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HBsAg与恒定链融合基因真核表达载体的构建及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第6期20卷 727-728页

作者：白俊任军韩月恒韩者艺许彦鸣第四军医大学西京医院肿瘤科陕西西安710032 第四军医大学西京医院消化科陕西西安710032 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

我国是乙型病毒肝炎的高发国家,约有1.2亿有HBV携带者,而原发性肝癌中90%的患者有HBV感染[1].研究者发现,72.7%的肝癌旁组织及45%的肝癌组织中可检出HBsAg,故其可作为肝炎后肝癌患者免疫治疗的相对特异的"肿瘤相关分子"[2].……

关键词：恒定链 HBsAg a位点外来体

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水飞蓟素对乳腺癌细胞系的作用及其机制研究

中草药 2003年第3期34卷 238-241页

作者：韩月恒韩炯李莹刘新平药立波第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的　研究水飞蓟素在体外对不同乳腺癌细胞系的作用 ,并进一步探讨其作用机制。方法　 MTT实验测定水飞蓟素对乳腺癌细胞系 MCF- 7和 SK- BR- 3的半数抑制浓度 ( IC50 ) ;软琼脂克隆形成试验检测加药后两种细胞在软琼脂内的增殖能力。... 详细信息

目的　研究水飞蓟素在体外对不同乳腺癌细胞系的作用 ,并进一步探讨其作用机制。方法　 MTT实验测定水飞蓟素对乳腺癌细胞系 MCF- 7和 SK- BR- 3的半数抑制浓度 ( IC50 ) ;软琼脂克隆形成试验检测加药后两种细胞在软琼脂内的增殖能力。在此基础上 ,用 Her- 2抑制剂 AG82 5进行干预 ,对水飞蓟素的作用机制进行初步探讨。结果　水飞蓟素对两种乳腺癌细胞有不同程度的抑制作用 ,其中对 MCF- 7细胞的作用较强 ,IC50 ≤ 0 .0 2 %,而对SK- BR- 3的作用较弱。 Her- 2抑制剂 AG82 5可增加 SK- BR- 3细胞对药物的敏感性 ,抑制了水飞蓟素作用后该细胞在软琼脂中集落的形成。结论　水飞蓟素在体外对 MCF- 7细胞具有明显的抑制作用 ,而 AG82 5可增强 SK- BR-3细胞对药物的敏感性。因此 ,SK- BR- 3细胞中 Her- 2的高表达可能是该细胞对水飞蓟素敏感性差的原因 ,而水飞蓟素也可能通过 Her- 2调节某个或某几个下游分子起作用。

关键词：水飞蓟素乳腺癌 Her-2 AG825

OS-9基因的融合表达、纯化及多克隆抗体制备

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第3期19卷 327-331页

作者：韩月恒张文红沈岚季少平刘新平药立波第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

OS 9基因广泛表达于人体多种组织 ,该基因的表达产物可能与肿瘤的发生相关 .为获得可溶性表达的OS 9蛋白 ,制备多克隆抗体 ,深入了解OS 9基因的功能 ,将OS 9基因片段克隆入组氨酸标签融合的表达载体pET2 8a中 ,IPTG诱导 ,利用金属螯合... 详细信息

OS 9基因广泛表达于人体多种组织 ,该基因的表达产物可能与肿瘤的发生相关 .为获得可溶性表达的OS 9蛋白 ,制备多克隆抗体 ,深入了解OS 9基因的功能 ,将OS 9基因片段克隆入组氨酸标签融合的表达载体pET2 8a中 ,IPTG诱导 ,利用金属螯合亲和层析 (MCAC)进行纯化 ,薄层扫描及Bradford法检测纯化蛋白的纯度与含量 .免疫家兔制备多克隆抗体 ,利用间接ELISA法检测抗体效价 ,Western印迹检测抗体特异性 .经表达形式分析证明 ,融合蛋白大部分可溶 .薄层扫描分析纯度可达 90 %以上 ,Bradford法检测蛋白浓度约 0 1mg ml.抗血清效价可达 1∶32 0 0以上 ,Western印迹检测证明抗体特异性良好 .经诱导表达及纯化制备出可溶的纯度较高的OS 9蛋白产物。

关键词： OS-9基因融合表达纯化多克隆抗体肿瘤

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葡萄籽提取物原花青素诱导胃癌细胞脱落凋亡

中国药理学通报 2004年第7期20卷 761-764页

作者：李莹药立波韩炯王立峰韩月恒刘新平林树新俞强第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学病理生理学教研室陕西西安710032 中国科学院上海药物研究所上海201203

目的　研究葡萄籽提取物原花青素诱导胃癌细胞脱落凋亡的作用。方法　采用细胞形态学观察、Annxin V和PI细胞染色实验和流式细胞仪检测方法观察原花青素对悬浮培养的胃癌细胞生长状态和细胞周期的影响以及诱导脱落凋亡的作用。结果　 0 ... 详细信息

目的　研究葡萄籽提取物原花青素诱导胃癌细胞脱落凋亡的作用。方法　采用细胞形态学观察、Annxin V和PI细胞染色实验和流式细胞仪检测方法观察原花青素对悬浮培养的胃癌细胞生长状态和细胞周期的影响以及诱导脱落凋亡的作用。结果　 0 1mmol·L-1原花青素可抑制抗脱落凋亡的胃癌细胞聚集成团 ,0 5mmol·L-1原花青素可阻滞悬浮培养的不同胃癌细胞于不同的细胞周期 ,并诱导胃癌细胞发生脱落凋亡。

关键词：原花青素脱落凋亡胃癌细胞

Tec家族蛋白酪氨酸激酶Itk PH结构域与OS-9蛋白的相互作用

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第4期19卷 499-503页

作者：韩月恒张文红张晓光刘新平药立波第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

用酵母双杂交技术筛选与ItkPH结构域相互作用的蛋白分子 ,以了解Itk的功能及其在T细胞信号转导中的位置与作用 .Itk的PH结构域扩增后克隆入酵母双杂交系统的pLexA载体 ,转化酵母细胞EGY4 8(p8op lacZ) ,经检测PH结构域无自激活作用 ,且... 详细信息

用酵母双杂交技术筛选与ItkPH结构域相互作用的蛋白分子 ,以了解Itk的功能及其在T细胞信号转导中的位置与作用 .Itk的PH结构域扩增后克隆入酵母双杂交系统的pLexA载体 ,转化酵母细胞EGY4 8(p8op lacZ) ,经检测PH结构域无自激活作用 ,且对酵母细胞无毒性作用 .用PH结构域作为“钓饵”蛋白 ,在酵母双杂交系统中筛选构建于AD载体的T细胞cDNA文库 .将PH结构域及筛库所得基因片段分别进行融合表达 ,用于体外结合实验 ,进一步证实二者的相互作用 .经营养缺陷选择、诱导筛选和鉴定确证 ,筛库所得的插段约 15 0 0bp的文库质粒为一真阳性克隆 .经blast比较分析为骨肉瘤、横纹肌肉瘤等肿瘤组织中高表达的os 9基因 .体外结合实验也表明 ,ItkPH结构域可与该基因表达产物结合 .Itk的PH结构域可与OS 9蛋白相互作用 .

关键词： Tec家族蛋白酪氨酸激酶 Itk PH结构域 OS-9蛋白酵母双杂交系统融合表达

Ndrg2基因及NDRG2蛋白的生物信息学分析

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第四军医大学学报 2003年第17期24卷 1537-1539页

作者：张文红刘新平王琰韩月恒药立波第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710033 第四军医大学科研部全军基因诊断技术应用研究所陕西西安710033

目的 :对ndrg2 (n mycdownsreamregulatorgene 2 )基因调控区和NDRG2蛋白序列进行生物信息学分析 ,从结构上预测其功能 .方法 :运用internet网络上的数据库及程序 ,对ndrg2基因的调控区和NDRG2蛋白的二级结构进行生物信息学分析 .结果 :... 详细信息

目的 :对ndrg2 (n mycdownsreamregulatorgene 2 )基因调控区和NDRG2蛋白序列进行生物信息学分析 ,从结构上预测其功能 .方法 :运用internet网络上的数据库及程序 ,对ndrg2基因的调控区和NDRG2蛋白的二级结构进行生物信息学分析 .结果 :ndrg2基因调控区存在多种转录因子结合位点 ,功能主要涉及组织特异性表达调控 ,细胞生长发育相关基因和应激反应基因的表达调控等 ;NDRG2蛋白的结构属于α/β水解酶类折叠 ,其分类预测表明与细菌环氧化物水解酶的二级结构极为相似 .结论 :生物信息学分析提示NDRG2蛋白具有一定的酶活性 ,可能参与细胞抗氧化应激反应 ,内外源有毒物质的代谢。

关键词： ndrg2基因 NDRG2蛋白生物信息学分析 α/β水解酶

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NDRG2蛋白的毕赤酵母可溶表达与纯化

第四军医大学学报 2003年第12期24卷 1061-1065页

作者：张文红刘新平王琰韩月恒药立波第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710033 第四军医大学科研部基因诊断技术应用研究所陕西西安710033

目的 :酵母表达并纯化可溶性NDRG2蛋白 .方法 :从 pRSET A ndrg2重组质粒中扩增出 6his ndrg2融合基因 ,克隆入酵母表达载体 pPIC3.5K ;酵母重组表达载体pPIC3.5K 6his ndrg2电转化入毕赤酵母GS115 ,并进行营养缺陷筛选和G4 18抗性筛选 ... 详细信息

目的 :酵母表达并纯化可溶性NDRG2蛋白 .方法 :从 pRSET A ndrg2重组质粒中扩增出 6his ndrg2融合基因 ,克隆入酵母表达载体 pPIC3.5K ;酵母重组表达载体pPIC3.5K 6his ndrg2电转化入毕赤酵母GS115 ,并进行营养缺陷筛选和G4 18抗性筛选 ;对高拷贝整合的重组酵母表达菌株诱导表达 ,可溶性表达产物经Ni NTA亲合层析纯化 .结果 :构建得到酵母融合重组表达载体 pPIC3.5K 6his ndrg2 ;经G4 18浓度梯度筛选得到串联整合 16个重组表达载体以上的重组酵母表达菌株 ;诱导后表达得到 6his NDRG2融合蛋白 ,并成功纯化得到可溶性表达产物 .结论 :表达并纯化得到可溶性NDRG2蛋白 ,为进一步研究NDRG2的结构与功能打下了必要的基础 .

关键词： NDRG2蛋白毕赤酵母基因表达亲合纯化

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白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡

中草药 2004年第10期35卷 1138-1140页

作者：李莹药立波王立峰韩炯韩月恒刘新平林树新俞强第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学病理生理学教研室陕西西安710032 中国科学院上海药物研究所上海201203

目的研究白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡的作用。方法采用细胞形态学观察、Annxin-V和PI细胞染色和流式细胞仪检测,观察白藜芦醇(0.1、0.2、0.5 mmol/L)对脱落培养胃癌细胞B(3C823、SGC7901和HGC27的生长状态、细胞周期的影响及诱导脱... 详细信息

目的研究白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡的作用。方法采用细胞形态学观察、Annxin-V和PI细胞染色和流式细胞仪检测,观察白藜芦醇(0.1、0.2、0.5 mmol/L)对脱落培养胃癌细胞B(3C823、SGC7901和HGC27的生长状态、细胞周期的影响及诱导脱落凋亡的作用。结果倒置显微镜下发现脱落培养的胃癌细胞聚集成团生长,0.1 mmol/L白藜芦醇作用细胞后可抑制抗脱落凋亡的胃癌细胞聚集成团;流式细胞仪检测和Annxin-V和PI细胞染色表明0.5 mmol/L白藜芦醇可分别阻滞脱落培养的BG(2823、SGC7901和HGC27细胞于G0/G1、S、G2/M期,并可诱导这3株胃癌细胞发生脱落凋亡,其中自藜芦醇诱导HGC27细胞脱落凋亡比例达19.3％,远高于其他两株胃癌细胞。结论白藜芦醇可诱导胃癌细胞发生脱落凋亡。

关键词：白藜芦醇脱落凋亡胃癌细胞

虎仗提取物白藜芦醇诱导胃癌细胞HGC27凋亡

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第四军医大学学报 2004年第19期25卷 1797-1799页

作者：李莹药立波王立峰韩炯韩月恒刘新平林树新俞强第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710033 第四军医大学基础部病理生理学教研室陕西西安710033 中国科学院上海药物研究所上海201203

目的 :观察虎仗提取物白藜芦醇对胃癌细胞HGC2 7细胞周期和增殖的影响及凋亡诱导作用 .方法 :采用MTT法和软琼脂集落形成实验观察白藜芦醇对细胞增殖的影响 ,Annxin V&PI染色及流式细胞仪检测观察白藜芦醇对细胞周期的影响及诱导凋亡的... 详细信息

目的 :观察虎仗提取物白藜芦醇对胃癌细胞HGC2 7细胞周期和增殖的影响及凋亡诱导作用 .方法 :采用MTT法和软琼脂集落形成实验观察白藜芦醇对细胞增殖的影响 ,Annxin V&PI染色及流式细胞仪检测观察白藜芦醇对细胞周期的影响及诱导凋亡的作用 .结果 :MTT实验发现白藜芦醇作用HGC2 7细胞 2 4h后 ,细胞存活率显著下降 (P <0 .0 1)并呈剂量依赖性 ,软琼脂集落形成实验发现HGC2 7细胞在0 .5mmol/L白藜芦醇作用下无细胞集落的形成 ,Annxin V&PI染色及流式细胞仪检测发现白藜芦醇可引起HGC2 7阻滞于G1期 ,并可诱导HGC2 7发生凋亡 (8.39% ) .结论 :白藜芦醇可抑制胃癌细胞HGC2 7增殖并可诱导细胞发生凋亡 .

关键词：白藜芦醇凋亡胃肿瘤肿瘤细胞 HGC27