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DNA表达载体构建及HIV多表位核酸疫苗的设计与表达

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中国生物制品学杂志 2007年第4期20卷 237-239页

作者：付延军金宁一金洪涛李臻辛苏文李萍韩贞珍李太元延边大学农学院龙井133400 军事医学科学院军事兽医研究所病毒室长春130062

目的利用塞姆利基森林病毒(SFV)复制子构建新型真核表达载体,并对含HIV-1中国流行株B亚型核心蛋白p24及多表位MEG嵌合基因的核酸疫苗进行表达与鉴定。方法将含SFV复制子的元件从pSFV-MCS中切下,连入含CMV启动子及增强子的pIRESneo载体中... 详细信息

目的利用塞姆利基森林病毒(SFV)复制子构建新型真核表达载体,并对含HIV-1中国流行株B亚型核心蛋白p24及多表位MEG嵌合基因的核酸疫苗进行表达与鉴定。方法将含SFV复制子的元件从pSFV-MCS中切下,连入含CMV启动子及增强子的pIRESneo载体中,构建新型真核表达载体pCS,再将含HIV-1 MEGp24基因插入至pCS载体中,构建重组核酸疫苗pCS-MEGp24。用脂质体法将重组质粒转染入BHK-21细胞,进行表达产物的检测。结果间接免疫荧光检测显示,重组质粒转染的BHK-21细胞能有效表达HIV-1 MEGp24,并与HIV阳性血清反应。结论所构建的核酸疫苗可在BHK-21细胞系内进行表达,且MEGp24基因的表达蛋白具有特异性,为构建新型HIV-1中国流行株核酸疫苗的可行性提供了重要实验依据。

关键词：人免疫缺陷病毒塞姆利基森林病毒复制子核酸疫苗

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HIV多表位核酸疫苗构建及其免疫原性

中国生物制品学杂志 2007年第3期20卷 178-180页

作者：李臻金宁一金洪涛沈国顺付延军辛苏文韩贞珍刘玉生吉林大学畜牧兽医学院长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所病毒室长春130062 沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110161 延边大学农学院龙井133400 山西农业大学动物科技学院太谷030801

目的设计新型HIV复合多表位疫苗,并检测其在小鼠体内的免疫效果。方法检索抗原表位数据库,进行新型HIV多表位核酸疫苗的设计,利用化学合成的方法合成多表位基因,并构建重组质粒pVAX1-MEGNp24,转染BHK-21细胞,间接免疫荧光法检测多表位... 详细信息

目的设计新型HIV复合多表位疫苗,并检测其在小鼠体内的免疫效果。方法检索抗原表位数据库,进行新型HIV多表位核酸疫苗的设计,利用化学合成的方法合成多表位基因,并构建重组质粒pVAX1-MEGNp24,转染BHK-21细胞,间接免疫荧光法检测多表位基因的表达。重组质粒免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测抗体动态变化,流式细胞仪检测脾T淋巴细胞亚类。结果重组质粒pVAX1-MEGNp24经酶切及测序分析,证明构建正确。间接免疫荧光显示能在BHK-21细胞中表达多表位基因。免疫小鼠可诱导小鼠特异性体液免疫和细胞免疫。结论已成功构建了重组质粒pVAX1-MEGNp24,小鼠免疫试验显示其具有良好的免疫原性。

关键词：人免疫缺陷病毒核酸疫苗多表位抗原

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猪繁殖障碍与呼吸道综合征的研究进展

中国畜牧兽医 2007年第5期34卷 109-111页

作者：韩贞珍李太元李艳茹延边大学农学院龙井133400

猪繁殖障碍与呼吸道综合征(PRRS)是由PRRSV引起的一种猪传染病,该病以母猪发热,厌食,流产,胎儿干尸化,产弱仔等繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征。PRRSV分为欧洲亚型和美洲亚型,这2个亚型的临床症状相似,但在病毒的抗原性... 详细信息

猪繁殖障碍与呼吸道综合征(PRRS)是由PRRSV引起的一种猪传染病,该病以母猪发热,厌食,流产,胎儿干尸化,产弱仔等繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征。PRRSV分为欧洲亚型和美洲亚型,这2个亚型的临床症状相似,但在病毒的抗原性、基因组成及结构上存在较大的差别。十几年来,PRRS给全球养猪业带来巨大经济损失,成为困扰当今世界养猪业健康发展的主要问题之一。作者主要就PRRS的病原、流行病学、发病机制、诊断和防制的研究进展作一综述。

关键词：猪繁殖障碍与呼吸道综合征病原流行病学发病机制防制诊断

表达PRRSV ORF5和PCV2 ORF2基因的重组鸡痘病毒的构建及鉴定

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中国预防兽医学报 2007年第6期29卷 405-409页

作者：沈国顺金宁一庄天中韩贞珍李阳张金双吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062

分别将猪圆环病毒2型的ORF2基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF5基因,插入到鸡痘病毒转移载体pUTA2-16-LacZ单一启动子和复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-ORF5-ORF2。将该重组质粒与鸡痘病毒282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞... 详细信息

分别将猪圆环病毒2型的ORF2基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF5基因,插入到鸡痘病毒转移载体pUTA2-16-LacZ单一启动子和复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-ORF5-ORF2。将该重组质粒与鸡痘病毒282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞,进行同源重组。通过3次溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)加压筛选,经RT-PCR、IFA和Western blot鉴定,表明重组鸡痘病毒中的目的基因在鸡胚成纤维细胞中得到表达,获得一株携带有目的基因ORF2和ORF5的重组鸡痘病毒rFPV-ORF2-ORF5。

关键词： PRRSV ORF5 PCV-2 ORF2 鸡痘病毒

褪黑素调控Nrf2信号轴对猪卵母细胞体外成熟及其胚胎发育的影响

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中国兽医科学 2023年第10期53卷 1326-1332页

作者：徐妲赵茜敏毕阳韩贞珍倪思怡姜佳旭李琪韩毅潘晓燕金一吉林医药学院吉林吉林132013 内蒙古自治区国际蒙医医院内蒙古呼和浩特750306 葫芦岛市现代农业发展服务中心辽宁葫芦岛125000 延边大学吉林延吉133001

为研究褪黑素在猪卵母细胞体外培养成熟及胚胎发育过程中Nrf2信号轴的调控机制,试验分为0(对照组)、10 nmol/L、100 nmol/L和1000 nmol/L褪黑素处理组,利用Western-blot、活性氧检测、线粒体膜电位检测和实时荧光定量PCR等方法,检测猪... 详细信息

为研究褪黑素在猪卵母细胞体外培养成熟及胚胎发育过程中Nrf2信号轴的调控机制,试验分为0(对照组)、10 nmol/L、100 nmol/L和1000 nmol/L褪黑素处理组,利用Western-blot、活性氧检测、线粒体膜电位检测和实时荧光定量PCR等方法,检测猪卵母细胞体外成熟、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路相关基因及蛋白表达、线粒体分布、氧化应激相关基因表达和体外受精胚胎的发育情况。结果显示,添加100 nmol/L褪黑素处理组的卵母细胞体外成熟率、体外受精胚胎卵裂率、卵母细胞线粒体膜电位水平、Nrf2、SOD1和HO-1 m RNA转录水平均显著升高(P<0.05),但Bax基因表达显著下调(P<0.05),Keap1基因与对照组无差异。10和100 nmol/L褪黑素处理组Bcl-2基因显著上调(P<0.05),在84 ku处出现Nrf2蛋白标记。100、1000 nmol/L褪黑素处理组Nrf2蛋白含量和体外受精胚胎的囊胚率显著升高,但卵母细胞氧化应激水平却显著降低(P<0.05)。结果表明,褪黑素可以调控体外成熟的猪卵母细胞Nrf2蛋白表达,进而影响卵母细胞成熟率、线粒体分布、氧化应激水平、Nrf2信号轴相关基因表达和体外受精胚胎的发育。

关键词：褪黑素卵母细胞活性氧线粒体膜电位核转录因子E2相关因子2

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猪苓菌丝体多糖对小鼠免疫水平的影响

中国兽医学报 2007年第1期27卷 88-90,94页

作者：李太元田广燕许广波李艳茹金庆日王浩然付延军韩贞珍延边大学农学院吉林延吉133400 吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062

通过人工液体浅层培养方式培养猪苓菌丝体,用热水浸提法提取猪苓菌丝体多糖(PPS1),经纯化测定其糖含量,用红外光谱分析鉴定多糖;纯化鉴定的PPS1,通过小鼠进行腹腔单核巨噬细胞功能测定试验、E玫瑰花环试验、足跖肿胀厚度试验、淋巴细胞... 详细信息

通过人工液体浅层培养方式培养猪苓菌丝体,用热水浸提法提取猪苓菌丝体多糖(PPS1),经纯化测定其糖含量,用红外光谱分析鉴定多糖;纯化鉴定的PPS1,通过小鼠进行腹腔单核巨噬细胞功能测定试验、E玫瑰花环试验、足跖肿胀厚度试验、淋巴细胞转化试验、EAC花环试验等5项免疫学试验初步探讨其免疫药理学作用,同时与猪苓菌核多糖(PPS2)进行比较。试验数据经统计学分析显示,E玫瑰花环试验中PPS1与空白对照组相比差异显著(P<0.05);腹腔单核巨噬细胞功能测定试验、足跖肿胀厚度试验、淋巴细胞转化试验及EAC花环试验PPS1与空白对照组相比差异极显著(P<0.01);5项免疫学试验PPS1与PPS2相比差异均不显著。结果表明,PPS1能明显提高小鼠的免疫功能。

关键词：猪苓菌丝体多糖液体浅层培养免疫小鼠

猪苓菌核与猪苓菌丝体中提取多糖对小鼠免疫器官重量影响的比较研究

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延边大学农学学报 2005年第2期27卷 83-86页

作者：田广燕李太元许广波金庆日韩贞珍延边大学农学院动物医学系吉林龙井133400

通过人工液体浅层培养的方法成功培养出猪苓菌丝体.用热水浸提法分别提取猪苓菌核和猪苓菌丝体中的多糖,并用3,5-二硝基水杨酸法测定其糖含量,进一步纯化处理后,用傅里叶红外吸收光谱仪进行比较分析表明,两者红外光谱图相似.通过对小鼠... 详细信息

通过人工液体浅层培养的方法成功培养出猪苓菌丝体.用热水浸提法分别提取猪苓菌核和猪苓菌丝体中的多糖,并用3,5-二硝基水杨酸法测定其糖含量,进一步纯化处理后,用傅里叶红外吸收光谱仪进行比较分析表明,两者红外光谱图相似.通过对小鼠免疫器官重量的免疫学检测,表明从猪苓菌丝体中提取的多糖和从猪苓菌核中提取的多糖均有提高机体免疫器官重量的作用,统计学分析表明差异不显著.

关键词：猪苓菌丝体猪苓菌核猪苓多糖免疫

猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白和SEA共表达核酸疫苗的构建及鉴定

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中国兽医学报 2008年第1期28卷 9-11页

作者：韩贞珍金宁一沈国顺庄天中孙中锋李臻付延军李太元李红文郑敏军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062 延边大学农学院吉林龙井133400

构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M蛋白和金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)共表达的核酸疫苗,并研究其表达产物的抗原性。将采自长春患PRRS病猪的组织剪碎充分研磨,提取病毒RNA后,用RT-PCR的方法特异性扩增PRRSV长春株的ORF6基因(M蛋白)片... 详细信息

构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M蛋白和金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)共表达的核酸疫苗,并研究其表达产物的抗原性。将采自长春患PRRS病猪的组织剪碎充分研磨,提取病毒RNA后,用RT-PCR的方法特异性扩增PRRSV长春株的ORF6基因(M蛋白)片段。将该片段定向插入到载体pKS-SEA上,双酶切获得片段SEA-ORF6,再将其克隆到真核表达载体pVAXI中,构建重组质粒pVAXI-SEA-ORF6,转化大肠杆菌。经酶切鉴定后,将构建的阳性重组质粒在BHK细胞中表达。通过间接免疫荧光方法初步检测所表达蛋白的抗原性,用Western blot分析表达蛋白的特异性。结果表明,所构建的重组质粒pVAXI-SEA-ORF6在BHK细胞中得到了表达,为进一步研究PRRSV基因工程疫苗奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征表达核酸疫苗

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简述家畜疫病用药原则

中国畜禽种业 2014年第11期10卷 78-78页

作者：韩贞珍辽宁省葫芦岛市动物疫病预防控制中心 125000

家畜养殖离不开药物的使用，药物防治就是用一切有治疗或预防作用的药物用于家畜疫病，使疫病好转或痊愈，以避免疫病的发生或防止疫病的蔓延。正确使用，不仅可以防止家畜疫病的发生、发展，还可以促进家畜健康、生长，增加效益；相反... 详细信息

家畜养殖离不开药物的使用，药物防治就是用一切有治疗或预防作用的药物用于家畜疫病，使疫病好转或痊愈，以避免疫病的发生或防止疫病的蔓延。正确使用，不仅可以防止家畜疫病的发生、发展，还可以促进家畜健康、生长，增加效益；相反使用不当,不仅使疫病不能有效控制，甚至会产生副作用。造成一定的经济损失。为避免此类情况发生。要按着不同疫病、不同年龄、不同性别等多个方面的特点和药物不同的特性等来科学选药、用药,这样才能充分发挥药物的治疗效果。为此，介绍家畜疫病用药治疗应掌握几条原则。

关键词：家畜疫病用药原则药物防治治疗效果预防作用家畜健康使用不当经济损失