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蛇毒生物药品的现状与前景

中国医药工业杂志 2004年第2期35卷 123-125页

作者：韦传宝尹艺林浙江大学生命科学学院浙江杭州310027 皖西学院生物系安徽六安237000

综述了近10多年来国内外以蛇毒为原料的生化药物的现状。对蛇毒抗凝、镇痛和止血等多种活性的临床应用进行了讨论,同时也指出了蛇毒制药的前景和目前存在的问题。

关键词：蛇毒生化药物应用

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白眉蝮蛇蛇毒精氨酸酯酶致畸实验

癌变．畸变．突变 2003年第2期15卷 97-100页

作者：韦传宝陈菲浙江大学生命科学学院生物系神经分子生物学教研室

目的 :研究白眉蝮蛇(Agkistrodonhalysussuriensis)蛇毒精氨酸酯酶对大鼠的致畸胎作用 ,为临床应用提供依据。方法 :用大鼠进行致畸胎试验 ,将动物分成5组 :阴性对照组(生理盐水)、精氨酸酯酶低剂量组(0.06U/kg)、中剂量组(0.18U/kg)... 详细信息

目的 :研究白眉蝮蛇(Agkistrodonhalysussuriensis)蛇毒精氨酸酯酶对大鼠的致畸胎作用 ,为临床应用提供依据。方法 :用大鼠进行致畸胎试验 ,将动物分成5组 :阴性对照组(生理盐水)、精氨酸酯酶低剂量组(0.06U/kg)、中剂量组(0.18U/kg)、高剂量组(0.36U/kg)和阳性对照组(VitAD滴液10mg/kg)。精氨酸酯酶于受精第6d连续静脉给药至15d,第20d(分娩前1d)断头处死动物并剖腹。通过3项指标确定精氨酸酯酶的致畸胎作用 :一般综合指标 ,包括实验期间动物的体重、进食量、精神状态和活动情况 ;妊娠指标 ,包括剖腹检查记录的着床总数、死胎数、活胎数、吸收胎仔数、胚胎体重、身长、尾长和性别比 ;致畸指标 ,包括对外形、器官和骨骼畸胎率的测定。结果 :母鼠胚胎毒性症状出现在高剂量组(0.36U/kg) ,与对照组相比表现为妊娠期间平均体重增长减慢和胎仔的体重减轻(P0.05)。其它药物处理组与对照组相比没有明显差别(P>0.05)。结论 :纯精氨酸酯酶0.18U/kg以下对孕鼠无胚胎毒性和致畸作用 ,高于0.18U/kg则有一定的胚胎毒性。临床应用的剂量(0.012U/kg)

关键词：蛇毒精氨酸酯酶致畸胎试验

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蜂毒生物制品及其临床应用价值

中国临床康复 2004年第5期8卷 944-945页

作者：余茂耘韦传宝皖西学院生物系安徽省六安市237000 浙江大学生命科学学院浙江省杭州市310027

中国蜂毒的应用研究比国外发展快,目前已经制成的蜂毒生物制品包括蜂针、蜂毒注射液和精制蜂毒注射液。蜂毒制品临床上主要用于治疗风湿性关节炎和类风湿性关节炎,其疗效优于蝎毒和其他药物,被认为是目前治疗风湿和类风湿关节炎最好的... 详细信息

中国蜂毒的应用研究比国外发展快,目前已经制成的蜂毒生物制品包括蜂针、蜂毒注射液和精制蜂毒注射液。蜂毒制品临床上主要用于治疗风湿性关节炎和类风湿性关节炎,其疗效优于蝎毒和其他药物,被认为是目前治疗风湿和类风湿关节炎最好的药物。其它的疗效还有治疗神经痛和高血压等。本文首先对蜂毒中的生理活性成份进行了叙述,综述了近年来国内外以蜂毒为原料生物制药的现状。对蜂毒生物药品的种类和临床应用进行了重点论述,认为蜂毒生物制药的前景光明,并指出目前蜂毒生物制药存在的问题。

关键词：蜂毒生物制品临床应用透明质酸酶磷脂酶A2 种类生理活性成份

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疼痛神经的传导与调节

中国临床康复 2006年第10期10卷 132-134页

作者：余茂耘韦传宝皖西学院化学与生命科学系安徽省六安市237000

目的:探讨疼痛神经传导与调节的机制,以期为临床镇痛药物的研究提供理论依据。资料来源:应用计算机检索Medline1984-01/2005-06期间的有关疼痛、疼痛传导和调节的文献,检索词“pain,painconduction,painregulation”,并限定文章语言种类... 详细信息

目的:探讨疼痛神经传导与调节的机制,以期为临床镇痛药物的研究提供理论依据。资料来源:应用计算机检索Medline1984-01/2005-06期间的有关疼痛、疼痛传导和调节的文献,检索词“pain,painconduction,painregulation”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索“中国期刊全文数据库”和“万方数字化期刊”1984-01/2005-06期间的相关文献,限定文章语言种类为中文,检索词“疼痛、疼痛传导、疼痛调制”。资料选择:对资料进行初步审查,选择与疼痛、疼痛传导和调节有关的研究论著,排除重复性研究及综述类文献。资料提炼:共收集到37篇关于疼痛、疼痛传导和调节的文献,19篇符合上述纳入标准,排除的18篇为重复研究或综述文献。资料综合:痛觉是由伤害性感受器的冲动激活中枢系统引起的。疼痛的传导可分为3级:疼痛通过初级感觉神经元传到疼痛的初级中枢-脊髓背角,再经由脊丘束、脊网束、脊-中脑束、脊颈束、脊柱突触后纤维束5条上行传导束传达到脑,由丘脑进行痛觉整合。痛觉调制中的闸门学说是目前较有效合理的学说,脑中枢对疼痛的调制中研究最多了解最清楚的是脑干对脊髓背角神经元的下行抑制系统。结论:疼痛的传导和调制机制已初见端倪,对疼痛的治疗和控制起了很大的推动作用。

关键词：疼痛/病理生理学神经元/病理学神经传导/生理学

检测侵染生姜的烟草花叶病毒ELISA的建立

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中国免疫学杂志 2017年第9期33卷 1355-1358,1360页

作者：韦传宝邓辉皖西学院生物与制药工程学院六安237012

目的:建立检测侵染生姜的烟草花叶病毒的ELISA方法。方法:用RT-PCR方法检测侵染生姜的烟草花叶病毒,挑选仅含烟草花叶病毒的生姜叶片,采用离心方法提取叶片中的烟草花叶病毒,通过12%SDS-PAGE和5%~20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳分离出烟... 详细信息

目的:建立检测侵染生姜的烟草花叶病毒的ELISA方法。方法:用RT-PCR方法检测侵染生姜的烟草花叶病毒,挑选仅含烟草花叶病毒的生姜叶片,采用离心方法提取叶片中的烟草花叶病毒,通过12%SDS-PAGE和5%~20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳分离出烟草花叶病毒的外壳蛋白CP,将含CP的聚丙烯酰胺凝胶磨细后免疫小鼠,获得抗血清。用Western blot检测抗血清特异性,ELISA检测抗血清的结合性,通过亲和层析纯化抗血清中的Ig G。以待测生姜叶片液为抗原包被,纯化的抗血清IgG为一抗,羊抗小鼠IgG为二抗,建立检测侵染生姜的烟草花叶病毒的间接ELISA。结果:抗血清中的Ig G仅仅与烟草花叶病毒的CP结合,并能够结合天然烟草花叶病毒颗粒。建立的ELISA对花叶病生姜叶片的检测结果与RT-PCR检测结果一致。结论:成功地建立了检测侵染生姜的烟草花叶病毒的ELISA方法。

关键词：烟草花叶病毒生姜 ELISA方法

在制备尖吻蝮蛇毒出血毒素抗血清中不同凝胶染色方法的比较

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中国免疫学杂志 2016年第12期32卷 1793-1796页

作者：韦传宝曹佳敏皖西学院生物与制药工程学院六安237012

目的:寻找在制备出血毒素抗血清中电泳后染色凝胶的好方法。方法:按照前人的方法从皖南产尖吻蝮蛇毒中初步分离3种出血毒素:Aa HⅠ、Aa HⅡ和Aa HⅣ并获得3种粗提取的出血毒素,用制备电泳的方法进一步纯化Aa HⅠ、Aa HⅡ和Aa HⅣ,对每... 详细信息

目的:寻找在制备出血毒素抗血清中电泳后染色凝胶的好方法。方法:按照前人的方法从皖南产尖吻蝮蛇毒中初步分离3种出血毒素:Aa HⅠ、Aa HⅡ和Aa HⅣ并获得3种粗提取的出血毒素,用制备电泳的方法进一步纯化Aa HⅠ、Aa HⅡ和Aa HⅣ,对每种出血毒素,配制6块制备电泳板并进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用6种不同的染色方法分别染色,将含出血毒素的凝胶切下,磨细后直接免疫注射小鼠并获得抗血清,用ELISA检测和中和出血毒素出血活性两种方法检测抗血清的质量。结果:不同染色方法制备的抗血清中有效Ig G浓度不同,用无毒型蛋白质快速染色试剂盒染色制备的抗血清有效Ig G浓度最高。结论:用无毒型蛋白质快速染色试剂盒染色是制备抗血清最好的染色方法。

关键词：尖吻蝮蛇出血毒素抗血清制备染色法质量检测

以两阶段流加策略在大肠杆菌中生产褐色嗜热裂孢菌葡萄糖异构酶

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中国食品学报 2018年第2期18卷 79-87页

作者：邓辉朱富成陈存武孙传伯韦传宝皖西学院生物与制药工程学院安徽六安237012 中科院云计算中心公共安全研究院广东东莞523808 六安市蛋白质分离与纯化研究中心安徽六安2370123

为达到褐色嗜热裂孢菌葡萄糖异构酶在大肠杆菌中的过量表达,褐色嗜热裂孢菌葡萄糖异构酶的编码基因被植入含有T7强启动子的表达载体p ET-24a(+)中,并转入重组大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,于3L发酵罐中采用两阶段补料策略进行高密度发酵... 详细信息

为达到褐色嗜热裂孢菌葡萄糖异构酶在大肠杆菌中的过量表达,褐色嗜热裂孢菌葡萄糖异构酶的编码基因被植入含有T7强启动子的表达载体p ET-24a(+)中,并转入重组大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,于3L发酵罐中采用两阶段补料策略进行高密度发酵产酶。在诱导前阶段,设定比生长速率μset=0.25,补料流加速率以指数方式增长;在诱导阶段,根据诱导后培养基中甘油残留量和乙酸的积累量,补料流加速率以梯度方式下降。在此流加策略下进一步考察影响发酵产酶的诱导强度、诱导节点、诱导温度和复合氮源的添加量等因素。最终根据两阶段流加策略,在乳糖流加速率0.2 g/(L·h),诱导时菌浓(DCW)30 g/L,诱导温度25℃和适量添加复合氮源的条件下,1 m L发酵液的菌体细胞内重组GIase产量达到124 U,这是通过菌体发酵产GIase获得的最高产量。

关键词：褐色嗜热裂孢菌葡萄糖异构酶两阶段流加策略高密度发酵诱导条件优化

侵染浙贝母3种病毒CP基因的原核表达、抗血清制备及其病毒检测

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植物研究 2013年第1期33卷 73-79页

作者：吴琪瑶韦传宝李进华安徽大学资源与环境工程学院合肥230601 皖西学院安徽省植物生物技术实训中心六安237012

根据GenBank报道的浙贝母花叶病毒(Thunberg fritillary mosaic virus,TFMV)、浙贝母Y病毒(Fritillary virus Y,FVY)和百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)序列设计引物,扩增其CP基因。将CP基因插入表达载体pSBET,转化大肠杆菌BL21(DE3)Plys E菌株,IPTG诱导表达。经12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE两次纯化CP,分别免疫小鼠获得抗CP血清。采用Western blot分析确定抗体的特异性及其之间的血亲学关系;采用ELISA分析确定抗体是否能与天然病毒粒子结合。采用Western blot、间接ELISA法和Dot-ELISA法检测侵染浙贝母的3种病毒。结果表明,制备的抗体对CP有高度特异性,相互之间无交叉反应,且能与天然病毒离子结合。制备的抗血清可以用于检测3种病毒,其中间接ELISA法和Dot-ELISA法检测效果较好。

关键词：浙贝母病毒原核表达抗血清制备病毒检测

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肝素-壳聚糖亲和层析纯化猪凝血酶研究

食品工业科技 2013年第4期34卷 176-179,183页

作者：何晓梅韦传宝张业峰皖西学院生物与制药工程学院安徽六安237012 皖西学院安徽省植物生物技术实验实训中心安徽六安237012

采用反相悬浮交联法制备壳聚糖球珠,壳聚糖球珠经过环氧氯丙烷活化并与肝素耦联制成亲和层析剂分离和纯化猪凝血酶。结果表明制备出几何形态、分散性、溶胀性均良好的壳聚糖球珠的最佳条件是:5%壳聚糖溶液112.5mL、液体石蜡75mL、乙酸乙... 详细信息

采用反相悬浮交联法制备壳聚糖球珠,壳聚糖球珠经过环氧氯丙烷活化并与肝素耦联制成亲和层析剂分离和纯化猪凝血酶。结果表明制备出几何形态、分散性、溶胀性均良好的壳聚糖球珠的最佳条件是:5%壳聚糖溶液112.5mL、液体石蜡75mL、乙酸乙酯15mL、甲醛10mL、戊二醛2mL、Span808滴、转速2500r/min。壳聚糖球珠用ddH2O溶胀24h,具有明显的多孔性。猪凝血酶活性检测结果表明肝素-壳聚糖亲和层析剂能够用于猪凝血酶的分离和纯化。此研究结果对于亲和层析剂的制备和猪凝血酶的分离和纯化具有一定的参考价值。

关键词：壳聚糖球珠肝素亲和层析纯化凝血酶