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Pten敲除对Rad51基因表达的影响及其机制

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中国生物制品学杂志 2009年第12期22卷 1179-1182,1186页

作者：莫琳陈忠明胡迎春米粲吴德昌霍艳英重庆医科大学病理学教研室重庆400016 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

目的研究Pten敲除对Rad51基因表达的影响及其可能的机制。方法采用半定量RT-PCR法和克隆形成试验比较Pten+/+MEFs与Pten-/-MEFs两种细胞中同源重组修复相关基因Rad51mRNA转录水平的差异,并比较两种细胞对辐射敏感性的差异和辐射后Rad51... 详细信息

目的研究Pten敲除对Rad51基因表达的影响及其可能的机制。方法采用半定量RT-PCR法和克隆形成试验比较Pten+/+MEFs与Pten-/-MEFs两种细胞中同源重组修复相关基因Rad51mRNA转录水平的差异,并比较两种细胞对辐射敏感性的差异和辐射后Rad51基因mRNA转录水平的差异及其可能的机制。结果与Pten+/+MEFs细胞相比,Pten-/-MEFs细胞中Rad51基因mRNA的转录水平和对辐射的敏感性显著降低;辐射后以及PI3K/AKT信号通路抑制剂LY-294002作用后,Rad51基因mRNA的转录水平明显增高。结论Pten缺失后Rad51基因表达异常,Pten可能通过PI3K/AKT信号通路来调控Rad51基因的表达。

关键词： Pten Rad51 基因敲除表达

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TGF-β及Smads信号在癌症中的作用

国外医学（肿瘤学分册） 2002年第3期29卷 163-165页

作者：霍艳英军事医学科学院放射医学研究所放射毒理与辐射危害评价研究室北京100850

转化生长因子 β(TGF β)信号转导通路的配体、受体、胞内信号转导分子SMAD蛋白等组成一个肿瘤抑制通路。通路中任一元件的异常都可引起信号转导紊乱 ,导致肿瘤发生。TGF β配体表达的改变与皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌等相关。TGF β受... 详细信息

转化生长因子 β(TGF β)信号转导通路的配体、受体、胞内信号转导分子SMAD蛋白等组成一个肿瘤抑制通路。通路中任一元件的异常都可引起信号转导紊乱 ,导致肿瘤发生。TGF β配体表达的改变与皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌等相关。TGF β受体突变或缺失与眼黑色素瘤、结直肠癌及Burkitt′s淋巴瘤相关。Smad2和Smad4的突变或表达异常常见于胰腺癌、结直肠癌等消化系统肿瘤 ,也可见于肺癌及头颈鳞癌等 ,Smad3的功能性失活多见于恶性血液病 ,而Smad7的表达增高与胰腺癌相关。

关键词： TGF-β Smads信号癌症转化生长因子-β

基于Smad7基因为靶序列的RNA干涉作用研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2004年第12期32卷 13-17页

作者：王菊萍王莹霍艳英郭蔼光徐勤枝张开泰西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100 重庆医科大学基础医学院重庆400016 军事医学科学院放射医学研究所分子毒理研究室北京100850

　为了探讨小干涉RNA(siRNA)对靶基因Smad7mRNA表达的阻断作用,采用体外转录方法制备Smad7基因的小干涉RNAs(siRNAs),用脂质体介导瞬时转染BERP35T 2肺癌细胞系,并采用Northernblot杂交检测靶基因mRNA的表达丰度。结果表明,根据Smad7编... 详细信息

　为了探讨小干涉RNA(siRNA)对靶基因Smad7mRNA表达的阻断作用,采用体外转录方法制备Smad7基因的小干涉RNAs(siRNAs),用脂质体介导瞬时转染BERP35T 2肺癌细胞系,并采用Northernblot杂交检测靶基因mRNA的表达丰度。结果表明,根据Smad7编码区序列在体外成功地制备了针对2个不同靶序列的siRNAs;Northernblot杂交显示,在转染siRNA的BERP35T 2细胞中,不管是内源性的还是外源性的,Smad7mRNA的表达丰度均明显下降。说明Smad7基因编码区中542563bp及701722bp2个区域均是siRNA作用的有效靶序列,本研究设计并制备的siRNAs能有效抑制Smad7基因的表达。

关键词：小干涉RNA Smad 7基因体外转录瞬时转染靶序列

1株中国人HCV-2a型基因组部分cDNA序列的种系发生树分析

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中国公共卫生 2001年第9期17卷 769-771页

作者：霍艳英徐德忠赵小宁李如琳杨海杨国琦第四军医大学流行病学教研室西安710032 西安市卫生防疫站

用反转录套式PCR(RT -PCR)法从陕西地区 1例NANB型肝炎患者血清中扩增出部分E区的cDNA片段 ,克隆于PGEM -T载体中用全自动序列分析仪进行双向测序 ,测得的序列以及已发表的同一分离株 5′NRC、C区序列 ,分别同Genbank中注册的 3 6株已... 详细信息

用反转录套式PCR(RT -PCR)法从陕西地区 1例NANB型肝炎患者血清中扩增出部分E区的cDNA片段 ,克隆于PGEM -T载体中用全自动序列分析仪进行双向测序 ,测得的序列以及已发表的同一分离株 5′NRC、C区序列 ,分别同Genbank中注册的 3 6株已知基因型的HCV相应区段的序列比较 ,构建种系发生树。结果　 5′NCR区相应序列构建的种系发生树表明该分离株为 2型 ,而用C区和E区构建的种系发生树均表明该分离株为 2a型。提示该分离株为 2a型 ;对同一病原体来说 ,其基因区段的变异度不同 ,则种系发生树分析的结果不完全相同 ,变异度大的结果较准确。

关键词：丙型肝炎病毒病毒基因种系发生树 cDNA序列

我国部分地区丙型肝炎病毒5′端部分基因序列的比较

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解放军预防医学杂志 2001年第3期19卷 174-177页

作者：霍艳英徐德忠赵小宁李如琳杨海杨国琦第四军医大学预防医学系军队流行病教研室西安710033 西安市卫生防疫站西安市传染病院

目的 :测定我国部分地区丙型肝炎病毒 (HCV)分离株的 5′端部分cDNA序列 ,研究其基因型以及变异特点 ,为丙型肝炎的治疗和预后判断提供参考依据。方法 :用反转录套式聚合酶链反应 (RT -nPCR)法和 5′NCR区引物对我国部分地区 9株HCVRNA... 详细信息

目的 :测定我国部分地区丙型肝炎病毒 (HCV)分离株的 5′端部分cDNA序列 ,研究其基因型以及变异特点 ,为丙型肝炎的治疗和预后判断提供参考依据。方法 :用反转录套式聚合酶链反应 (RT -nPCR)法和 5′NCR区引物对我国部分地区 9株HCVRNA阳性血清进行扩增 ,扩增产物为 2 56bp ,将其纯化连接到PGEM -T载体上 ,然后进行测序 ,并与已发表的 50株HCV全序列的相应序列比较 ,并用种系发生法分析。结果 :该 9株HCV5′NCR核苷酸序列的同源性为93.0 %～ 99.6% ,其中 7株之间的同源性为 98.8%～ 99.6% ,另两株为 99.6%。同其它 50株同源性比较结果提示 ,7株属 1b型 ,2株属 2a型 ,种系发生法分析也支持这一结果。变异分析结果表明 ,同一亚型的核苷酸变异特点相似。结论 :该 9株HCV分离株分属 1b型和 2a型 ,该区同源性较高 ,但同一亚型的核苷酸变异特点相似。

关键词：丙型肝炎病毒 cDNA序列反转录聚合酶链反应种系发生分析

siRNA沉默多效生长因子表达及其生物学意义

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癌症 2006年第10期25卷 1210-1215页

作者：胡迎春刘敏丽李刚霍艳英吴德昌军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 重庆医科大学病理学教研室重庆400016

背景与目的:多效生长因子(pleiotrophin,Ptn)基因是一种分泌性的生长因子,具有促进肿瘤细胞的增殖与迁移及肿瘤血管的生成等功能。有研究表明,抑制该基因的表达,就能够有效地控制肿瘤细胞的过度增殖,从而达到抑制肿瘤发生与发展的目的... 详细信息

背景与目的:多效生长因子(pleiotrophin,Ptn)基因是一种分泌性的生长因子,具有促进肿瘤细胞的增殖与迁移及肿瘤血管的生成等功能。有研究表明,抑制该基因的表达,就能够有效地控制肿瘤细胞的过度增殖,从而达到抑制肿瘤发生与发展的目的。本研究旨在合成一种能够有效抑制该基因表达的小干扰RNA。方法:(1)设计并合成具有基因特异性的一组寡核苷酸片段,并克隆到pSilencerTM3.1-H1hygro载体;(2)瞬时转染siRNA表达载体至3T3细胞,以检测不同siRNA对Ptn基因表达的抑制能力;(3)用脂质体Lipofectamine2000转染和潮霉素筛选等方法建立能稳定表达相应PtnsiRNAs的一组PTEN-/-MEF241细胞株,并对其Ptn的表达水平进行检测;(4)利用细胞生长曲线检测沉默Ptn基因对PTEN-/-MEF241细胞生长的影响;(5)裸鼠成瘤实验观察Ptn基因沉默后,PTEN-/-MEF241细胞致瘤特性的改变。结果:设计并合成了3条针对Ptn基因的siRNAs,并证实其中的1条小干扰RNA,即PtnsiRNA-B能显著地抑制PTEN-/-MEF241细胞中Ptn基因的表达,抑制效率达到95%以上;同时能使PTEN-/-MEF241的生长速度明显减慢;接种裸鼠后成瘤率仅为1/8,而对照组的成瘤率为5/8,发生肿瘤的潜伏期超过90天,而对照组为30天左右,可见裸鼠成瘤率被显著抑制,发生肿瘤的潜伏期大大延长。结论:本研究设计并合成的针对Ptn基因的小干扰RNA,即PtnsiRNA-B能够抑制PTEN-/-MEF241细胞增殖,降低PTEN-/-MEF241细胞的致瘤性,因此可能成为一种新型的肿瘤基因治疗药物。

关键词：小干扰RNA 多效生长因子肿瘤基因治疗

H2O2及PTEN在肽类生长因子活化Akt激酶中的作用

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解放军医学杂志 2008年第6期33卷 658-660页

作者：杨柳霍艳英胡迎春付春玲李刚米粲吴德昌北京军事医学科学院放射医学研究所 100850 重庆医科大学病理教研室

目的研究H2O2、PTEN与肽类生长因子(胰岛素等)在调控Akt激酶活性中的作用及其相互关系。方法Western Blot检测对照小鼠胚胎成纤维细胞PTEN+/+ MEFs和PTEN基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞PTEN-/-MEFs中PTEN蛋白表达的差异。用胰岛素及NADPH... 详细信息

目的研究H2O2、PTEN与肽类生长因子(胰岛素等)在调控Akt激酶活性中的作用及其相互关系。方法Western Blot检测对照小鼠胚胎成纤维细胞PTEN+/+ MEFs和PTEN基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞PTEN-/-MEFs中PTEN蛋白表达的差异。用胰岛素及NADPH氧化酶(NOX)抑制剂——DPI作用PTEN+/+M EFs和PTEN-/-MEFs细胞,Western Blot检测Akt激酶蛋白磷酸化水平的变化。将细胞接种于96孔板,加入胰岛素及DPI,96h后MTT法检测细胞增殖的变化。结果在对照PTEN+/+ MEFs细胞内,加入胰岛素(100mU/ml)15min后Akt激酶磷酸化水平明显上调,加入10μmol/LDPI处理30min后,Akt激酶磷酸化恢复到基础水平,在PTEN-/-MEFs细胞中未观察到上述变化。经胰岛素作用后PTEN+/+ MEFs细胞增殖加快(P0.05);各种处理因素对PTEN-/-MEFs细胞增殖均无明显影响(P均>0.05)。结论肽类生长因子可以通过磷酸化激活Akt激酶,这一过程依赖于H2O2的产生和抑癌基因PTEN的存在。

关键词：肽类生长因子胰岛素过氧化氢 DPI PTEN Akt激酶

基因芯片技术分析siRNA抑制多效生长因子表达后Pten^(-/-)MEF241细胞基因表达谱的变化

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军事医学科学院院刊 2007年第5期31卷 405-410页

作者：胡迎春周乔丹张博杨柳宋博强李刚吴德昌霍艳英军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 重庆医科大学病理学教研室重庆400016 军事医学科学院附属307医院北京100071

目的:应用基因芯片技术,分析siRNA抑制Pleiotrophin基因表达后,Pten-/-MEF241细胞基因表达谱的变化。方法:选用Agilent公司的小鼠oligo芯片,分别提取siRNA抑制Pleiotrophin基因表达前后Pten-/-MEF241细胞的RNA,反转成cDNA,进一步荧光标记后进行芯片杂交,杂交结果经扫描及软件分析,最后Ration值为cy3/cy5(即实验组/对照组)。差异基因筛选标准为正标Ratio(Cy3/Cy5)≥2同时反标Ratio(Cy3/Cy5)≤0.5。部分上调及下调基因的表达水平用RT-PCR及Northern杂交进行了验证。结果:siRNA介导Pleiotrophin基因沉默后,表达上调2倍以上的基因有240个,下调0.5倍以上的基因有129个。其中,上调10倍以上的基因有与DDK综合征相关的Schlafen家族成员Slfn2、3、4,基质蛋白金属酶Mmp3、10、13,白介素IL-1a、IL-f6等;下调5倍以上的基因有钙结合蛋白S100a8、视黄醇结合蛋白Rbp4、二肽酶Dpep1等。RT-PCR及Northern杂交验证结果与芯片结果吻合。结论:应用基因表达谱芯片成功分析了RNAi抑制Pleiotrophin基因表达后Pten-/-MEF241细胞基因表达谱的变化,挑选并鉴定出一批有意义的基因,为后续的深入研究提供了基础。

关键词：寡核苷酸序列分析基因表达基质金属蛋白酶逆转录聚合酶链反应

靶向腺病毒载体介导的EGFP基因在甲胎蛋白阳性肝癌细胞的特异表达

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中国病理生理杂志 2005年第1期21卷 159-162页

作者：石毓君刘长安龚建平李旭宏彭勇梅英米粲霍艳英重庆医科大学附属第二医院肝胆外科重庆400010 重庆医科大学病理学教研室重庆400016 解放军军事医学科学院放射医学研究所北京100850

目的建立一种在甲胎蛋白(AFP)阳性的肝癌细胞中靶向表达目的基因的重组腺病毒载体。方法基于腺病毒载体Adeno-XTMExpressionsystem,以300bpAFP特异启动子替换穿梭质粒Pshuttle中CMV启动子,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因作为报告基因... 详细信息

目的建立一种在甲胎蛋白(AFP)阳性的肝癌细胞中靶向表达目的基因的重组腺病毒载体。方法基于腺病毒载体Adeno-XTMExpressionsystem,以300bpAFP特异启动子替换穿梭质粒Pshuttle中CMV启动子,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因作为报告基因亚克隆至Pshuttle,HEK293细胞包装腺病毒,收集病毒后分别转染人正常肝脏LO2细胞,人肝癌HepG2细胞及HeLa细胞;通过Northern杂交检测EGFP基因在3种细胞中的转录水平,荧光显微镜下观察3种细胞中绿色荧光蛋白的表达。结果Northern杂交显示,HepG2细胞中有大量EGFP基因的转录,而正常肝细胞LO2和HeLa细胞中仅能检测到微量基因的转录;荧光显微镜检测发现HepG2细胞内有强绿色荧光表达,而在LO2以及HeLa细胞内见极弱绿色荧光。结论在AFP特异启动子作用下,腺病毒携带的目的基因在AFP阳性的肝癌细胞中得到显著转录和表达,而在非AFP阳性细胞仅微量转录,蛋白表达极弱。该腺病毒载体可作为AFP阳性的肝癌基因靶向治疗的适宜载体。

关键词：甲胎蛋白类启动区(遗传学) 腺病毒载体 HepG2细胞