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基于麻疹病毒IgG抗体酶联免疫吸附试验的尿素变性亲和力检测方法建立

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中国疫苗和免疫 2022年第1期28卷 30-34,40页

作者：秦月韦一知邓丽丽韦敬航梁亮马宇燕刘巍广西壮族自治区疾病预防控制中心广西南宁530028

目的建立基于麻疹病毒(Measles virus,MV)IgG抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒的尿素变性亲和力检测方法。方法选取2018-2019年广西MV IgG阳性的麻疹病例血清标本,采用亲和力试剂盒检测MV IgG亲和力。选择低和高亲和力血清标本各6份,... 详细信息

目的建立基于麻疹病毒(Measles virus,MV)IgG抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒的尿素变性亲和力检测方法。方法选取2018-2019年广西MV IgG阳性的麻疹病例血清标本,采用亲和力试剂盒检测MV IgG亲和力。选择低和高亲和力血清标本各6份,在ELISA酶标板中加入尿素处理后,检测IgG浓度,计算IgG浓度下降率;在亲和力试验中改变尿素条件,计算高低亲和力标本的相对亲和力指数(Relative avidity index,RAI)比值,确定本研究方法的最优实验条件。选择100份血清标本同时采用本研究建立的方法和成品试剂盒检测MV IgG亲和力,计算检测一致率。结果6份低亲和力和6份高亲和力血清标本RAI分别为24%-39%、67%-86%;当4mol/L(pH6.4-7.4)、5mol/L(pH6.4-7.4)和6mol/L(pH6.4-7.0)的尿素处理酶标板后,MV IgG浓度下降率≤48.67%;当尿素条件为4mol/L(1-40min)、5mol/L(1-20min)、6mol/L(1-5min)时,IgG浓度下降率≤47.53%;尿素条件为6mol/L(pH7.0)和6mol/L(5min)时RAI比值分别为2.30和2.43。本研究亲和力试验的尿素处理最优条件为6mol/L(pH7.0)的尿素在37℃作用5min;该方法与成品试剂盒的亲和力检测一致率为92%。结论本研究建立的基于MV IgG抗体ELISA试剂盒的尿素变性亲和力检测方法简便可行且结果可靠。

关键词：麻疹病毒 IgG抗体亲和力尿素酶联免疫吸附试验

广西壮族自治区实验室确诊麻疹病例麻疹病毒IgG抗体亲和力特征

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中国疫苗和免疫 2023年第5期29卷 503-507页

作者：秦月韦一知邓丽丽韦敬航梁亮马宇燕刘巍广西壮族自治区疾病预防控制中心广西南宁530028

目的分析麻疹病毒(Measles virus,MV)IgG阳性实验室确诊麻疹病例的IgG亲和力特征。方法选择广西2015-2017年MV IgG阳性实验室确诊麻疹病例,采用基于MV IgG酶联免疫吸附试验的尿素变性亲和力检测方法,检测血清IgG亲和力,分析平均相对亲... 详细信息

目的分析麻疹病毒(Measles virus,MV)IgG阳性实验室确诊麻疹病例的IgG亲和力特征。方法选择广西2015-2017年MV IgG阳性实验室确诊麻疹病例,采用基于MV IgG酶联免疫吸附试验的尿素变性亲和力检测方法,检测血清IgG亲和力,分析平均相对亲和力指数(Relative avidity index,RAI)和高/中/低亲和力比例。结果在136例MV IgG阳性麻疹病例中,IgG平均RAI为49.74%,高、中、低亲和力分别占47.79%、28.68%、23.53%。<8月龄、8-35月龄、3-19岁、20-39岁、≥40岁病例IgG平均RAI分别为23.61%、41.60%、60.80%、52.65%、69.49%,高亲和力比例分别为0.00%、30.77%、80.00%、50.00%、84.62%;0剂次、1剂次、≥2剂次、不详含麻疹成分疫苗(Measles containing vaccine,MCV)免疫史病例的平均RAI分别为43.43%、50.34%、65.38%、47.84%,高亲和力比例分别为36.36%、46.94%、87.50%、42.11%。结论麻疹抗体亲和力随麻疹病例年龄或MCV免疫剂次增加而呈升高趋势;<8月龄和20-39岁病例的抗体亲和力较低或下降,有必要对年轻育龄期妇女加强接种1剂MCV。

关键词：麻疹麻疹病毒 IgG抗体亲和力

人端粒酶RNA模板定点突变对肿瘤细胞Bcap-37的作用研究

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人端粒酶RNA模板定点突变对肿瘤细胞Bcap-37的作用研究

作者：韦敬航浙江理工大学

学位级别：硕士

端粒是位于真核细胞线性染色体末端的特殊结构，由高度保守的非编码DNA简单重复序列与端粒相关结合蛋白构成的DNA-蛋白质复合体，其主要功能是维持染色体的完整性。端粒会在细胞持续分裂的过程中逐渐缩短，若不能在达到极限长度之前得... 详细信息

端粒是位于真核细胞线性染色体末端的特殊结构，由高度保守的非编码DNA简单重复序列与端粒相关结合蛋白构成的DNA-蛋白质复合体，其主要功能是维持染色体的完整性。端粒会在细胞持续分裂的过程中逐渐缩短，若不能在达到极限长度之前得到有效的延伸，就会引发细胞的衰老及死亡。端粒的延伸需要依靠端粒酶的作用。端粒酶以端粒3’端的G悬突为引物，自身RNA亚基为模板，在端粒酶逆转录酶亚基的催化下逆转录合成端粒DNA序列并添加至端粒末端，使端粒得到延伸。端粒酶活性在正常体细胞中的表达量极少，但在肿瘤细胞和细胞株中却高度表达，这表明端粒酶与肿瘤之间有着密切的联系，并有可能作为人类恶性肿瘤早期诊断的标志物。目前已有较多以端粒、端粒酶为靶标的肿瘤治疗方法，但还不够完善，需进一步研究改进。因为端粒酶RNA模板序列决定了端粒酶所合成端粒DNA的序列特异性，所以模板序列的定点突变可能会对端粒酶的活性造成一定影响，并因此影响端粒的长度和肿瘤细胞的生长活性。本论文旨在从端粒酶活性、端粒长度及细胞凋亡现象这三个不同方面的改变情况揭示hTER模板序列定点突变对人乳腺癌细胞株Bcap-37的作用影响。本论文以人乳腺癌细胞株Bcap-37接种裸鼠增殖形成的肿瘤组织块为研究对象，分为hTER模板序列定点突变（MT-hTER）组和无突变对照组。首先从MT-hTER组样本和对照组样本中提取端粒酶，测定端粒酶蛋白含量后，进行端粒酶酶促反应，即让端粒酶在前导引物的基础上逆转录合成端粒DNA序列并添加至前导引物末端。设正常组和端粒酶灭活处理组，端粒酶灭活处理组的端粒酶在酶促反应前经过灭活处理。终止酶促反应后回收酶促反应产物，利用NanoDrop2000Spectrophotometer测定ssDNA的含量。正常组和端粒酶灭活处理组的ssDNA含量差值可直接反映出端粒酶的活性。通过对比MT-hTER组样本和对照组样本的端粒酶活性即可得到hTER模板序列定点突变对人乳腺癌细胞株Bcap-37端粒酶活性的作用。结果显示，MT-hTER组样本的端粒酶活性低于对照组的端粒酶活性。这提示着hTER模板序列定点突变可能在一定程度上改变了人乳腺癌细胞株Bcap-37的端粒酶活性。从MT-hTER组样本和无突变对照组样本中提取人类基因组DNA，通过T4DNA连接酶使之与特殊接头进行末端连接。根据NCBI数据库中人类基因组DNA序列中的亚端粒序列设计出可特异扩增特定端粒的上游引物。利用PCR技术扩增人乳腺癌细胞Bcap-37特定的染色体端粒，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析并通过GeneTools软件定量分析PCR产物总量和1/2总量处的分子量，通过计算即可得到端粒平均长度。结果显示，MT-hTER组样本的端粒平均长度小于对照组的端粒平均长度。这提示着hTER模板序列突变可能在一定程度上改变了人乳腺癌细胞株Bcap-37端粒的平均长度。通过制作人乳腺癌细胞株Bcap-37肿瘤组织块的石蜡切片，经过Feulgen染色处理并封片后，可在光学显微镜下观察到紫红色细胞核的形态。结果显示，MT-hTER组的细胞核形态较不稳定，均一性较差，有较多细胞核致密浓染现象，而对照组的细胞核形态较稳定，均一性较好，较少出现细胞核致密浓染现象。这提示着hTER模板序列突变可能在一定程度上诱导了人乳腺癌细胞株Bcap-37在生长增殖过程中发生细胞凋亡。

关键词：人乳腺癌细胞株Bcap-37 MT-hTER 端粒酶活性端粒长度石蜡切片

2018年广西育龄期妇女乙型肝炎病毒流行现状分析

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应用预防医学 2023年第3期29卷 184-186页

作者：韦佳楠邓秋云韦敬航刘静黄影陈世毅黎沙广西壮族自治区疾病预防控制中心广西南宁530028

目的了解近期广西育龄妇女乙型肝炎病毒(HBV)感染流行现状及其影响因素。方法从2018年广西1~59岁人群乙肝流行病学调查资料中抽取15~49岁育龄期妇女的调查数据进行描述性统计分析。结果共纳入2 359名育龄期妇女调查资料进行分析。201... 详细信息

目的了解近期广西育龄妇女乙型肝炎病毒(HBV)感染流行现状及其影响因素。方法从2018年广西1~59岁人群乙肝流行病学调查资料中抽取15~49岁育龄期妇女的调查数据进行描述性统计分析。结果共纳入2 359名育龄期妇女调查资料进行分析。2018年广西育龄期妇女的HBsAg、HBsAb和HBcAb阳性率分别为7.42%、59.90%和48.83%。在175例HBsAg阳性的育龄期妇女中,40岁以下和40岁以上的分别为122人(占69.72%)和53人(占30.28%);职业以农民为主,共有130例(占74.28%);HBeAg和HBeAb阳性率分别为28.00%和66.86%;40岁组的HBeAg阳性率分别为44.23%、28.57%和11.32%,随年龄增长呈下降趋势(趋势χ^(2)=14.026,P<0.001),HBeAb阳性率分别为53.85%、60.00%和88.68%,随年龄增长呈上升趋势(χ^(2)=14.362,P<0.001)。结论广西育龄期妇女乙肝感染率和HBeAg阳性率相对较高,应特别关注育龄期妇女HBsAg和HBeAg的产前筛查,未产生保护性抗体的育龄期妇女应及时接种HepB,以便有效降低HBV母婴垂直传播风险。

关键词：育龄期妇女广西 HBV感染母婴垂直传播影响因素

2012—2020年广西乙型病毒性肝炎监测数据分析

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应用预防医学 2023年第6期29卷 435-437,440页

作者：邓秋云黎沙韦敬航麦琛陈世毅张宁黄影广西壮族自治区疾病预防控制中心广西南宁530028 广西医科大学广西南宁530021

目的了解广西监测点乙型病毒性肝炎(简称乙肝)报告病例流行特征及监测质量,为制定广西乙肝防控策略提供依据。方法通过“中国疾病预防控制信息系统传染病监测系统”收集并导出的广西6个乙肝监测点2012—2020年报告乙肝病例数据资料,采... 详细信息

目的了解广西监测点乙型病毒性肝炎(简称乙肝)报告病例流行特征及监测质量,为制定广西乙肝防控策略提供依据。方法通过“中国疾病预防控制信息系统传染病监测系统”收集并导出的广西6个乙肝监测点2012—2020年报告乙肝病例数据资料,采用描述性流行病学方法进行分析。结果2012—2020年广西6个监测点累计报告乙肝病例28741例,年均报告病例数3193例。报告病例以慢性乙肝为主,占报告总数的90.79%;报告病例以30~<60岁为主,占报告总数的66.51%。报告男性病例数多于女性,男女发病比例为2.19∶1;职业分布以农民为主,占总报告病例数的79.60%。结论2012—2020年广西监测点乙肝报告病例数有所下降,通过实施乙肝监测项目,提高了乙肝病例诊断及报告质量。应积极探索成人乙肝防控策略,关注农民群体的乙肝防控,加强慢性乙肝患者的管理和规范治疗。

关键词：乙型病毒性肝炎疾病监测流行病学分析

广西中越边境口岸地区1株Nam Dinh病毒的分离及鉴定

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中国病原生物学杂志 2022年第10期17卷 1121-1124页

作者：梁亮陈世毅李又云韦一知邓秋云邓丽丽韦敬航马宇燕秦月刘巍广西壮族自治区疾病预防控制中心广西南宁530028 宁明县疾病预防控制中心

目的分离鉴定广西中越边境口岸地区来源的1株NDiV,并对其进行同源性比较和进化分析。方法将蚊虫标本研磨液接种C6/36和BHK21细胞,提取阳性分离物的病毒RNA,合成cDNA后进行二代测序,获得毒株的全基因组序列,利用Editseq软件识别该序列的... 详细信息

目的分离鉴定广西中越边境口岸地区来源的1株NDiV,并对其进行同源性比较和进化分析。方法将蚊虫标本研磨液接种C6/36和BHK21细胞,提取阳性分离物的病毒RNA,合成cDNA后进行二代测序,获得毒株的全基因组序列,利用Editseq软件识别该序列的ORF和非编码区,采用Bioedit 7.0软件进行同源性比较,采用MegaⅩ软件分别构建全基因组、RDRP和S基因的系统进化树。结果接种1批次三带喙库蚊标本的C6/36细胞出现明显的病变,病毒命名为Ad2019035sd,二代测序显示该毒株的NDiV覆盖率为99.80%;比较Ad2019035sd与Mesoniviridae科参考株全基因组核苷酸同源性在57.9%~98.9%之间,主要蛋白的编码基因核苷酸和氨基酸同源性分别在56.7%~100%和40.0%~99.5%之间,其中与深圳毒株SZ11706Z的同源性最高。全基因组、RDRP和S基因系统进化树均显示毒株Ad2019035sd与两株NDiV毒株在同一进化分支。结论毒株Ad2019035sd为NDiV,与深圳毒株SZ11706Z高度同源,为广西地区NDiV感染情况调查及相关研究提供了基础资料。

关键词： Nam Dinh病毒中越边境口岸全基因组系统进化树

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人类札幌病毒研究进展

应用预防医学 2016年第2期22卷 185-189页

作者：韦敬航刘巍广西壮族自治区疾病预防控制中心广西南宁530028

札幌病毒（Sapovirus,Sa V）属于杯状病毒科（Caliciviridae）中的札幌病毒属（Sapovirus）,可引起人类和动物的急性胃肠炎。Sa V于1976年在腹泻病人样本中首次检出[1],此后日本札幌市一所育婴院在1977年至1982年之间发生的多起急性胃... 详细信息

札幌病毒（Sapovirus,Sa V）属于杯状病毒科（Caliciviridae）中的札幌病毒属（Sapovirus）,可引起人类和动物的急性胃肠炎。Sa V于1976年在腹泻病人样本中首次检出[1],此后日本札幌市一所育婴院在1977年至1982年之间发生的多起急性胃肠炎暴发中均检出了与之形态相似的病毒,经病毒学与遗传学研究,

关键词：札幌杯状病毒科腹泻病人病毒研究形态相似病毒属核苷酸序列病毒基因组全基因组序列细胞培养

2014年广西1-29岁人群乙型肝炎血清流行病学调查及乙型肝炎疫苗接种情况分析

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中国疫苗和免疫 2017年第4期23卷 406-410页

作者：邓秋云钟革韦敬航杨仁聪杜进发董爱虎广西壮族自治区疾病预防控制中心广西南宁530028

目的了解2014年广西1-29岁人群乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)血清流行病学特征。方法采用分层二阶段整群随机抽样方法抽取广西6个监测县(区)1-29岁常住人口开展问卷调查,采集血标本进行HBV血清学指标检测,进行流行病学分析。结果广西1-29岁人... 详细信息

目的了解2014年广西1-29岁人群乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)血清流行病学特征。方法采用分层二阶段整群随机抽样方法抽取广西6个监测县(区)1-29岁常住人口开展问卷调查,采集血标本进行HBV血清学指标检测,进行流行病学分析。结果广西1-29岁人群HBV表面抗原(HBs Ag)、HBV表面抗体(Anti-HBs)、HBV核心抗体(Anti-HBc)阳性率分别为1.7%(标化值:2.6%)、67.3%(标化值:64.7%)、11.6%(标化值:17.0%)。HBs Ag、Anti-HBc阳性率随年龄增加而上升(x2=17.27,P=0.000;x2=123.84,P=0.000),Anti-HBs阳性率随年龄增加而下降(x2=25.08,P=0.000)。农村地区HBs Ag、Anti-HBc阳性率高于城市地区(x2=13.78,P=0.000;x2=15.83,P=0.000),但Anti-HBs阳性率低于城市地区(x2=73.42,P=0.000)。1 020名调查对象中乙肝疫苗(Hep B)接种率为82.6%。1-14岁儿童中不同年龄、居住地、出生地Hep B全程接种率及首剂次Hep B及时接种率均有显著性差异。接种过Hep B的人群HBs Ag阳性率显著低于无或不详接种史的人群。结论广西1-29岁人群特别是低年龄儿童HBs Ag携带率控制在较低水平。需加强新生儿Hep B及时接种和乙肝防控的健康教育。

关键词：乙型肝炎血清流行病学乙型肝炎疫苗接种率

广西壮族自治区2013年健康人群白喉抗体水平调查

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中国疫苗和免疫 2016年第2期22卷 175-179页

作者：梁亮马宇燕韦敬航邓丽丽韦一知钟革刘巍广西壮族自治区疾病预防控制中心广西南宁530028

目的了解广西2013年健康人群白喉抗体水平及其变化趋势,为预防控制白喉策略提供参考。方法在广西5个县采集0~60岁健康人群血清标本,利用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测白喉抗体。结果 2013年共采集健... 详细信息

目的了解广西2013年健康人群白喉抗体水平及其变化趋势,为预防控制白喉策略提供参考。方法在广西5个县采集0~60岁健康人群血清标本,利用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测白喉抗体。结果 2013年共采集健康人群血清标本3 191份,白喉抗体阳性率81.13%,中位数抗体浓度(Median Antibody Concentration,MAC)为0.046IU/ml。5个县白喉抗体阳性率在69.97%~90.47%之间(χ~2=104.99,P<0.001),MAC在0.029IU/ml^0.068 IU/ml之间(H=112.90,P<0.001)。各年龄组白喉抗体阳性率在75.34%(11~20岁组)~86.76%(51~60岁组)之间(χ~2=57.01,P<0.001),MAC在0.032IU/ml(0~10岁组)~0.111IU/ml(31~40岁组)之间(H=144.78,P<0.001)。男、女性白喉抗体阳性率分别为82.00%和80.51%(χ~2=1.13,P=0.287),MAC分别为0.051IU/ml和0.042IU/ml(U=1 155 974.50,P=0.001)。结论白喉抗体血清学调查结果可反映当地儿童免疫规划工作情况,预测广西近几年不会发生白喉流行,需对白喉抗体水平较低的地区和年龄组进行强化免疫以进一步巩固白喉免疫屏障;同时应严格按照含白喉类毒素疫苗接种程序对适龄儿童进行全程接种,防止出现某些剂次疫苗漏种的现象。

关键词：白喉抗体酶联免疫吸附试验含白喉类毒素疫苗