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多能性干细胞诱导与体外培养的初步研究

多能性干细胞诱导与体外培养的初步研究

作者：韦珏广西大学

学位级别：硕士

诱导多能性干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSC)是通过导入四个转录因子Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc等组合,使分化的体细胞进行重编程从而获得一类与胚胎干细胞具有相似特性的新细胞类型。由于iPS细胞同样具备与胚胎干细胞类似... 详细信息

诱导多能性干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSC)是通过导入四个转录因子Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc等组合,使分化的体细胞进行重编程从而获得一类与胚胎干细胞具有相似特性的新细胞类型。由于iPS细胞同样具备与胚胎干细胞类似的无限增殖、多向分化潜能以及自我更新维持等能力,利用病人自身细胞获得的iPS细胞能减少免疫排斥反应,且它能够很好的避开ES细胞面临的伦理道德问题,因而iPS技术在动物模型的建立、药物筛选以及疾病治疗等领域具有广阔的应用前景。为探讨以耳聋病人体细胞诱导获得iPS细胞的可行性,本论文开展了如下三个方面的研究：1.小鼠MEF诱导成多能性干细胞技术体系优化：探讨通过一种低效的诱导体系,诱导P53基因敲除以及野生型的小鼠胚胎成纤维细胞,获得iPS细胞,进而分析二者Dlk1-Dio3区基因表达差异,研究P53信号通路与Dlkl-Dio3区在体细胞重编程机制作用上可能存在的关联性。结果表明：以四个多潜能性转录因子Oct4、Sox2、Klf4以及c-Myc为组合,用逆转录病毒载体,介导P53基因全敲型小鼠胚胎成纤维细胞,在一个低效的诱导体系下,获得的小鼠细胞集落AP染色呈弱阳性,为不完全重编程的iPS细胞。而通过慢病毒载体介导,能成功诱导P53+/-小鼠胚胎成纤维,获得的iPS细胞,AP染色呈阳性。RT-PCR检测到内源多能性四因子Oct4、Sox2、Klf4及c-Myc的表达。免疫荧光染色能检测到多能性相关的细胞核、细胞膜蛋白OCT4、NANOG和SSEA-1等的表达。2.利用非整合Episomal质粒诱导耳聋病人体细胞获得多能性干细胞的初步研究：探讨应用非整合质粒系统获得病人iPS细胞的可行性。结果显示：病人皮肤组织块原代培养第7天,可观察到大量细胞从人耳皮肤组织边缘向外延伸,呈典型的成纤维细胞特征。利用非整合Episomal质粒转染病人耳皮肤成纤维细胞,电转后第5天能明显观察到细胞的形态由原先的梭形慢慢变圆,第15天能观察到一个孔中已出现大量不规则的圆形或椭圆形扁平状的细胞集落,能明显与集落周围的成纤维细胞区分开。取第3代次的人iPS细胞进行碱性磷酸酶染色,可观察到细胞集落被染成深紫色,表现为AP阳性,而对照饲养层细胞则未被着色,呈AP阴性。以人胚胎干细胞H9作为阳性对照组,取第3代的人耳皮肤成纤维细胞诱导的iPS细胞,用小鼠、大鼠、兔子来源的OCT-4、NANOG、SSEA-3、SSEA-4、SSEA-1抗体作为一抗,经过免疫荧光染色后观察显示：人iPS细胞表达人胚胎多能性干细胞细胞核蛋白OCT-4、NANOG以及细胞膜蛋白SSEA-3、SSEA-4。未检测到小鼠多能性干细胞特异性膜蛋白SSEA-1的表达。细胞用Hochest33342染细胞核,观察到多能性核蛋白OCT-4、NANOG能与Hochest33342染的细胞核重合;而多能性细胞细胞膜特异性表达的SSEA-3、SSEA-4分布在Hochest33342染的细胞核周围,呈网格状分布;未能在iPS克隆上观察到小鼠多能性干细胞特异性的SSEA-1的表达。证明了本实验电转得到的iPS细胞来源于人耳皮肤成纤维细胞,并非小鼠胚胎成纤维细胞。3.通过在293T细胞、小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)、人间充质干细胞(MSC)、人胚胎干细胞(人ESC)等不同类型细胞的培养液中添加Selleckchem公司生产的支原体去除试剂,最终确定该试剂的作用效果。结论：以四个多潜能性转录因子OSKM为组合,用慢病毒载体比逆转录病毒载体更容易诱导P53基因全敲型小鼠胚胎成纤维细胞为iPS。通过非整合Episomal载体转染的方法,可以获得耳聋病人体细胞来源的人iPS,为探讨应用iPS细胞对耳聋病人进行治疗性细胞移植研究奠定了基础。

关键词：小鼠成纤维细胞人耳皮肤成纤维细胞体细胞重编程诱导多能性干细胞支原体污染

“增存挂钩”背景下南宁市批而未供和闲置土地成因及对策研究

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“增存挂钩”背景下南宁市批而未供和闲置土地成因及对策研究

作者：韦珏广西大学

学位级别：硕士

城市土地的有效供给是推动社会与经济发展的重要保障。近年来,地方政府对建设用地的需求与土地资源闲置现状之间的矛盾愈发突出,严重制约了土地资源对社会发展的推动作用。盘活处置批而未供和闲置土地,唤醒“沉睡”的土地资源,对解决日... 详细信息

城市土地的有效供给是推动社会与经济发展的重要保障。近年来,地方政府对建设用地的需求与土地资源闲置现状之间的矛盾愈发突出,严重制约了土地资源对社会发展的推动作用。盘活处置批而未供和闲置土地,唤醒“沉睡”的土地资源,对解决日益尖锐的土地供求矛盾有着重大意义。为切实贯彻落实党的十九大和十九届二中、三中全会精神,国家自然资源部以习近平新时代中国特色社会主义思想为指导,大力施行建设用地“增存挂钩”工作机制。在上述背景下,本文以南宁市批而未供和闲置土地成因及对策作为研究对象,依据南宁市的社会经济及土地利用现状,分析其批而未供和闲置土地总体状况,梳理南宁市盘活处置批而未供和闲置土地的做法与成效;总结国内外的积极探索和实践,提出减少批而未供土地、盘活闲置土地、提高土地集约节约利用水平的启示;结合实际情况,对南宁市批而未供和闲置土地成因进行阐述分析,并提出一系列适合当前经济社会发展阶段的对策建议,为政府部门的决策行动提供参考,有助于地方政府突破困境,不断提高土地利用质量和效率,提升土地集约节约利用水平。研究表明:南宁市批而未供和闲置土地面积及宗数基数大,数量总体上随着时间变化波动增长,成因呈现复杂性和艰巨性,主要包括五个方面,分别为治理主体参与协作欠缺、政府组织功能存在弊病、工作机制运行不够顺畅、制度体系建设存在漏洞、信息技术保障能力偏低。从根本上破解南宁市批而未供和闲置土地困境,主要从以下几个方面着手:一是提升多元主体参与治理意识;二是提高组织机构协同联动效率;三是健全管理部门工作运行机制;四是完善相关法律法规制度体系;五是推动管理系统信息化建设。

关键词：增存挂钩批而未供土地闲置土地南宁市

HSP90AA1/HSPA8在伴抑郁情绪肝癌患者中的表达及临床意义

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HSP90AA1/HSPA8在伴抑郁情绪肝癌患者中的表达及临床意义

作者：韦珏伶广西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨HSP90AA1/HSPA8在伴抑郁情绪的肝癌患者中的表达情况,分析其临床意义,及对伴抑郁情绪肝癌患者预后的影响。方法:选择2015年9月至2017年3月在广西医科大学附属肿瘤医院首诊且接受根治性肝切除术治疗的肝癌患者（未接受任何药物... 详细信息

目的:探讨HSP90AA1/HSPA8在伴抑郁情绪的肝癌患者中的表达情况,分析其临床意义,及对伴抑郁情绪肝癌患者预后的影响。方法:选择2015年9月至2017年3月在广西医科大学附属肿瘤医院首诊且接受根治性肝切除术治疗的肝癌患者（未接受任何药物和侵入性治疗）,无严重心、脑、肺、肾、传染病等疾病。术前采用一般资料问卷、医院焦虑抑郁量表-抑郁亚量表（HADS-D）、抑郁自评量表（SDS）进行评价。根据纳入标准,完成各种量表评估的肝癌患者共131例,根据患者的抑郁情绪程度分为三组:无抑郁组（n=45）;轻度抑郁组（n=38）;中重度抑郁组（n=48）。通过应用实时定量PCR、蛋白质免疫印迹以及免疫组织化学染色法对三组患者癌组织中HSP90AA1/HSPA8及VEGF/VEGFR2-PI3K-AKT通路指标的表达情况进行检测,比较三组患者无瘤生存期。结果:1、本研究共入组行根治性肝切除术肝癌患者131例,采用HADS-D联合SDS两个量表的患者抑郁情绪进行筛查评分,其中无抑郁情绪患者45例（34.4%）;抑郁情绪患者86例（65.6%）,包括轻度抑郁患者38例（29.0%）和中重度抑郁患者48例（36.6%）。患者一般资料比较,中重度抑郁组、轻度抑郁组和无抑郁组三组同时比较,谷草转氨酶（AST）差异有统计学意义（P0.05）。2、随访截至日期为2019年3月,共有67例（51.1%）患者出现肿瘤复发,其中无抑郁组20例（44.4%）,轻度抑郁组18例（47.3%）,中重度抑郁组29例（60.4%）。纳入的所有患者中位无瘤生存期为10个月,6个月无瘤生存率为65.3%,12个月为47.3%,24个月为36.7%。中重度抑郁组6个月的无瘤生存率显著低于轻度抑郁组和无抑郁组（52.8%vs 64.8%vs 65.9%）,12个月（36.1%vs 50.0%vs 52.1%）和24个月（28.9%vs 40.1%vs 41.6%）。中重度抑郁组中位无瘤生存期为8个月,轻度抑郁组为13个月,无抑郁组为14个月,无抑郁组与轻度抑郁组比较差异无统计学意义（P=0.752）。3、以年龄、性别、肿瘤情况、血生化指标等作为变量进行单因素分析,结果显示,血管侵犯和中重度抑郁可能是影响肝癌患者复发的危险因素（P0.05）。（2）Western blotting结果显示,中重度抑郁组HSP90AA1的平均蛋白水平（2.29±0.36）高于轻度抑郁组（1.70±0.11,P=0.019）和无抑郁组（0.56±0.09,P<0.001）。中重度抑郁组HSPA8的平均蛋白水平（2.13±0.17）高于轻度抑郁组（1.47±0.16,P=0.009）和无抑郁组（0.36±0.10,P<0.001）。（3）IHC结果显示,中重度抑郁组HSPA8的平均蛋白水平明显高于其他两组（χ=88.154,P=0.044）;中重度抑郁组HSP90AA1的平均蛋白水平亦明显高于其他两组（χ=14.334,P=0.006）。（4）Western blotting和qRT-PCR检测中重度抑郁组和无/轻度抑郁组HSP90AA1、HSPA8及VEGF/VEGFR2-PI3K-AKT通路相关蛋白和基因,结果显示,相对于无/轻度抑郁组,中重度抑郁组HSP90AA1、HSPA8、VEGF、VEGFR2、PI3K、AKT1蛋白和mRNA表达增加,Caspase9、BAD蛋白和mRNA表达降低。结论:1、肝癌患者抑郁的发生率较高,存在不同程度的抑郁状态,应重视肝癌

关键词：抑郁肝细胞癌 HSP90AA1 HSPA8 VEGF

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ZnO荧光薄膜的脉冲激光沉积

ZnO荧光薄膜的脉冲激光沉积

作者：韦珏郑州大学

学位级别：硕士

场发射平板显示器件以其高亮度、体积小、低能耗、高视觉性能等优点深受众多研究者的青睐，要制造出高质量的场发射平板显示器件，不仅需要高性能的阴极，还需要与之相匹配的阳极荧光层以及较高的器件封装技术。由于场发射平板显示... 详细信息

场发射平板显示器件以其高亮度、体积小、低能耗、高视觉性能等优点深受众多研究者的青睐，要制造出高质量的场发射平板显示器件，不仅需要高性能的阴极，还需要与之相匹配的阳极荧光层以及较高的器件封装技术。由于场发射平板显示工作条件的改变，传统的涂敷式荧光屏己经不能满足它的要求。本文从优化场发射平板显示阳极荧光层的角度出发，利用脉冲激光沉积技术，通过改变激光脉冲能量、沉积室氧压等参量，并采取对荧光薄膜进行后退火处理、镀制金属涂层等手段，制备出了具有较高发光性能的ZnO荧光薄膜。在只改变激光脉冲能量的条件下制备ZnO荧光薄膜，结果发现，在低脉冲能量下制备的薄膜样品具有较高的结晶度，以及较好的发光性能。这归因于在低激光脉冲能量下所制备的荧光薄膜中位错及晶界等缺陷的减少，即非辐射俘获中心的数目减少。而高脉冲能量沉积的荧光薄膜中缺陷数目多，其质量就差。在保持其它实验参量不变的条件下，通过改变沉积室氧压来研究它对ZnO 荧光薄膜结晶性以及发光性能的影响。结果表明，沉积室氧压在10—10Torr 范围内，存在一最佳氧压值，使ZnO荧光薄膜有较高的结晶度，并具有较好的发光性能。这说明，尽管提高沉积室氧压来改善薄膜的结构特性是以减少发光中心(填隙Zn原子或氧空位)为代价，但在适当的氧压下可以在减少薄膜内缺陷的同时，保证发光中心数尽可能多，进而能够获得较好的发光性能。在不同的衬底温度下制备了两种ZnO荧光薄膜并分别在空气气氛中进行了后退火处理。虽然两种样品在经过退火处理后，薄膜结晶度均有明显提高，但在室温条件下制备的薄膜退火后发光亮度比退火前明显提高，而在较高衬底温度条件下制备的薄膜发光亮度却有所下降。这表明，退火处理减少了在室温条件下所制备样品中较多的形成俘获中心的缺陷，提高了其发光性能，但却导致了在较高衬底温度条件下所制备薄膜中发光中心数目的减少，使其发光性能降低。采用双靶方法制备出镀有铝膜的ZnO荧光薄膜，通过对比沉积铝膜前后荧光薄膜发光亮度与电场的关系，发现沉积铝膜之后，ZnO荧光薄膜的发光亮度有明显提高。本论文共分四章：第一章主要综述了场发射平板显示荧光薄膜的研究现状;第二章对荧光薄膜的发光机理、制备方法及测试手段等给以系统阐述;第三章介、绍了ZnO荧光薄膜的脉冲激光沉积;第四章是结论。

关键词：场发射平板显示,荧光薄膜,氧化锌,脉冲激光沉积

Liquid refractive index sensor based on polymer fiber with micro-holes created by femtosecond laser

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Chinese Optics Letters 2014年第9期12卷 6-9页

作者：董文超韦珏王学海康智慧徐晓峰 College of Physics Jilin University

We present a liquid refractive index （RI） sensor based on step-index multimode polymer optical fiber with a micro-hole drilled by the femtosecond laser. The experimental results show that in the RI operation range of 1.333-1.473, the sensor has a good linear loss （dB） response to the liquid RI in the micro-holes and a high sensitivity of 18 dB/RIU approximately. The experimental results are explained with the mode of the refrac- tion loss caused by the hole core interface and connection loss caused by the gap of the holes. The sensor has many advantages including high sensitivity and low cost.

关键词： Liquids Multimode fibers Plastic optical fibers Refractometers Ultrashort pulses