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中国动物传染病学报 2023年第6期31卷 11-19页

作者：赵冰阿曼古丽·斯拉依米荣升程龙刘旗龚海燕张烨华贾海燕韩先干黄燕陈兆国赵权吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物产品质量安全生物性危害因子风险评估实验室(上海)农业农村部动物寄生虫学重点实验室上海200241 伊犁哈萨克自治州动物疾病控制与诊断中心伊宁835000 华东师范大学生命科学学院上海市调控生物学重点实验室上海200241

为获得旋毛虫(T1)脱氧核糖核酸酶Ⅱ(DNase Ⅱ)蛋白,观察其在肌幼虫虫体中的分布,以旋毛虫(T1)肌幼虫cDNA为模板,利用RT-PCR技术扩增旋毛虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ(TsDNase Ⅱ)蛋白的编码基因tsdnase Ⅱ,将其克隆到原核表达载体pCold-TF中,转... 详细信息

为获得旋毛虫(T1)脱氧核糖核酸酶Ⅱ(DNase Ⅱ)蛋白,观察其在肌幼虫虫体中的分布,以旋毛虫(T1)肌幼虫cDNA为模板,利用RT-PCR技术扩增旋毛虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ(TsDNase Ⅱ)蛋白的编码基因tsdnase Ⅱ,将其克隆到原核表达载体pCold-TF中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,以IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳分析;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blot分析重组Ts DNaseⅡ(rTsDNase Ⅱ)蛋白的反应原性;将rTsDNase Ⅱ蛋白免疫6-8周BALB/c小鼠,制备其多克隆抗体;制作旋毛虫肌幼虫冰冻切片,利用免疫荧光试验观察TsDNase Ⅱ蛋白在虫体中的分布。结果,成功地扩增出了长度为942 bp的旋毛虫tsdnase Ⅱ基因片段,构建了其原核表达质粒pCold-TF-tsdnase Ⅱ;转化了重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)成功可溶表达了rTsDNase Ⅱ,大小为86 kDa;ELISA与Western blot分析结果显示,rTsDNase Ⅱ蛋白能与感染旋毛虫的小鼠血清发生特异性反应;冰冻切片免疫荧光分析显示,TsDNase Ⅱ分布于旋毛虫肌幼虫整个虫体。研究结果为进一步分析TsDNase Ⅱ的特性与功能、利用该蛋白研发旋毛虫病新型防控策略打下了基础。

关键词：旋毛虫(T1) 脱氧核糖核酸酶Ⅱ 原核表达 ELISA 定位

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基于不同靶基因的3种住肉孢子虫PCR检测方法比较

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动物医学进展 2020年第12期41卷 1-6页

作者：孙滔米荣升张烨华张世杰张晓丽贾海燕曾江勇黄燕龚海燕韩先干陈兆国赵权吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 农业农村部动物产品质量安全生物性危害因子风险评估实验室(上海) 上海200241 农业农村部动物寄生虫学重点实验室上海200241 西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所西藏拉萨850009

为筛选敏感、特异的住肉孢子虫(Sarcocystis spp.)PCR检测方法,对以住肉孢子虫18S rRNA、28S rRNA和线粒体细胞色素C氧化酶I基因(cox 1)的部分片段为靶基因设计的3套引物建立的PCR方法进行敏感性和特异性试验,并对田间采集的100份牛源... 详细信息

为筛选敏感、特异的住肉孢子虫(Sarcocystis spp.)PCR检测方法,对以住肉孢子虫18S rRNA、28S rRNA和线粒体细胞色素C氧化酶I基因(cox 1)的部分片段为靶基因设计的3套引物建立的PCR方法进行敏感性和特异性试验,并对田间采集的100份牛源和猪源肌肉样品进行检测。结果显示,以18S rRNA和28S rRNA为靶基因的PCR检测方法的敏感性相似,DNA最小检出量均为1×10-2 ng/μL;而以cox 1为靶基因的PCR检测方法敏感性相对较低,DNA的最低检出量为1 ng/μL。对7种不同寄生虫DNA进行特异性试验,结果以cox 1基因为靶基因的PCR方法特异性较好,仅能够扩增出枯氏住肉孢子虫(Sarcocystis cruzi)DNA;以18S rRNA为靶基因的PCR法,除枯氏住肉孢子虫外,刚地弓形虫和微小隐孢子虫也有相似扩增条带;以28S rRNA为靶基因的PCR法,除枯氏住肉孢子虫外,刚地弓形虫、微小隐孢子虫和欧猥迭宫绦虫DNA也能扩增出杂带,但大小不符。利用3种方法对100份牦牛和猪肉样品进行扩增,发现以18S rRNA、28S rRNA和cox 1为靶基因的PCR法的阳性率分别为36.00%(36/100)、43.00%(43/100)和38.00%(38/100)。结果表明,以cox 1为靶基因的PCR法有良好的特异性,适合用于田间动物肌肉样品中住肉孢子虫的检测,为开展动物住肉孢子虫病分子流行病学及防控研究提供了依据。

关键词： 18S rRNA基因 28S rRNA基因 cox 1基因 PCR方法住肉孢子虫

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布鲁菌SahH在甲硫氨酸循环中的催化活性研究

布鲁菌SahH在甲硫氨酸循环中的催化活性研究

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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：徐达吴小卡荆雅玮吕小龙胡剑刚米荣升黄燕陆珂贾海燕陈兆国王成明韩先干中国农业科学院上海兽医研究所扬州大学

由布鲁菌感染引起的布鲁菌病是一种重要的人畜共患病,该病严重影响畜牧业生产和人类健康。细菌通过甲硫氨酸代谢(Activated methionine cycle,AMC)产生的一碳基团广泛参与蛋白质、嘌呤和嘧啶等的合成以及作为体内各种化合物甲基化的甲... 详细信息

由布鲁菌感染引起的布鲁菌病是一种重要的人畜共患病,该病严重影响畜牧业生产和人类健康。细菌通过甲硫氨酸代谢(Activated methionine cycle,AMC)产生的一碳基团广泛参与蛋白质、嘌呤和嘧啶等的合成以及作为体内各种化合物甲基化的甲基来源,AMC对细菌具有重要的调控作用。细菌的sahH基因编码S-腺苷同型半胱氨

关键词：布鲁菌病布鲁菌半胱氨酸水解酶甲硫氨酸循环催化活性

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鸭疫里默氏杆菌GroEL蛋白的原核表达和单克隆抗体制备

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中国动物传染病学报 2014年第2期22卷 58-64页

作者：侯湾湾韩先干王少辉王小兰岳嘉蘋曹守林范红结于圣青南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

本试验旨在研制鸭疫里默氏杆菌GroEL蛋白的单克隆抗体。将鸭疫里默氏杆菌WJ4菌株的groEL基因进行原核表达,重组蛋白经过纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经过3次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA筛... 详细信息

本试验旨在研制鸭疫里默氏杆菌GroEL蛋白的单克隆抗体。将鸭疫里默氏杆菌WJ4菌株的groEL基因进行原核表达,重组蛋白经过纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经过3次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行3次亚克隆后制备小鼠腹水单克隆抗体。共获得2株稳定分泌鸭疫里默氏杆菌GroEL单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G2B6和1G2F10。2株单克隆抗体均为IgG1亚类。腹水单克隆抗体ELISA效价达到1:102 400。Western blot检测结果表明2株单克隆抗体均能与鸭疫里默氏杆菌血清1、2和10型菌株发生特异性结合,而与禽致病性大肠杆菌、沙门氏菌和禽巴氏杆菌菌株无反应性。本研究成功制备了稳定性好、特异性强的鸭疫里默氏杆菌GroEL单克隆抗体,为进一步研制基于抗体检测鸭疫里默氏杆菌抗原的试剂盒奠定了基础。

关键词：鸭疫里默氏杆菌 GroEL蛋白单克隆抗体

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