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苦荞类黄酮糖基转移酶FtUFGT1的重组表达与酶学性质分析

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西北植物学报 2021年第9期41卷 1450-1456页

作者：李睿林韩小韦陈鹏西北农林科技大学生命科学学院陕西杨陵712100

黄酮类化合物是苦荞重要的功能性成分,其糖基化修饰可改变生物体内黄酮类化合物的稳定性、可溶性及生物活性。该研究基于苦荞转录组数据并以苦荞叶片中提取的总RNA为材料,利用RT-PCR克隆了苦荞类黄酮糖基转移酶(UDP-glycose:flavonoidgl... 详细信息

黄酮类化合物是苦荞重要的功能性成分,其糖基化修饰可改变生物体内黄酮类化合物的稳定性、可溶性及生物活性。该研究基于苦荞转录组数据并以苦荞叶片中提取的总RNA为材料,利用RT-PCR克隆了苦荞类黄酮糖基转移酶(UDP-glycose:flavonoidglycosyltransferase,UFGT)基因FtUFGT1,采用无缝克隆方式构建其重组表达载体并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态,采用GST-resin纯化重组表达的蛋白,采用高效液相色谱(HPLC)技术检测分析纯化后FtUFGT1的酶学性质。结果表明:(1)成功克隆的FtUFGT1编码区为1413 bp,其编码470个氨基酸,并成功构建了FtUFGT1的重组表达载体pGEX-6p-1-FtUFGT1。(2)经转化苦荞FtUFGT1基因在大肠杆菌Rosetta(DE3)中得到可溶性的表达,并通过GST亲和层析纯化得到高纯度的苦荞FtUFGT1蛋白。(3)HPLC分析显示,以槲皮素为底物,苦荞FtUFGT1可催化异槲皮素的合成,比活力为9.174 U/mg;重组FtUFGT1的最适温度为30℃,最适pH为7.0,5%(V/V)的甲醇和0.5%(V/V)的Triton X-100可以显著抑制其活性。研究结果为深入揭示FtUFGT1的生物学功能及体外催化黄酮类衍生物的合成奠定了基础。

关键词：苦荞类黄酮糖基转移酶原核表达酶学性质分析

核酸外切酶Ⅷ截短体的重组表达及其在体外DNA重组反应中的应用

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生物工程学报 2019年第5期35卷 827-836页

作者：朱燕韩小韦牛毅男郑蓓李学俊徐全乐陈鹏西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100

核酸外切酶Ⅷ(ExonucleaseⅧ,ExoⅧ)是一种不依赖于ATP的dsDNA 5?-3?核酸外切酶,可作为体外DNA重组反应极具应用价值的候选蛋白。目前关于ExoⅧ在体外DNA重组反应中的应用尚未有文献报道。本研究构建了保留完整外切活性的截短ExoⅧ(Trun... 详细信息

核酸外切酶Ⅷ(ExonucleaseⅧ,ExoⅧ)是一种不依赖于ATP的dsDNA 5?-3?核酸外切酶,可作为体外DNA重组反应极具应用价值的候选蛋白。目前关于ExoⅧ在体外DNA重组反应中的应用尚未有文献报道。本研究构建了保留完整外切活性的截短ExoⅧ(Truncated exonucleaseⅧ,tExoⅧ)的重组表达载体pET28a-tExoⅧ,实现了tExoⅧ在大肠杆菌中的高效表达,在纯化获得高纯度蛋白的基础上,对体外重组反应的温度、反应时间、同源臂长度等因素进行了优化分析。研究结果表明,tExoⅧ在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达,每升可纯化92.40 mg tExoⅧ,比活力为1.21×10~5 U/mg;在10μL的重组体系中,2.5 U的tExoⅧ于25℃反应12.5min随后50℃保温50 min时重组效率最高。添加Pfu DNA聚合酶的体外同源臂延伸策略可以有效提高重组克隆的效率。以转化效率为2.2×10~6 CFU/μg的Mach1T1为受体细胞,对于含有21 bp同源臂的1 kb片段与5.8 kb线性化载体的重组,每微克载体可形成1.1×10~4个重组克隆,且阳性率大于80%。同源臂长度在8–21bp范围内,重组反应效率随着同源臂长度增加而提高。在最佳反应条件下,同源臂长度仅为8bp仍可实现有效的重组反应。ExoⅧ介导的体外重组体系具有酶制备方法简单、对DNA的克隆无酶切位点限制及高重组克隆效率等显著优点,是分子生物学领域具有潜在应用价值的高效基因克隆新体系。

关键词：核酸外切酶Ⅷ截短体表达纯化体外同源重组

粪肠球菌源EndoE的重组表达及酶学性质研究

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农业生物技术学报 2019年第6期27卷 1118-1125页

作者：韩小韦黄云娜牛毅男李学俊徐全乐陈鹏西北农林科技大学生命科学学院广州市从化区从化中学

内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(Endo-β-N-acetylglucosaminidase, ENGase, EC3.***.1.96)是糖蛋白去糖基化重要的工具酶,其可以切割糖蛋白上N-连接的聚糖。本研究基于粪肠球菌(Enterococcus faecalis)基因组数据,通过PCR扩增ENGase基因endoE (endoglycosidase E),并以同源重组方式构建表达载体pET-28a-endoE,实现了EndoE在大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 Star (DE3)中的高效表达,并对EndoE去糖化的催化特性等进行了较为系统的分析。研究结果显示,重组EndoE在大肠杆菌中以可溶形式表达,经钴离子螯合层析与阴离子交换层析可获得高纯度的目标蛋白,产量为45.6 mg/L。去糖基化活性分析表明,重组EndoE能去除天然及变性核糖核苷酸酶B (ribonuclease B, RNase B)、鸡卵白蛋白(ovalbumin, Ova)和免疫球蛋白G (immune globulin G, IgG) N-连接的糖基侧链。基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱证实了EndoE对RNase B N-连接糖链的水解活性。Endo E在20～50℃和pH 4.0～6.0的范围内均具有良好的水解活性,并对100 mmol/L二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol, DTT)、1 mol/L NaCl和2%Triton X-100具有耐受性。EndoE较已报道的粪肠球菌来源的ENGase具有更为广泛的底物作用范围,是蛋白质糖基化分析中有潜在应用价值的工具酶。

关键词：内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(ENGase) N-糖基化重组表达酶学性质

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人际真诚在同事互动及团队工作中的作用

心理科学进展 2021年第4期29卷 597-609页

作者：汤一鹏任芷宇蒲小萍韩韦中南财经政法大学工商管理学院武汉430073 武汉理工大学管理学院武汉430070

真诚作为人际交往的基础,在工作互动中十分重要。不真诚不仅会给员工造成巨大的压力,同时也会给企业带来直接或间接的经济损失。管理学者近年来逐渐意识到这个问题的严重性,并越来越重视对于真诚的研究。现有研究主要是从基于自我的视... 详细信息

真诚作为人际交往的基础,在工作互动中十分重要。不真诚不仅会给员工造成巨大的压力,同时也会给企业带来直接或间接的经济损失。管理学者近年来逐渐意识到这个问题的严重性,并越来越重视对于真诚的研究。现有研究主要是从基于自我的视角将真诚当作个体特征,探讨个体真诚对其领导效能和心理健康的影响。然而,真诚的本质内涵中包含着人际的取向。因此,为了探讨真诚作为一种人际特征如何影响同事互动,本研究从社会关系视角提出人际真诚的概念,也就是说即使同一个人在不同人际互动中所展现的真诚可能在程度和性质上都有所不同。在此基础上,结合以往的研究和理论分析和澄清人际真诚如何作用于员工的同事互动,并进一步揭示人际真诚怎样影响其团队地位。

关键词：人际真诚同事互动社会关系视角

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高速公路资产证券化融资可行性方法研究

统计与决策 2006年第11期22卷 112-113页

作者：梅世强韩韦天津大学管理学院

随着高速公路建设步伐的加快,目前较为突出的是公路行业贷款总量偏高,日益突出的风险问题对公路行业、金融行业乃至国民经济整体都造成了潜在的不利影响.而与此同时,股票市场融资的潜力还没有充分发挥,债券等一些有潜力的融资渠道还很... 详细信息

随着高速公路建设步伐的加快,目前较为突出的是公路行业贷款总量偏高,日益突出的风险问题对公路行业、金融行业乃至国民经济整体都造成了潜在的不利影响.而与此同时,股票市场融资的潜力还没有充分发挥,债券等一些有潜力的融资渠道还很不畅通.

关键词：高速公路建设资产证券化融资可行性公路行业贷款总量风险问题不利影响国民经济金融行业市场融资

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企业价值链预算管理研究

企业价值链预算管理研究

作者：韩韦天津大学

学位级别：硕士

近几年来,随着市场竞争日趋激烈,价值链管理作为一种先进的管理理念,日益得到理论与实务界的广泛接受,也是管理会计发展的重要方向。我国阎达五教授于近年首先提出价值链会计,为现行会计模式变革指明了方向和提供了极有意义的参考。本... 详细信息

近几年来,随着市场竞争日趋激烈,价值链管理作为一种先进的管理理念,日益得到理论与实务界的广泛接受,也是管理会计发展的重要方向。我国阎达五教授于近年首先提出价值链会计,为现行会计模式变革指明了方向和提供了极有意义的参考。本文试图以价值链管理思想为指导,以传统预算管理方法为基础,对价值链预算管理方法进行了探索性的研究。本文较系统地构建了企业价值链预算管理体系,使之成为有效实施预算管理的基础,并在此基础之上,对价值链预算的编制和控制方法进行了研究。本文首先构建了价值链预算管理组织体系和执行组织体系,提出预算指标体系与平衡计分卡结合的设计思想,将价值链分析及优化加入到传统的管理内容体系中;其次,从定性和定量两方面论述了价值链分析及优化对预算编制的影响,鉴于与作业预算的异同点,建立了价值链预算的编制方法步骤,并与弹性预算、滚动预算等战略性编制方法结合起来,使其更适应当前多变的市场环境;然后,分析了价值链预算控制模式选择的总原则及不同战略目标下预算控制模式的选择原则,比较了价值链预算与传统预算在控制上的主要异同点,重点分析了对行业价值链预算实施控制的原因及特点;最后,采用传统的业绩反馈报告和差异分析控制方法,但更强调非财务指标反馈与进行多维度的差异分析,并以作业的财务信息为重点,设计了一系列业绩反馈报告的形式和进行了差异分析方法的研究。

关键词：价值链预算管理作业基础管理作业预算

基于混合特征表达的RGB-D点云配准方法研究

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基于混合特征表达的RGB-D点云配准方法研究

作者：韩韦安庆师范大学

学位级别：硕士

真实物体的三维重建是计算机视觉、计算机图形学等领域的研究热点,在逆向工程、三维动画、文物数字化保护、医学图像处理等领域都有着广泛的应用前景。在进行真实物体的三维重建时,需要扫描多个视角获取物体表面的数据,因此,不同视角的... 详细信息

真实物体的三维重建是计算机视觉、计算机图形学等领域的研究热点,在逆向工程、三维动画、文物数字化保护、医学图像处理等领域都有着广泛的应用前景。在进行真实物体的三维重建时,需要扫描多个视角获取物体表面的数据,因此,不同视角的点云配准是三维重建中的重要步骤。随着科学技术的发展,三维扫描设备随之在不断改进,不仅可以采集到真实物体的深度信息而且可以获取物体的颜色信息,因此,关于RGB-D点云配准问题在三维重建领域有着重要的研究意义。针对RGB-D数据的初始配准,本文提出了一种基于混合特征的RGB-D数据配准方法。首先,计算两片点云的几何曲率特征值,并定义两片点云的颜色特征,由几何特征与颜色特征加权组合构成混合特征。其次,根据混合特征在源点云中获取特征点,并由混合特征值和归一化后的RGB值构成特征向量,再根据特征点的特征向量在目标点云中搜索对应点,构成对应点对。最后,计算每个点对在特征向量空间上的欧式距离,构成距离集合并计算距离均值,剔除距离大于该均值的点对,再将剩下的特征点进行分块操作,逐块配准,将每块的配准变换作用于整片点云,选择误差最小的刚性变换作为点云初始配准的最优变换,完成初始配准。在精确配准阶段,首先将RGB颜色值转换成灰度值,并将灰度值的变化范围经过线性变换,映射对齐到几何数据的变化范围,由映射后的灰度值和点云的几何信息构成(x,y,z,gray)四维向量。然后根据混合特征获得特征点,通过k近邻算法在四维向量空间搜索对应点。并定义了一种4D欧氏距离的ICP算法,利用4D-ICP迭代过程实现点云的精确配准。实验结果表明,本文提出的方法快速有效。对比局部特征统计量直方图(LFSH)方法,针对不同模型和不同重叠程度的点云数据,本文方法提出的基于混合特征的分块初始配准方法都能实现良好的配准效果,并在配准时间和配准精度上优于LFSH方法。本文提出的4D-ICP精确配准方法,结合颜色信息和传统ICP方法能快速实现RGB-D点云模型的精确配准。对比其他改进的ICP方法,本文的精配准方法在配准精度和保持颜色纹理方面效果更突出。因此,本文的点云配准方法,无论是初始配准还是精确配准,在RGB-D数据的点云模型的配准过程中都有较好的配准效果。

关键词： RGB-D数据初始配准精确配准混合特征分块配准 4D-ICP

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生物分子组织光热相关性分析

生物分子组织光热相关性分析

作者：韩韦长春理工大学

学位级别：硕士

激光在生命科学中的应用日趋广泛,在物理学、医学和育种上取得了不少应用成果。然而,迄今为止,人们对激光与生物分子组织相互作用的微观机理还知之甚少。激光与生物组织的光热效应是激光在医学上应用的重要方面之一。生物组织吸收激光... 详细信息

激光在生命科学中的应用日趋广泛,在物理学、医学和育种上取得了不少应用成果。然而,迄今为止,人们对激光与生物分子组织相互作用的微观机理还知之甚少。激光与生物组织的光热效应是激光在医学上应用的重要方面之一。生物组织吸收激光能量后将产生光凝固、汽化和碳化等热效应,临床应用需要对光传播与热传输两个方面展开深入研究。本文基于激光与生物组织相互作用机理,讨论了光热相互作用的理论和实验方法,分析了光热效应研究的临界条件及其相互关系。通过激光与不同生物组织作用系数的研究,发现它与生物组织内热能传导有密切联系,即通过测量生物组织光学性质也可以间接反映相关热学规律,研究结果对指导临床有一定的意义。

关键词：生物组织光热效应光传播热传输

员工帮助行为对社会地位的影响 ——基于关系不确定性的中介作用

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员工帮助行为对社会地位的影响 ——基...

作者：韩韦中南财经政法大学

学位级别：硕士

在组织行为学的研究中,帮助行为是体谅他人并且提供帮助的人际互动行为,是有利于建立和维持和谐人际关系的行为,更被认为是有利于同事、领导和组织的行为,因此员工在组织中的帮助行为受到研究者和管理者的重视。本研究采用同事的视角,... 详细信息

在组织行为学的研究中,帮助行为是体谅他人并且提供帮助的人际互动行为,是有利于建立和维持和谐人际关系的行为,更被认为是有利于同事、领导和组织的行为,因此员工在组织中的帮助行为受到研究者和管理者的重视。本研究采用同事的视角,探讨员工帮助行为对团队成员之间的关系和社会地位的动态影响。通常关于员工帮助行为的研究认为员工的社会交换是遵循互惠原则,然而在现实生活中员工们经常察觉到在给予和接受上的不平衡。而将这种不平衡的帮助行为作为一种重要的角色外行为,探讨其带来员工的互动关系的思考及员工在组织中的社会地位的影响的研究则十分匮乏。本研究认为员工之间的帮助行为并非完全是平衡的交换,其还可通过互动关系的不确定性而影响员工在组织中的社会地位。本研究旨在扩充员工帮助行为领域的结果研究,基于社会认同理论视角,本文从员工互动关系的角度探讨了组织中员工的帮助行为对其社会地位影响的内部机制。在第二章,本文介绍了员工帮助行为、关系不确定性以及社会地位的定义,测量和研究现状,最后基于对以往文献的回顾和总结,本文对员工帮助行为领域的研究现状进行了述评。随后在第三章中,本文结合社会交换理论和社会认同理论构建了本文的整体模型,提出了相应的假设。本文提出员工帮助行为能够通过关系不确定性影响员工在组织中的社会地位。本文认为帮助行为包含三种情况,慷慨的帮助行为、吝啬的帮助行为以及平衡的帮助行为。具体而言,如果焦点员工进行平衡的帮助行为时（接受的帮助或多或少等于给予的帮助）,同事与焦点员工的关系不确定性降低;如果焦点员工的接受和给予的帮助不平衡时,当帮助越吝啬（接受帮助与给予帮助相比越来越多）,关系不确定性呈曲线上升的趋势。同时,关系不确定性会降低焦点员工在组织中的社会地位。为进行假设检验,本研究对36个团队216名员工开展了轮训问卷调查。第四章详细论述了本文所采用的研究方法以及对调研所得数据的定量分析过程。结果表明,第三章所提出的所有假设均能得到验证。关系不确定性在员工帮助行为和社会地位之间做中介。第五章则主要对本文所得研究结果进行了讨论与总结,并基于存在的不足提出了未来可以进行改进的方向。

关键词：关系不确定性员工帮助行为社会地位