抗生素耐药率大于30%,碳青霉烯类抗生素耐药率22.2%。肺炎克雷伯菌非产毒株抗生素耐药率显著高于产毒株,此外还检测到3株同时携带毒力基因和耐药基因的菌株(magA+Kl+blasHV-2,菌素+blaTEM-1+blaKPC-2,菌素+wcaG+blaCTX-M-14+blaSHV-1)。产毒株和非产毒株的序列基因型(ST)分布呈现不同的特点,非产毒株较为分散,而产毒株相对较为集中,ST23、ST86为其主要的ST型。ST23菌株均为K1荚膜血清型,ST65和ST86菌株均为K2型。结论：肺炎克雷伯菌在住院患者中携带率最高,毒力较低而抗生素耐药率最高;而健康人群携带较高比例的产毒株;产毒株比非产毒株对抗生素敏感性更高;特定的ST与毒力有一定的关联;健康人群携带肝脓肿流行克隆菌株,提示肝脓肿菌株来自胃肠道。

关键词：肺炎克雷伯菌毒力耐药性分子流行病

从《方言》看《周易》部分方言语词与传统解经

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语言研究 2005年第2期25卷 29-32页

作者：赵振兴顾丹霞湖南师范大学文学院湖南长沙410081

《周易》中保存了较多的方言词,这些方言词后来大都成了通语。本文据《方言》提供的信息,选出11个方言词,取其方言词义与传统训释来进行比较,以期发掘出原信息。因此,这种工作是很有意义的。

关键词：《周易》《方言》方言词传统

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《周易大传》语气词的语用功能考察

古汉语研究 2004年第3期 45-49页

作者：赵振兴顾丹霞舟人湖南师范大学文学院，湖南长沙410081 不详

本文从篇章语法的角度分析《周易大传》语气词的功能 ,认为语气词“也”、“者”、“矣”、“焉”等是一个语用成分 ,句中的“者也”、“者”、“也”是主位标记 ,句末的“也”、“者也”、“焉”、“矣”是焦点标记 ;前者通常表达旧信... 详细信息

本文从篇章语法的角度分析《周易大传》语气词的功能 ,认为语气词“也”、“者”、“矣”、“焉”等是一个语用成分 ,句中的“者也”、“者”、“也”是主位标记 ,句末的“也”、“者也”、“焉”、“矣”是焦点标记 ;前者通常表达旧信息 ,后者表达新信息。

关键词：《周易大传》语气词语用功能语法

产碳青霉烯酶K20型肺炎克雷伯菌的分离及分子背景研究

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中华检验医学杂志 2016年第4期39卷 304-306页

作者：顾丹霞王选张嵘浙江省人民医院临床研究中心杭州310014 浙江大学医学院附属第二医院检验科微生物室

根据荚膜血清学分型，可以将肺炎克雷伯菌分为78个血清型。近年来研究非常关注的荚膜血清型K1、K2、K20、K54、K57型肺炎克雷伯菌在动物实验中表现出较强的毒力特征，并发现与人类肝脓肿、眼内炎、腹膜炎等多种侵袭性疾病密切相关。这... 详细信息

根据荚膜血清学分型，可以将肺炎克雷伯菌分为78个血清型。近年来研究非常关注的荚膜血清型K1、K2、K20、K54、K57型肺炎克雷伯菌在动物实验中表现出较强的毒力特征，并发现与人类肝脓肿、眼内炎、腹膜炎等多种侵袭性疾病密切相关。这些高毒力肺炎克雷伯菌多携带rmpA、magA、wcaG、Arobactin等毒力基因，在毒性、侵袭性、血清抵抗性等方面都显著高于其他荚膜血清型肺炎克雷伯菌。

关键词：肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶血清学分型侵袭性疾病分子分离 0型毒力特征

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西周时期受事主语句考察

古汉语研究 2011年第1期 30-33页

作者：顾丹霞唐丽娟长沙民政职业技术学院湖南长沙410004 广东茂名第十二中学广东茂名520000

文章根据西周时期受事主语句的组配、排列语序,分为11类,分别进行考察。从话题结构的角度,对这时期受事主语现象作出解释,分析不同类型的话题结构的表现形式,指明其话题信息。

关键词：西周时期受事主语句话题

BC-GN 快速检测血培养革兰阴性菌及相应耐药基因

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中华微生物学和免疫学杂志 2015年第10期35卷 783-788页

作者：吴慧芬顾丹霞周宏伟张嵘杭州市萧山区中医院检验科 311201 浙江大学医学院附属第二医院检验科微生物室杭州310009

目的评估Verigene革兰阴性血培养（ BC-GN）核酸检测方法对革兰阴性菌及其耐药基因的检测性能和临床实用性. 方法收集2013年6月—10月浙江大学医学院附属第二医院住院患者非重复革兰阴性菌血培养标本,用BC-GN直接进行菌种鉴定和耐药... 详细信息

目的评估Verigene革兰阴性血培养（ BC-GN）核酸检测方法对革兰阴性菌及其耐药基因的检测性能和临床实用性. 方法收集2013年6月—10月浙江大学医学院附属第二医院住院患者非重复革兰阴性菌血培养标本,用BC-GN直接进行菌种鉴定和耐药基因检测,同时以VITEK MS的鉴定、VITEK2 Compact的药物敏感性试验为金标准,PCR和测序方法验证耐药基因,比较BC-GN和常规方法检测结果和时间的差异. 结果 BC-GN的检测范围覆盖临床常见菌,其对大肠埃希菌（13/13）、肺炎克雷伯菌（19/24）、产酸克雷伯菌（9/9）、铜绿假单胞菌（39/39）、黏质沙雷菌（4/5）、肠杆菌属（6/8）、枸橼酸杆菌属（11/11）、变形杆菌属（6/6）、不动杆菌属（24/24）的鉴定均有高准确率,对单一菌感染标本总的准确率高达94.24%;对于2份混合菌感染的标本,BC-GN准确鉴定所有菌种和耐药基因. BC-GN检测比常规方法的鉴定和药物敏感性试验提前42 h获得菌株鉴定和耐药信息.结论 BC-GN在2 h内完成菌株鉴定和耐药基因检测,快速准确,可为临床争取更多有效治疗时间,降低血流感染死亡率.

关键词：血流感染革兰阴性抗生素耐药快速检测

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《周易》经传词语意义系统中的对立统一关系

汉语史研究集刊 2006年第1期 322-333页

作者：顧丹霞湖南师范大学文学院

冠诸群经之首的《周易》,其卦象和经意作者是用对立统一的理性概念表述的,这样的构思,治《易》诸家或多或少地揭示出来了。《系辞上传》云:'刚柔相摩,八卦相荡。'《说卦传》曰:'昔者圣人之作《易》也,幽赞于神明而生蓍,参天两地而倚数,... 详细信息

冠诸群经之首的《周易》,其卦象和经意作者是用对立统一的理性概念表述的,这样的构思,治《易》诸家或多或少地揭示出来了。《系辞上传》云:'刚柔相摩,八卦相荡。'《说卦传》曰:'昔者圣人之作《易》也,幽赞于神明而生蓍,参天两地而倚数,观变于阴阳而立卦,发挥于刚柔而生爻。'而用以表达这哲理思辨的词语,其意义系统中包含着辩证的对立统一关系。

关键词：周易经意意义系统昔者卦象词语

MALDI Biotyper和VITEKMS基质辅助激光解析电离飞行时间质谱对链球菌鉴定的比较研究

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中华检验医学杂志 2015年第2期38卷 98-101页

作者：顾丹霞余涛张晓飞张嵘浙江大学医学院附属第二医院检验科杭州310009

目的以16SrRNA基因测序鉴定结果为金标准，研究比较两种基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定系统（MALDI Biotyper和VITEKMS）在临床分离链球菌鉴定中的表现。方法2014年4至6月收集浙江大学医学院附属第二医院临床分离的链球菌162株，... 详细信息

目的以16SrRNA基因测序鉴定结果为金标准，研究比较两种基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定系统（MALDI Biotyper和VITEKMS）在临床分离链球菌鉴定中的表现。方法2014年4至6月收集浙江大学医学院附属第二医院临床分离的链球菌162株，经16SrRNA基因测序确认菌种，分别使用MALDI Biotyper和VITEKMS质谱鉴定系统进行鉴定，并评价其鉴定能力。结果MALDI Biotyper鉴定系统将155株（155／162，95．68％）链球菌准确鉴定到种，将3株缓症链球菌群鉴定为肺炎链球菌，1株副血液链球菌鉴定为澳大利亚链球菌，另有3株肺炎链球菌不能准确鉴定（分值〈1．7）；VITEKMS鉴定系统将156株（156／162，96．30％）链球菌准确鉴定至种（包括亚种），其将2株肺炎链球菌鉴定为缓症链球菌／口腔链球菌，1株马肠链球菌鉴定为婴儿链球菌婴儿亚种。两系统对化脓性链球菌和无乳链球菌的鉴定准确率均为100％（51／51），对肺炎链球菌的准确率均〉85％。结论两系统对临床分离的链球菌均有较强的鉴定能力，VITEKMS系统对某些亚种的准确鉴定更有临床意义。质谱可作为临床链球菌快速鉴定的手段。

关键词：链球菌科 RNA 核糖体 16S 细菌分型技术

磷霉素与8种抗菌药物联合对碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌的抗菌作用研究

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中华检验医学杂志 2016年第8期39卷 629-632页

作者：黄林顾丹霞周宏伟张嵘浙江大学医学院附属第二医院检验科杭州310009 浙江省人民医院临床研究中心

目的评价磷霉素与其他抗菌药物联合对碳青霉烯类抗生素耐药肠杆菌科细菌（CRE）的抗菌效果。方法收集2010年1月至2014年12月浙江大学医学院附属第二医院、杭州市中医院、浙江省人民医院和嘉兴市第二医院非重复分离的233株CRE，琼脂稀释... 详细信息

目的评价磷霉素与其他抗菌药物联合对碳青霉烯类抗生素耐药肠杆菌科细菌（CRE）的抗菌效果。方法收集2010年1月至2014年12月浙江大学医学院附属第二医院、杭州市中医院、浙江省人民医院和嘉兴市第二医院非重复分离的233株CRE，琼脂稀释法测定磷霉素、亚胺培南、美罗培南、头孢吡肟、头孢他啶、头孢曲松、头孢哌酮／舒巴坦、哌拉西彬他唑巴坦、环丙沙星、阿米卡星、妥布霉素、多黏菌素B、替加环素13种抗菌药物的MIC，微量棋盘稀释法测定磷霉素与美罗培南、头孢毗肟、头孢他啶、头孢哌酮／舒巴坦、环丙沙星、阿米卡星、妥布霉素、替加环素8种抗菌药物联合对30株CRE菌株的药物敏感性。数据采用）（。检验进行统计学分析，P〈0．05时差异有统计学意义。结果233株CRE菌株对磷霉素总的耐药率为45．1％（105／233），其中克雷伯菌属对磷霉素的耐药率最高（61．9％，73／118），肠杆菌属次之（50％，15／30），黏质沙雷菌耐药率为25％（7／28），大肠埃希菌耐药率达8．2％（4／49）；磷霉素与替加环素联合对抗CRE菌株效果最好，76．7％（23／30）的菌株呈现协同作用，磷霉素与氨基糖苷类联合，53．3％（16／30）～70％（21／30）的菌株呈现协同作用，磷霉素与环丙沙星联合仅对30％（9／30）的菌株呈协同作用，而磷霉素与p内酰胺类抗生素联合对0—3．3％（1／30）的菌株呈协同作用；尚未发现磷霉素与其他抗菌药物联合存在拮抗作用。结论磷霉素对碳青霉烯类抗生素耐药肠杆菌科细菌有一定的体外抗菌活性，磷霉素与替加环素和氨基糖苷类抗生素联合均呈现较好效果，可为临床治疗由CRE菌株引起的严重感染提供新思路。

关键词：肠杆菌科磷霉素抗菌药药物疗法,联合药物协同作用抗药性,细菌