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我国部分地区鸽腺病毒病的血清学调查

中国家禽 2022年第6期44卷 117-120页

作者：习硕赵蕾史爱华李林靳换张建伟沈佳姜北宇彭湃章振华北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100097 北京翎羽生物科技有限公司北京101302

为了解鸽腺病毒在我国鸽养殖场的流行情况,研究于2018年6月—2020年5月,采集北京、河北、江西、山东、河南5个地区552份鸽血清样品,通过中和试验对血清中的鸽腺病毒中和抗体进行检测。结果显示:552份鸽血清样品共检出阳性样品344份,鸽... 详细信息

为了解鸽腺病毒在我国鸽养殖场的流行情况,研究于2018年6月—2020年5月,采集北京、河北、江西、山东、河南5个地区552份鸽血清样品,通过中和试验对血清中的鸽腺病毒中和抗体进行检测。结果显示:552份鸽血清样品共检出阳性样品344份,鸽血清腺病毒抗体阳性率为62.3%,山东地区鸽血清腺病毒抗体阳性率最高,为100%(17/17),河南地区鸽血清腺病毒抗体阳性率最低为50%(11/22);不同日龄鸽血清腺病毒抗体检测结果显示,青年鸽(3~5月龄)血清腺病毒抗体阳性率最高,童鸽(1~2月龄)血清腺病毒抗体阳性率最低;不同品种鸽血清腺病毒抗体的检测结果也存在差异,肉鸽血清腺病毒抗体阳性率达到75.3%,明显高于信鸽血清腺病毒抗体阳性率(47.2%)。表明鸽腺病毒在我国鸽群中感染率较高,调查结果为鸽腺病毒病的预防与控制提供数据支持。

关键词：鸽腺病毒血清学检测流行病学调查

基于悬浮细胞制备的鸡新城疫-H9亚型禽流感二联灭活疫苗(La Sota株+BX13株)安全性和免疫产生期研究

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中国家禽 2023年第1期45卷 32-37页

作者：沈佳赵蕾习硕史爱华李林靳换章振华张建伟北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100097

为探讨悬浮细胞制备的鸡新城疫-H9亚型禽流感二联灭活疫苗(La Sota株+BX13株)(以下简称二联灭活疫苗)的安全性和免疫产生期,试验用新城疫病毒(NDV)La Sota株和H9亚型禽流感病毒(AIV)BX13株分别接种BHK-21和MDCK悬浮细胞,收获抗原液,制... 详细信息

为探讨悬浮细胞制备的鸡新城疫-H9亚型禽流感二联灭活疫苗(La Sota株+BX13株)(以下简称二联灭活疫苗)的安全性和免疫产生期,试验用新城疫病毒(NDV)La Sota株和H9亚型禽流感病毒(AIV)BX13株分别接种BHK-21和MDCK悬浮细胞,收获抗原液,制备二联灭活疫苗;采用1 mL/只的剂量接种21日龄SPF鸡进行二联灭活疫苗的安全性试验;以0.02、0.05、0.1、0.3、0.5 mL/只的剂量接种21日龄SPF鸡,免疫后7、14、21 d采血测定NDV HI和AIVHI抗体,并于免疫后21日龄攻毒进行免疫保护试验和免疫产生期试验。结果显示:二联灭活疫苗对SPF鸡安全,鸡只无不良反应,疫苗吸收良好;各剂量组免疫后抗体水平均逐渐升高,免疫后21 d NDV HI效价为6.1~8.5 log2,AIV HI效价为7.5~11.2 log2;免疫后21 d,0.02 mL/只剂量组对两种毒株的攻毒保护率均为9/10,其余剂量组均为10/10保护。研究表明,二联灭活疫苗对SPF鸡安全,以0.1 mL/只的剂量免疫SPF鸡21 d可获得对NDV和H9 AIV的有效抵抗。

关键词：鸡新城疫 H9亚型禽流感悬浮培养二联灭活疫苗安全性免疫产生期

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鸽源禽腺病毒的分离鉴定及全基因序列分析

中国家禽 2022年第4期44卷 108-112页

作者：习硕赵蕾靳换史爱华李林张建伟沈佳姜北宇彭湃章振华北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100097 北京翎羽生物科技有限公司北京101302

为确诊一起疑似由禽腺病毒感染引起的鸽死亡病例,研究通过细胞连续传代培养、病毒全基因组测序及动物回归试验等对2018年河北某鸽场采集的鸽病料进行鉴定。结果显示:分离出一株血清4型禽腺病毒(FAdV4),命名为SP18株,其全基因组序列与近... 详细信息

为确诊一起疑似由禽腺病毒感染引起的鸽死亡病例,研究通过细胞连续传代培养、病毒全基因组测序及动物回归试验等对2018年河北某鸽场采集的鸽病料进行鉴定。结果显示:分离出一株血清4型禽腺病毒(FAdV4),命名为SP18株,其全基因组序列与近几年国内流行的FAdV强毒株处于一个分支上,相似性达到99.57%以上,与ON1、KR5、MX-SHP95等国外流行毒株的同源性相对国内流行毒株稍远,说明分离株与近几年国内外公开报道的FAdV4分离株亲缘关系较近。研究结果为进一步开展鸽群禽腺病毒的诊断防控提供研究基础。

关键词：鸽禽腺病毒分离鉴定全基因组测序

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白nsp11结构与功能

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中国兽医杂志 2017年第8期53卷 59-62页

作者：姜楠靳换李逸陈艳红周磊中国农业大学动物医学院北京海淀100193

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种严重危害生猪养殖的重要病原,以引起感染母猪繁殖障碍和各日龄猪只呼吸道症状为特征。PRRSV病原具有免疫抑制、持续性感染和高度变异的特性,其在靶细胞（PAMs）中或体内的增殖能力能够直接影响病... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种严重危害生猪养殖的重要病原,以引起感染母猪繁殖障碍和各日龄猪只呼吸道症状为特征。PRRSV病原具有免疫抑制、持续性感染和高度变异的特性,其在靶细胞（PAMs）中或体内的增殖能力能够直接影响病毒的致病性,而病毒编码的非结构蛋白（nsp）往往与病毒复制增殖能力密切相关。

关键词：非结构蛋白 nsp11 病毒母猪繁殖障碍致病性持续性感染核糖核酸内切酶免疫抑制靶细胞综合征

与PRRSV nsp11互作的宿主细胞蛋白鉴定及生物信息学分析

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微生物学通报 2017年第12期44卷 2856-2870页

作者：靳换李逸姜楠周磊盖新娜杨汉春郭鑫中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学重点实验室北京100193

【目的】研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)nsp11与宿主细胞蛋白之间的相互作用,对于揭示nsp11在病毒复制过程中发挥的功能至关重要。【方法】在病毒感染细胞的基础上,利用nsp11... 详细信息

【目的】研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)nsp11与宿主细胞蛋白之间的相互作用,对于揭示nsp11在病毒复制过程中发挥的功能至关重要。【方法】在病毒感染细胞的基础上,利用nsp11的单克隆抗体,采用免疫沉淀结合串联质谱的方法,筛选与PRRSV nsp11相互作用的宿主细胞蛋白,并对所筛选出的宿主细胞蛋白进行了GO注释、COG注释和KEGG代谢通路注释;选取筛选出的宿主细胞蛋白IRAK1,利用免疫共沉淀技术和激光共聚焦技术鉴定其与nsp11之间的相互作用。【结果】与空白对照组相比,病毒感染组中出现3条差异带;经质谱分析共筛选得到了201个与nsp11相互作用的宿主细胞蛋白,分别与蛋白质代谢、细胞信号通路转导以及病原致病性等密切相关;在生物信息学分析的基础上,实验验证了nsp11确与宿主细胞蛋白IRAK1进行相互作用。【结论】鉴定出与PRRSV nsp11相互作用的宿主细胞蛋白,生物信息学分析显示它们在病毒的复制和致病过程中发挥重要作用。研究结果为探究nsp11的生物学功能指明了方向,也为研究宿主细胞蛋白与病毒蛋白间的相互作用及其调控病毒复制和致病性的分子机制奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白11 宿主细胞蛋白相互作用生物信息学分析

鸡补体受体2基因克隆、蛋白表达纯化及其多克隆抗体的制备和鉴定

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中国畜牧兽医 2020年第1期47卷 201-208页

作者：孔子萌江波蔡云虹何后军李永清靳换江西农业大学动物科学技术学院南昌330045 北京市农林科学院畜禽疫病研究中心北京100097

为初步鉴定鸡补体受体2(ChCR2)基因,本试验设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增ChCR 2基因。利用同源臂连接的方法构建去掉跨膜区的ChCR2-△TM基因的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-... 详细信息

为初步鉴定鸡补体受体2(ChCR2)基因,本试验设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增ChCR 2基因。利用同源臂连接的方法构建去掉跨膜区的ChCR2-△TM基因的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-△TM,将两个原核质粒转入大肠杆菌表达系统中表达GST-ChCR2-△TM和His-ChCR2-△TM蛋白。将纯化后的GST-ChCR2-△TM蛋白免疫BALB/c小鼠制备血清多克隆抗体,以His-ChCR2-△TM蛋白为包被原,ELISA检测血清多克隆抗体效价。利用间接免疫荧光试验和Western blotting对抗原抗体的特异结合性进行鉴定。结果显示,扩增到了一条大小为1113 bp的ChCR 2基因条带。成功构建了去掉跨膜区的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-△TM。诱导表达的GST-ChCR2-△TM蛋白在低温(16℃)诱导条件下可溶,而His-ChCR2-△TM蛋白以包涵体的形式存在。经ELISA测定,GST-ChCR2-△TM蛋白免疫的BALB/c小鼠血清效价为1∶512000。间接免疫荧光试验和Western blotting结果显示,制备的抗GST-ChCR2-△TM蛋白血清多克隆抗体可与ChCR2蛋白发生特异性结合。本研究结果为ChCR 2基因的进一步鉴定及鸡乃至禽类的相关免疫学研究提供了参考依据。

关键词： ChCR2基因蛋白表达和纯化多克隆抗体 ELISA 间接免疫荧光 Western blotting

鸽新城疫rGX-mF株灭活疫苗的制备及免疫原性分析

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中国兽药杂志 2023年第10期57卷 25-32页

作者：涂敏赵蕾史爱华沈佳习硕张建伟彭湃王海良章振华靳换北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100097 北京翎羽生物科技有限公司北京101302 北京市兽药饲料检测中心北京102200

为有效控制临床中鸽新城疫的发生,选取基因Ⅵ型鸽新城疫病毒弱毒株rGX-mF作为疫苗候选株,评价其生物学特性,并将rGX-mF灭活后制备成油佐剂灭活疫苗,接种雏鸽和SPF鸡进行rGX-mF株的免疫原性分析,为研制安全高效的鸽新城疫灭活疫苗奠定基... 详细信息

为有效控制临床中鸽新城疫的发生,选取基因Ⅵ型鸽新城疫病毒弱毒株rGX-mF作为疫苗候选株,评价其生物学特性,并将rGX-mF灭活后制备成油佐剂灭活疫苗,接种雏鸽和SPF鸡进行rGX-mF株的免疫原性分析,为研制安全高效的鸽新城疫灭活疫苗奠定基础。结果表明,rGX-mF株能够在鸡胚中稳定传代,效价高,毒力弱;rGX-mF株灭活疫苗接种雏鸽后疫苗吸收良好,无局部和全身不良反应,安全性好,免疫持续期长达12个月;rGX-mF株灭活疫苗与LaSota株灭活疫苗相比,rGX-mF株灭活疫苗在鸽体内能产生更高水平的抗体;rGX-mF株灭活疫苗同时免疫SPF鸡和雏鸽,SPF鸡产生的抗体显著高于鸽产生的抗体,这可能与鸽和鸡的免疫系统存在差异有关。综上,利用基因Ⅵ型鸽新城疫病毒弱毒rGX-mF株制备的灭活疫苗可在鸽体内产生有效的抗体,免疫效果好,免疫持续期长。

关键词：基因Ⅵ型鸽新城疫灭活疫苗免疫原抗体

基于表面等离子共振技术鉴定鸡补体受体2与其配体chC3 d的亲和力

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中国兽药杂志 2023年第7期57卷 1-7页

作者：靳换杨芊芊王聪涂敏赵蕾澎湃王海良孟昭英李永清章振华北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100097 中牧实业股份有限公司北京100000 北京翎羽生物科技有限公司北京101302 北京市兽药饲料监测中心北京102200

鸡补体受体2(Chicken complement receptor 2,chCR2)是一种表达于鸡B淋巴细胞表面的跨膜蛋白,chCR2可以与其生理学配体鸡补体组分3 d(Chicken complement component 3 d,chC3 d)相互作用。目前评估受体与配体亲和力的方法主要有表面等... 详细信息

鸡补体受体2(Chicken complement receptor 2,chCR2)是一种表达于鸡B淋巴细胞表面的跨膜蛋白,chCR2可以与其生理学配体鸡补体组分3 d(Chicken complement component 3 d,chC3 d)相互作用。目前评估受体与配体亲和力的方法主要有表面等离子共振技术(Surface plasmon resonance,SPR)和生物膜干涉技术(Biolayer interferometry,BLI)等。旨在利用表面等离子共振技术鉴定chCR2受体分子与其配体chC3 d分子的亲和力。成功构建了重组真核表达载体pTT5-chCR2和pTT5-chC3 d;利用HEK 293F表达系统表达了His-chCR2和His-chC3 d蛋白;利用NI柱纯化系统纯化了His-chCR2和His-chC3 d蛋白;利用表面等离子共振技术,通过分析chCR2与chC3 d结合的动力学参数得出两者之间的平衡解离常数KD为1.37μmol/L。结果表明chCR2与其配体chC3 d之间的亲和力较高。

关键词：鸡补体受体2 鸡补体组分3 d 表面等离子共振技术相互作用

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种鸭源猪丹毒丝菌分离及血清学调查

中国兽医杂志 2014年第8期50卷 13-16页

作者：王腾靳换纪丽丽张清水韩相敏孙海港白如念杨秀环何伟勇苏敬良中国农业大学动物医学农业部动物流行病学与人畜共患病重点实验室北京海淀100193 北京市畜牧兽医总站北京朝阳100107

从发生生产性能异常的2个种鸭群中分离到2株革兰阳性丝状菌,经16S rRNA基因序列分析鉴定为猪丹毒丝菌。采用多重PCR对分离株编码表面保护性抗原(spa)基因进行扩增,分别获得大小约1 000 bp和900 bp的片段,判定为spaC型和spaB型。毒力检... 详细信息

从发生生产性能异常的2个种鸭群中分离到2株革兰阳性丝状菌,经16S rRNA基因序列分析鉴定为猪丹毒丝菌。采用多重PCR对分离株编码表面保护性抗原(spa)基因进行扩增,分别获得大小约1 000 bp和900 bp的片段,判定为spaC型和spaB型。毒力检测结果表明,2个分离株对小鼠的半数致死量(LD50)分别为103CFU/0.2 mL和≤102CFU/0.2 mL。药敏试验结果表明,分离株对青霉素类和大部分头孢菌素类抗生素敏感,对氨基糖苷类等药物具有明显的抗性。为进一步了解猪丹毒丝菌对鸭群的感染情况,本研究采用生长凝集试验对来源于3个不同鸭场的种鸭群进行血清学调查,结果,抗丹毒丝菌抗体阳性率(抗体效价≥16)分别为82%、35%和20%,表明鸭群中广泛存在猪丹毒丝菌感染。

关键词：种鸭猪丹毒丝菌 spa型血清流行病学