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军事医学科学院肿瘤研究进展

中国科学：生命科学 2011年第10期41卷 807-811页

作者：靳宝锋夏晴张学敏军事医学科学院国家生物医学分析中心北京100850

本文从肝癌易感基因发现、炎症与肿瘤发生及其调控、p53与细胞凋亡调控、肿瘤标志物和治疗靶标发现等方面,综述军事医学科学院近年来关于肿瘤研究的进展.

关键词：肿瘤易感基因炎症与肿瘤 p53 凋亡调控肿瘤标志物

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eIF-5A与hypusine

军事医学科学院院刊 2003年第6期27卷 463-466页

作者：靳宝锋何昆张学敏军事医学科学院基础医学研究所北京100850

翻译起始因子eIF_5A在真核细胞内普遍存在 ,是目前为止惟一发现含独特氨基酸hypusine残基的蛋白。hypusine是eIF_5A前体的特定赖氨酸残基 (第 5 0位 )经亚精胺依赖性的翻译后修饰形成的 ,每一成熟的eIF_5A仅含一个hypusine残基 ,eIF_5A... 详细信息

翻译起始因子eIF_5A在真核细胞内普遍存在 ,是目前为止惟一发现含独特氨基酸hypusine残基的蛋白。hypusine是eIF_5A前体的特定赖氨酸残基 (第 5 0位 )经亚精胺依赖性的翻译后修饰形成的 ,每一成熟的eIF_5A仅含一个hypusine残基 ,eIF_5A的hypusine修饰是其发挥功能、细胞存活和增殖所必需的。本文对eIF_5A的研究历史、现状和hypusine功能的近期进展进行了概述 ,并进一步分析了eIF_5A的可能功能及hypusine修饰过程作为药物靶标诱导细胞凋亡的应用前景。

关键词： eIF-5A hypusine 蛋白质合成细胞凋亡

纳升电喷雾串联质谱技术对阻断泛素通路诱导凋亡相关蛋白质的鉴定

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第5期34卷 630-634页

作者：王红霞靳宝锋王杰何昆杨松成沈倍奋张学敏军事医学科学院基础医学研究所军事医学科学院国家生物医学分析中心北京100850 军事医学科学院国家生物医学分析中心

应用毛细管液相色谱电喷雾四极杆飞行时间串联质谱和纳升电喷雾四极杆飞行时间串联质谱技术 ,对阻断白血病细胞泛素通路诱发的凋亡相关蛋白质进行了鉴定。通过双向电泳发现 ,蛋白质斑点H在阻断Mo7e白血病细胞泛素通路 2h之后 ,... 详细信息

应用毛细管液相色谱电喷雾四极杆飞行时间串联质谱和纳升电喷雾四极杆飞行时间串联质谱技术 ,对阻断白血病细胞泛素通路诱发的凋亡相关蛋白质进行了鉴定。通过双向电泳发现 ,蛋白质斑点H在阻断Mo7e白血病细胞泛素通路 2h之后 ,表达量明显增加 ,6h达到最高。该斑点经MALDI TOF MS肽质量指纹谱分析未获结果 ,但通过上述 2种串联质谱技术获得其胰蛋白酶水解肽段的串联质谱图和肽段的全长序列 ,经检索均确认为RhoGDIβ蛋白。进一步发现阻断泛素通路还诱发了另 2个斑点出现 ,位于H点附近 ,经鉴定为同一蛋白质 ,可能是不同翻译后修饰所造成

关键词：蛋白质组纳升电喷雾串联质谱细胞凋亡泛素通路

小毛茛居群分化研究(Ⅱ)——居群遗传变异的等位酶分析

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广西植物 2002年第1期22卷 71-73,70页

作者：汪小凡靳宝锋庞新安张竞男武汉大学植物发育生物学教育部重点实验室湖北武汉430072 武汉大学生命科学学院湖北武汉430072

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测小毛茛的 3个地点共 6个居群的遗传变异。对 4个酶系统 7个酶位点的基因型频率的聚类分析 ,结果表明 :小毛茛居群遗传分化主要与居群所在生境因素相关 ,与地理位置之间仅有不显著的相关性。

关键词：遗传变异小毛莨居群分化等位酶分析

人Bcl-2蛋白的基因克隆、表达及初步活性分析

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中国免疫学杂志 2003年第9期19卷 595-598页

作者：胡美茹张学敏靳宝锋兰雨沈倍奋军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的 :以特定形式对高度疏水性的人Bcl 2 (hBcl 2 )蛋白进行可溶性表达 ,获得非疏水性hBcl 2蛋白并具备生物学结合活性 ,为进一步研究hBcl 2三维结构并在此基础上研发特异性小分子药物提供充足的蛋白样品。方法 :用PCR方法对hBcl 2基因... 详细信息

目的 :以特定形式对高度疏水性的人Bcl 2 (hBcl 2 )蛋白进行可溶性表达 ,获得非疏水性hBcl 2蛋白并具备生物学结合活性 ,为进一步研究hBcl 2三维结构并在此基础上研发特异性小分子药物提供充足的蛋白样品。方法 :用PCR方法对hBcl 2基因进行克隆重组 ,插入原核表达载体pET2 8a(+)中。用WesternBlot和MALDI TOF生物质谱鉴定 ,采用荧光极化方法进行活性测定。结果 :重组hBcl 2在E .Coli中实现了高效、可溶性的融合表达 ,重组蛋白经纯化至电泳纯 ,具备了与Bcl 2家族Bak蛋白BH3功能域特异结合的能力 ,表明原核表达的重组hBcl 2具有较好的结合活性。结论 :成功地对重组hBcl 2蛋白进行了可溶性表达和活性测定。

关键词：人Bcl-2蛋白基因克隆表达活性分析

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eIF-5A的亚细胞定位研究

军事医学科学院院刊 2003年第5期27卷 330-333页

作者：何昆周涛靳宝锋胡美茹杨怡张学敏国家生物医学分析中心北京100850 军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的 :研究eIF_5A的亚细胞定位 ,为了解其生物学功能提供线索。方法 :借助免疫荧光技术和GFP标签技术 ,用激光共聚焦显微镜检测eIF_5A的亚细胞定位。结果 :免疫荧光检测结果表明 ,eIF_5A定位于细胞质中 ;GFP_eIF_5A瞬时转染后 ,起初eIF... 详细信息

目的 :研究eIF_5A的亚细胞定位 ,为了解其生物学功能提供线索。方法 :借助免疫荧光技术和GFP标签技术 ,用激光共聚焦显微镜检测eIF_5A的亚细胞定位。结果 :免疫荧光检测结果表明 ,eIF_5A定位于细胞质中 ;GFP_eIF_5A瞬时转染后 ,起初eIF_5A为全细胞分布 ,以后逐渐转移到细胞质中。第 5 0位赖氨酸突变为丙氨酸后的eIF_5A则分布于整个细胞。结论 :eIF_5A具有核质穿梭功能 ,它的亚细胞定位是个动态变化过程 ,hypusine可影响其亚细胞定位 ,进而可能影响其功能的发挥。

关键词： eIF-5A 亚细胞定位免疫荧光激光共聚焦

干涉Gankyrin基因表达对小鼠乳腺癌转移的影响

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中华医学杂志 2013年第14期93卷 1099-1103页

作者：王少鑫巩伟丽韩秋影满江红靳宝锋军事医学科学院国家生物医学分析中心北京100850

目的建立稳定干涉癌基因Gankyrin的4T1-luc细胞株，探讨Gankyrin对小鼠乳腺癌转移的影响。方法采用慢病毒感染和抗性筛选方法获得稳定干涉Gankyrin的乳腺癌细胞株4T1-luc／shGankyrin，通过蛋白质印迹和实时定量PCR方法分别在蛋白质和m... 详细信息

目的建立稳定干涉癌基因Gankyrin的4T1-luc细胞株，探讨Gankyrin对小鼠乳腺癌转移的影响。方法采用慢病毒感染和抗性筛选方法获得稳定干涉Gankyrin的乳腺癌细胞株4T1-luc／shGankyrin，通过蛋白质印迹和实时定量PCR方法分别在蛋白质和mRNA水平检测Gankyrin的干涉效果；选用BALB／c小鼠进行4T1细胞原位种植，利用活体成像技术实时观测小鼠体内肿瘤生长和肿瘤转移情况，并对小鼠肺转移瘤进行病理学分析。结果采用免疫印迹和实时定量PCR，检测稳定敲低Gankyrin4T1细胞在蛋白质水平和mRNA水平的表达，均明显低于对照细胞，与对照细胞相比，不同干涉序列的4T1细胞mRNA水平分别为对照细胞的4．9％、25．1％、69．8％。利用活体成像进行细胞数与细胞发光强度的检测，选择细胞数与发光强度基本一致的#2细胞株进行小鼠原位种植，其产生的转移瘤进行实时观测，结果显示敲低Gankyrin的4T1细胞诱导的肺转移瘤荧光强度为3．02×10^6，而对照细胞为10．9×10^6，同时病理学证实了对照细胞产生的肺转移瘤免疫组织化学Gankyrin染色阳性，而敲低Gankyrin的4T1细胞的肺转移瘤免疫组织化学Gankyrin染色阴性。结论采用慢病毒感染的方法可以有效建立稳定敲低Gankyrin表达的细胞株；Gankyrin稳定干涉后对小鼠乳腺癌转移具有明显的抑制作用。Gankyrin有可能成为新的肿瘤治疗靶点。

关键词：慢病毒感染肿瘤转移 Gankyrin

UBE2W抑制TNFα诱导的NF-κB转录活性

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科学技术与工程 2012年第35期20卷 9457-9460页

作者：王少鑫巩伟丽陈媛靳宝锋国家生物医学分析中心北京100850

UBE2W(ubiquitin-conjugating enzyme E2W)是一新的泛素结合酶,关于其功能研究甚少。采用双荧光报告系统和Western blot等方法,分别干涉和过表达UBE2W,分析UBE2W对TNF(刺激下NF-(B转录活性的影响。结果显示UBE2W能够显著抑制TNFα诱导的... 详细信息

UBE2W(ubiquitin-conjugating enzyme E2W)是一新的泛素结合酶,关于其功能研究甚少。采用双荧光报告系统和Western blot等方法,分别干涉和过表达UBE2W,分析UBE2W对TNF(刺激下NF-(B转录活性的影响。结果显示UBE2W能够显著抑制TNFα诱导的NF-κB的转录活性,提示该基因可能参与NF-κB相关功能的调控。

关键词： UBE2W NF-κB TNFα

利用荧光极化技术在均相系统内建立基于Bcl-2/Bak作用模式的高通量药物筛选体系

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军事医学科学院院刊 2005年第5期29卷 457-459,470页

作者：胡美茹靳宝锋张学敏孙瑛勋沈倍奋军事医学科学院基础医学研究所北京100850 军事医学科学院生物医学分析中心北京100850

目的:利用荧光极化原理,在液相系统内建立基于Bcl-2/Bak相互作用模式的高通量药物筛选体系。方法:在液相系统内建立Bcl-2蛋白和多肽的相互作用体系,用光度计检测荧光极化值,分析荧光极化值随蛋白或多肽浓度变化而改变的趋势。结果:对应... 详细信息

目的:利用荧光极化原理,在液相系统内建立基于Bcl-2/Bak相互作用模式的高通量药物筛选体系。方法:在液相系统内建立Bcl-2蛋白和多肽的相互作用体系,用光度计检测荧光极化值,分析荧光极化值随蛋白或多肽浓度变化而改变的趋势。结果:对应于Bak蛋白BH3结构域的5FAM标记肽(LP)可与Bcl-2蛋白相互作用,建立了二者相互作用的饱和曲线;非标记竞争性短肽(CP)和LP竞争性地与Bcl-2蛋白结合,而无关肽(NP)则不与Bcl-2相互作用;基于Bcl-2结构筛选到的小分子化合物SC对体系内LP荧光极化值的影响模式与CP相同。结论:在均相系统内初步建立了基于抑制Bcl-2活性进而促进细胞凋亡的药物高通量筛选方法,为实现药物的高通量筛选奠定了基础。

关键词：荧光极化 Bcl-2蛋白 Bak蛋白 BH3结构域饱和曲线