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苦荞类黄酮糖基转移酶FtUFGT1的重组表达与酶学性质分析

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西北植物学报 2021年第9期41卷 1450-1456页

作者：李睿林韩小韦陈鹏西北农林科技大学生命科学学院陕西杨陵712100

黄酮类化合物是苦荞重要的功能性成分,其糖基化修饰可改变生物体内黄酮类化合物的稳定性、可溶性及生物活性。该研究基于苦荞转录组数据并以苦荞叶片中提取的总RNA为材料,利用RT-PCR克隆了苦荞类黄酮糖基转移酶(UDP-glycose:flavonoidgl... 详细信息

黄酮类化合物是苦荞重要的功能性成分,其糖基化修饰可改变生物体内黄酮类化合物的稳定性、可溶性及生物活性。该研究基于苦荞转录组数据并以苦荞叶片中提取的总RNA为材料,利用RT-PCR克隆了苦荞类黄酮糖基转移酶(UDP-glycose:flavonoidglycosyltransferase,UFGT)基因FtUFGT1,采用无缝克隆方式构建其重组表达载体并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态,采用GST-resin纯化重组表达的蛋白,采用高效液相色谱(HPLC)技术检测分析纯化后FtUFGT1的酶学性质。结果表明:(1)成功克隆的FtUFGT1编码区为1413 bp,其编码470个氨基酸,并成功构建了FtUFGT1的重组表达载体pGEX-6p-1-FtUFGT1。(2)经转化苦荞FtUFGT1基因在大肠杆菌Rosetta(DE3)中得到可溶性的表达,并通过GST亲和层析纯化得到高纯度的苦荞FtUFGT1蛋白。(3)HPLC分析显示,以槲皮素为底物,苦荞FtUFGT1可催化异槲皮素的合成,比活力为9.174 U/mg;重组FtUFGT1的最适温度为30℃,最适pH为7.0,5%(V/V)的甲醇和0.5%(V/V)的Triton X-100可以显著抑制其活性。研究结果为深入揭示FtUFGT1的生物学功能及体外催化黄酮类衍生物的合成奠定了基础。

关键词：苦荞类黄酮糖基转移酶原核表达酶学性质分析

核酸外切酶Ⅷ截短体的重组表达及其在体外DNA重组反应中的应用

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生物工程学报 2019年第5期35卷 827-836页

作者：朱燕韩小韦牛毅男郑蓓李学俊徐全乐陈鹏西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100

核酸外切酶Ⅷ(ExonucleaseⅧ,ExoⅧ)是一种不依赖于ATP的dsDNA 5?-3?核酸外切酶,可作为体外DNA重组反应极具应用价值的候选蛋白。目前关于ExoⅧ在体外DNA重组反应中的应用尚未有文献报道。本研究构建了保留完整外切活性的截短ExoⅧ(Trun... 详细信息

核酸外切酶Ⅷ(ExonucleaseⅧ,ExoⅧ)是一种不依赖于ATP的dsDNA 5?-3?核酸外切酶,可作为体外DNA重组反应极具应用价值的候选蛋白。目前关于ExoⅧ在体外DNA重组反应中的应用尚未有文献报道。本研究构建了保留完整外切活性的截短ExoⅧ(Truncated exonucleaseⅧ,tExoⅧ)的重组表达载体pET28a-tExoⅧ,实现了tExoⅧ在大肠杆菌中的高效表达,在纯化获得高纯度蛋白的基础上,对体外重组反应的温度、反应时间、同源臂长度等因素进行了优化分析。研究结果表明,tExoⅧ在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达,每升可纯化92.40 mg tExoⅧ,比活力为1.21×10~5 U/mg;在10μL的重组体系中,2.5 U的tExoⅧ于25℃反应12.5min随后50℃保温50 min时重组效率最高。添加Pfu DNA聚合酶的体外同源臂延伸策略可以有效提高重组克隆的效率。以转化效率为2.2×10~6 CFU/μg的Mach1T1为受体细胞,对于含有21 bp同源臂的1 kb片段与5.8 kb线性化载体的重组,每微克载体可形成1.1×10~4个重组克隆,且阳性率大于80%。同源臂长度在8–21bp范围内,重组反应效率随着同源臂长度增加而提高。在最佳反应条件下,同源臂长度仅为8bp仍可实现有效的重组反应。ExoⅧ介导的体外重组体系具有酶制备方法简单、对DNA的克隆无酶切位点限制及高重组克隆效率等显著优点,是分子生物学领域具有潜在应用价值的高效基因克隆新体系。

关键词：核酸外切酶Ⅷ截短体表达纯化体外同源重组

粪肠球菌源EndoE的重组表达及酶学性质研究

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农业生物技术学报 2019年第6期27卷 1118-1125页

作者：韩小韦黄云娜牛毅男李学俊徐全乐陈鹏西北农林科技大学生命科学学院广州市从化区从化中学

内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(Endo-β-N-acetylglucosaminidase, ENGase, EC3.***.1.96)是糖蛋白去糖基化重要的工具酶,其可以切割糖蛋白上N-连接的聚糖。本研究基于粪肠球菌(Enterococcus faecalis)基因组数据,通过PCR扩增ENGase基因endoE (endoglycosidase E),并以同源重组方式构建表达载体pET-28a-endoE,实现了EndoE在大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 Star (DE3)中的高效表达,并对EndoE去糖化的催化特性等进行了较为系统的分析。研究结果显示,重组EndoE在大肠杆菌中以可溶形式表达,经钴离子螯合层析与阴离子交换层析可获得高纯度的目标蛋白,产量为45.6 mg/L。去糖基化活性分析表明,重组EndoE能去除天然及变性核糖核苷酸酶B (ribonuclease B, RNase B)、鸡卵白蛋白(ovalbumin, Ova)和免疫球蛋白G (immune globulin G, IgG) N-连接的糖基侧链。基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱证实了EndoE对RNase B N-连接糖链的水解活性。Endo E在20～50℃和pH 4.0～6.0的范围内均具有良好的水解活性,并对100 mmol/L二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol, DTT)、1 mol/L NaCl和2%Triton X-100具有耐受性。EndoE较已报道的粪肠球菌来源的ENGase具有更为广泛的底物作用范围,是蛋白质糖基化分析中有潜在应用价值的工具酶。

关键词：内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(ENGase) N-糖基化重组表达酶学性质

GeoGebra软件助力物理规律深入学习——以初中凸透镜成像规律为例

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物理之友 2024年第3期 55-57+71页

作者：韩典荣夏卿韦陶江苏第二师范学院物理与电子信息学院三江学院数理部物理实验室

GeoGebra软件具有强大的几何作图和函数呈现功能。利用此软件分析动态物体的凸透镜成像规律，可以形象直观地揭示物像距离变化、物速与像速关系等实验难以观测的细节，促进学生深入理解成像的规律，提高学生物理与数学结合的能力。

关键词： GeoGebra 透镜成像动点

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地质灾害风险性评估分析探讨

中文科技期刊数据库（全文版）自然科学 2024年第7期 0194-0198页

作者：江延森韦惠韩广西壮族自治区海洋地质调查院广西北海536000

本文旨在探讨地质灾害风险性评估的策略分析,以东兴市为例进行详细阐述。介绍了地质灾害的定义、分类以及评估方法的概念,并强调了评估在地质灾害防治中的重要性。对东兴市的地质环境问题和地质灾害现状进行了概述,分析了地质环境条件... 详细信息

本文旨在探讨地质灾害风险性评估的策略分析,以东兴市为例进行详细阐述。介绍了地质灾害的定义、分类以及评估方法的概念,并强调了评估在地质灾害防治中的重要性。对东兴市的地质环境问题和地质灾害现状进行了概述,分析了地质环境条件对地质灾害的影响,涵盖气象水文条件、地形地貌条件和地层岩性条件。详细讨论了地质灾害风险性评估的策略分析。本文可为地质灾害风险性评估的策略分析提供参考和借鉴。

关键词：地质灾害风险性策略分析

智能算法在建筑节能暖通空调控制中的应用与优化

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电子技术（上海） 2024年第3期53卷 192-193页

作者：韩丛韦中国航发北京航空材料研究院北京100095

阐述智能算法在建筑节能暖通空调控制中的应用,包括温度控制优化、风速和湿度控制优化、能耗预测与调整、室内外环境协同控制。探讨智能算法在建筑节能暖通空调控制中的优化方法。

关键词：智能算法建筑节能暖通空调

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计算机视觉技术在排水管道工程中的应用

集成电路应用 2024年第3期41卷 376-377页

作者：韩丛韦中国航发北京航空材料研究院北京100095

阐述基于计算机视觉的给排水管道施工特点,分析存在的问题,提出智能算法与多传感器数据融合技术的解决方案。通过系统设计和实际验证,展示这些技术在提高施工效率和质量方面的潜力。

关键词：计算机视觉智能算法给排水管道施工

农村慢性病纵向服务团队患者医疗服务连续性调查研究

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江苏卫生事业管理 2024年第4期35卷 476-481页

作者：韩相如韦小米钱东福苏州大学附属第一医院临床教学办公室江苏苏州215006 苏州大学社会学院江苏苏州215123 南京医科大学医政学院江苏南京211166

目的:探究基层慢性病服务连续性现存的主要问题和障碍,提出针对性建议,以期完善慢性病纵向服务管理模式。方法:通过采用自主设计问卷的实地调研式定量研究,收集患者主观连续性服务体验指标,运用描述性分析、卡方检验、logis⁃tics回归分... 详细信息

目的:探究基层慢性病服务连续性现存的主要问题和障碍,提出针对性建议,以期完善慢性病纵向服务管理模式。方法:通过采用自主设计问卷的实地调研式定量研究,收集患者主观连续性服务体验指标,运用描述性分析、卡方检验、logis⁃tics回归分析研究慢性病纵向服务连续性指标。结果:研究地区的慢性病患者医疗服务连续性有待提升,基层医疗资源利用率不高,患者对乡镇卫生院和县级以上医疗机构的慢性病服务满意度需要提升。结论:应在农村地区大力推行纵向服务体系,畅通基层卫生信息共享渠道,制定慢病纵向服务考核机制,提升慢病服务质量和连续性。

关键词：慢性病纵向服务团队基层医疗机构服务连续性

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以法治之力，在山水间绽放绚丽之花 004

以法治之力，在山水间绽放绚丽之花