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肝癌候选标志物HCCR单克隆抗体的制备和鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第10期27卷 1094-1097,1102页

作者：刘保才霍景瑞刘英富范国才王清明军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心北京102206

目的:制备肝癌候选标志物HCCR蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:重组表达HCCR-1167-360蛋白用于动物免疫,用含有HCCR蛋白抗原表位YLGTRR的重组蛋白(Ep-HCCR)检测血清抗体效价及筛选阳性克隆。通过ELISA、Western blot、免疫荧光和免疫组化... 详细信息

目的:制备肝癌候选标志物HCCR蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:重组表达HCCR-1167-360蛋白用于动物免疫,用含有HCCR蛋白抗原表位YLGTRR的重组蛋白(Ep-HCCR)检测血清抗体效价及筛选阳性克隆。通过ELISA、Western blot、免疫荧光和免疫组化方法鉴定制备的HCCR抗体的性质。结果:获得1株分泌HCCR抗体杂交瘤细胞株,通过ELISA方法测定抗体的亲和力常数为5.4×106L/mol;Western blot结果显示,该抗体能特异识别肝癌HepG2细胞中HC-CR-1和HCCR-2蛋白;免疫荧光检测显示,HCCR蛋白主要分布在细胞质和细胞膜中;免疫组化检测到肝癌组织中有HCCR蛋白表达但在正常组织中没有。结论:成功制备了1株抗HCCR特异性mAb,为建立基于HCCR的肝癌检测方法奠定了基础。

关键词：肝癌 HCCR 单克隆抗体

肝癌相关抗原的扩增及肝癌相关蛋白的抗体制备

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肝癌相关抗原的扩增及肝癌相关蛋白的抗体制备

作者：霍景瑞中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我国第二大恶性致死肿瘤,其发病率和死亡率有逐年上升的趋势。肝癌的发病十分隐匿,导致发现晚,预后差。提高肝癌患者存活率的重要措施就是“早发现、早诊断、早治疗”。目前,国内外大量文献... 详细信息

原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我国第二大恶性致死肿瘤,其发病率和死亡率有逐年上升的趋势。肝癌的发病十分隐匿,导致发现晚,预后差。提高肝癌患者存活率的重要措施就是“早发现、早诊断、早治疗”。目前,国内外大量文献中,均涌现出很多肝癌诊断标志物。为了开展肝癌的免疫诊断和治疗,我们根据现有的文献调研,选择了11中肝癌相关标志物,有目的的从不同的癌细胞中成功克隆了11种各种基因的cDNA,他们分别是MAGEA1、MAGEA2、MAGEA6、MAGEA10、GPC3、GP73、HCA519、HCA661、CTp11、TPTE和PTEN。其中MAGEA1和MAGEA10在我国肝癌患者中的有较高的表达比率,分别为66%和36.7%,是最有可能的肝癌疫苗候选分子。GPC3和GP73是目前最有希望的肝癌诊断候选标志物,并且与AFP的表达并无相关性,可与APF联合应用以提高肝癌的诊断率。HCA519和HCA661是wang等人利用重组cDNA表达文库血清学分析(SEREX)技术筛选到的两种肝癌相关抗原,其中HCA519高表达于肝癌细胞,在前列腺癌、肺癌和胰腺中也有表达,但在正常组织中不表达,是一种核增殖相关的蛋白,仅存在于处于细胞周期的细胞中;HCA661主要表达于睾丸组织,在正常的胰腺中有弱表达,但在其他正常组织中无表达,应属于癌睾抗原,有可能成为候选疫苗,但由于在胰腺中有弱表达,因此,基于HCA661设计的治疗性疫苗应首先考察其对胰腺的毒性。CTp11首先被发现表达于黑色素瘤细胞中,该抗原在肝癌中的表达率高达62.9%,存在潜在的HLA-A2限制性CTL表位,而HLA-A2在亚洲人中的表达率可能超过50%,因此,CTp11也是一种可用于肝癌免疫治疗的候选分子。TPTE1在肝癌患者中的表达率为39%,而肝癌患者血清中存在TPTE1抗体的阳性率达到25%,因此,TPTE1有可能用于肝癌的筛查。PTEN是一种肿瘤抑制基因,在肝癌中表达降低。PTEN正常表达可能对于抑制肿瘤的浸润和迁移具有重要意义,因此,PTEN可用于基因治疗肝癌及其他肿瘤。 GPC3是一种新的肝癌标志物,其表达与AFP无相关性。为开展肝癌症的免疫诊断研究,我们在克隆了GPC3 cDNA的基础上,表达并纯化了人血清中可溶性GPC3。可溶性GPC3是GPC3蛋白在358-359位氨基酸残基之间断裂后产生的N端部分释放到血液中的。用纯化的可溶性GPC3免疫小鼠,在血清抗体效价达到1:106后,通过细胞融合技术,将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA法筛选阳性克隆,并采用有限稀释法对阳性克隆进行传代,最终得到了两株能稳定分泌鼠抗人可溶性GPC3蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞D1和G6。经鉴定,D1和G6均为IgG1亚类抗体,两株抗体均具有较好的特异性和亲和力,但D1的亲和力更高,可以检测到10 ng/mL的可溶性GPC3,而G6仅能检测到10μg/mL的可溶性GPC3。通过ELISA叠加实验证明,D1和G6识别GPC3不同的抗原表位,可以作为配对抗体用于夹心ELISA以检测病人血清中的可溶性GPC3。另外,通过免疫荧光实验证明,D1和G6能够识别细胞表面表达的GPC3,这表明D1和G6抗体可以用于免疫荧光实验研究。 HCCR是另外一种较理想的肝癌诊断标志物,是韩国Ko等通过差异显示RT-PCR从人宫颈癌组织中克隆的一种新的肿瘤相关基因。在肝癌患者血清中,HCCR蛋白含量升高,而在正常人和良性肝病患者的血清中HCCR含量很低。由于前期我们并未能够克隆出HCCR的cDNA,所以,我们采用了另外一种策略制备HCCR的抗体。一般蛋白质的C末端肽具有较好的可及性,常常成为蛋白质的抗原表位。HCCR的C末端八肽(TNYLGTRR)具有较好的亲水性,并且经过比对发现HCCR的C末端八肽在人蛋白质库中具有唯一性,可以作为HCCR蛋白的特异性标签。基于此,我们将HCCR的C末端八肽展示于T7噬菌体表面,每个噬菌体表面展示有415个小肽,用这种重组噬菌体作为HCCR抗原的替代抗原免疫兔,经过四次免疫后,血清抗体效价均达1:105。其中1号兔免疫血清特异性很好,能够特异性识别HCCR的C末端小肽和HCCR167-360蛋白,但2号兔免疫血清的特异性很差,除能够结合HCCR的C末端小肽外,与其他无关蛋白和小肽也有反应,这可能与免疫动物的个体差异有关。 Hepatopoietin Cn (HPPCn)是一种新的肝增殖刺激因子,是从小牛肝刺激物(hepatic stimulatory substance,HSS)中分离出来的,属于LANP(leucine-rich acidic nuclear protein, LANP)家族。HPPCn在肝再生过程中发挥着重要作用,它不仅能够激活肝细胞增殖相关的信号通路,刺激肝细胞DNA合成,而且能够缓解CCl4引起的肝

关键词：肝癌相关抗原单克隆抗体噬菌体展示技术特异性亲和力

金融科技能够降低银行风险承担吗?——基于银行成立金融科技子公司的多期DID检验

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统计研究 2024年第5期41卷 64-74页

作者：晏景瑞朱诗怡广州大学创新创业学院清华大学五道口金融学院

金融科技是金融行业实现数字化转型的重要渠道,银行风险控制在合理区间是金融安全的重要保障。本文分别从银行存款端和贷款端视角出发,构建存贷收益模型理论探究金融科技通过赋能商业银行缓解存款端“获客难”和贷款端“风控难”问题。... 详细信息

金融科技是金融行业实现数字化转型的重要渠道,银行风险控制在合理区间是金融安全的重要保障。本文分别从银行存款端和贷款端视角出发,构建存贷收益模型理论探究金融科技通过赋能商业银行缓解存款端“获客难”和贷款端“风控难”问题。同时,本文以“银行是否成立金融科技子公司”来评价银行金融科技发展水平,采用倾向得分匹配(PSM)、双重差分(DID)方法检验商业银行发展金融科技对其风险承担水平的影响,并进一步实证检验中介传导机制。研究表明,商业银行发展金融科技能显著降低其风险承担水平,且主要通过降低资金“入口”成本和改善资金“出口”结构两条路径。本文研究结论不仅为商业银行发展金融科技提供理论支撑,而且为完善银行风险防范提供政策启示。

关键词：金融科技银行风险承担 PSM-DID 中介模型

金融科技对银行风险承担的“双刃剑”影响——基于宏观审慎监管的调节作用

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当代经济管理 2024年第5期46卷 84-96页

作者：朱诗怡晏景瑞清华大学五道口金融学院北京100084 广州大学创新创业学院广东广州510006

稳妥发展金融科技,加速实现商业银行数字化转型,已成为现阶段及未来一段时间金融供给侧结构性改革的核心内容。基于金融科技的“赋能”效应和“挤出”效应,考察了宏观审慎监管下金融科技对银行风险承担的影响机制。研究发现:商业银行发... 详细信息

稳妥发展金融科技,加速实现商业银行数字化转型,已成为现阶段及未来一段时间金融供给侧结构性改革的核心内容。基于金融科技的“赋能”效应和“挤出”效应,考察了宏观审慎监管下金融科技对银行风险承担的影响机制。研究发现:商业银行发展金融科技整体上能降低银行风险承担,但贷款结构调整、银行竞争程度分别在金融科技影响银行风险承担的过程中发挥着竞争性的间接作用,此外,宏观审慎监管对金融科技“赋能”效应有正向调节作用,而对金融科技“挤出”效应有反向调节作用。研究从银行成立金融科技子公司的视角出发,为商业银行发展金融科技和监管部门制定宏观审慎监管政策提供了理论探讨和经验证据。

关键词：金融科技银行风险承担 “双刃剑”影响宏观审慎监管

INT对高校男子足球队员身体素质及运动表现的影响研究

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INT对高校男子足球队员身体素质及运动表现的影响研究

作者：赵景瑞河北科技师范学院

学位级别：硕士

研究目的:本研究通过探讨INT对于高校男子足球队员的身体素质和运动表现的影响效果,希望为未来从事高校体育教学的教育工作者提供新的训练思路和训练方法,同时也为未来高校足球训练工作提供新的训练模式和训练方案。研究方法:选取某高... 详细信息

研究目的:本研究通过探讨INT对于高校男子足球队员的身体素质和运动表现的影响效果,希望为未来从事高校体育教学的教育工作者提供新的训练思路和训练方法,同时也为未来高校足球训练工作提供新的训练模式和训练方案。研究方法:选取某高校男子足球队16名队员作为实验研究对象,通过随机分组为实验组和对照组两组,每组各8名。两组的受训条件场地相同,实验组进行为期12周,每周3次(每周一三五)的INT,对照组则进行为期12周,每周3次(每周二四六)的常规足球训练。在经过12周的训练后,集中统一测试两组的身体素质和足球运动表现。身体素质指标包括:立定跳远、50m跑、1000m、坐位体前屈、箭头跑-左/右和十字象限跳。运动表现指标包括:定点踢远、AFL(有球)测试和YO-YO测试。采用SPSS26.0软件对两组实验数据进行分析处理。研究结果:研究结果表明,经过12周的INT和常规足球训练,两组的身体素质和足球运动表现均出现不同程度的变化。(1)在身体素质指标方面,实验组在立定跳远、50m跑、1000m、箭头跑-左/右和十字象限跳的前后测成绩存在显著性差异(P0.05);对照组经过12周的常规训练后,对比坐位体前屈的前测和后测也不存在显著性差异(P>0.05)。两组的后测结果同样也不存在显著性差异(P>0.05),但两组的坐位体前屈均有不同程度的提高,说明INT和常规足球训练对于坐位体前屈的提升效果不存在显著性差异,但均有一定提高。(3)在运动表现指标方面,实验组在定点踢远、AFL(有球)测试和YOYO测试上的前后测成绩存在显著性差异(P<0.05);对照组在定点踢远、AFL(有球)测试和YO-YO测试上的前后测成绩存在显著性差异(P<0.05)。两组的后测成绩对比也存在显著性差异(P<0.05),但实验组的成绩增长率相较于对照组的增长率更高,说明INT在足球运动表现的训练效果更好。研究结论:(1)INT和常规足球训练对于高校男子足球队员身体素质都具有不同程度的提升,与常规足球训练相比,INT对于力量、速度、耐力、灵敏和协调的提升效果更好,且在运动员身体素质方面相较于常规足球训练的提升效果存在显著性差异。(2)INT和常规足球训练对于高校男子足球队员运动表现都具有不同程度的提升,与常规足球训练相比,INT对于运动员在比赛中结合球的能力的提升效果更好,且在运动员运动表现方面相较于常规足球训练的提升效果存在显著性差异。(3)在柔韧素质方面,对比实验前后,INT和常规足球训练对于柔韧素质都有提高但是效果不明显,对比实验组和对照组,INT和常规足球训练在柔韧素质的提高效果不存在显著性差异。

关键词： INT 身体素质运动表现男子足球

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基于抗原表位制备抗人GP73单克隆抗体

细胞与分子免疫学杂志 2010年第7期26卷 663-666页

作者：姚西宁霍景瑞刘英富刘保才吴峰范国才王清明蛋白质组学国家重点实验室军事医学科学院放射与辐射医学研究所

目的：制备抗GP73蛋白的单克隆抗体（mAb）。方法：将GW／3蛋白N末端的肽段（AAAERGAVELK）展示于T7噬菌体表面，扩增重组噬菌体作为抗原免疫小鼠，制备抗体。通过ELISA法检测小鼠血清抗体的效价，筛选分泌抗GP73蛋白抗体的杂交瘤细胞... 详细信息

目的：制备抗GP73蛋白的单克隆抗体（mAb）。方法：将GW／3蛋白N末端的肽段（AAAERGAVELK）展示于T7噬菌体表面，扩增重组噬菌体作为抗原免疫小鼠，制备抗体。通过ELISA法检测小鼠血清抗体的效价，筛选分泌抗GP73蛋白抗体的杂交瘤细胞株；通过ELISA、Western blot等方法检测mAb的特异性。结果：利用表面展示GP73抗原表位的重组噬菌体为抗原免疫小鼠，通过细胞融合和筛选得到了能识别GP73蛋白的mAb，且特异性较好。结论：将蛋白质抗原的合适抗原表位展示在T7噬菌体表面，用这种重组噬菌体作为替代抗原可以制备识别全蛋白的mAb。

关键词：噬菌体展示 GP73 抗原表位替代抗原

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抗人HPPCn单克隆抗体的制备及鉴定

细胞与分子免疫学杂志 2010年第8期26卷 774-776,782页

作者：霍景瑞姚西宁刘英富刘保才吴峰范国才王清明蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心军事医学科学院放射与辐射医学研究所

目的：制备高灵敏度的抗人HPPCn单克隆抗体（mAb），以用于HPPCn的功能研究及其疾病相关性研究。方法：用重组蛋白免疫雌性BALB／c小鼠，采用常规杂交瘤技术进行细胞融合，经ELISA法进行阳性克隆筛选、通过有限稀释法进行亚克隆，获得... 详细信息

目的：制备高灵敏度的抗人HPPCn单克隆抗体（mAb），以用于HPPCn的功能研究及其疾病相关性研究。方法：用重组蛋白免疫雌性BALB／c小鼠，采用常规杂交瘤技术进行细胞融合，经ELISA法进行阳性克隆筛选、通过有限稀释法进行亚克隆，获得稳定分泌抗人HPPCnmAb的细胞株。采用间接ELISA、Western blot、Ig亚类快速定性试纸分析法等鉴定抗体的生物学特性；通过细胞免疫荧光实验观察了HPPCn蛋白的细胞定位。通过噬菌体肽库技术分析抗体所识别的抗原表位。结果：得到了1株稳定分泌抗人HPPCn抗体的杂交瘤细胞株，命名为W2-D5。经Ig亚类分析确定，该细胞株分泌的抗体属于IgG1亚类。间接ELISA检测表明，该抗体检测HPPCn的极限为0．1μg／L；Western blot结果显示，该抗体能特异性识别HPPCn。细胞免疫荧光实验，证实了HPPCn蛋白定位在细胞核。通过肽库筛选及表位分析认为，该抗体识别的表位可能为HPPCn7-13（IHLELRN）。结论：成功地获得了抗人HPPCn的特异性mAb。

关键词： HPPCn 单克隆抗体效价噬菌体肽库

身份认同视域下国产励志电影的小人物形象研究

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电影文学 2024年第4期 84-87页

作者：王宏李景瑞山东师范大学新闻与传媒学院山东济南250358

以《海洋天堂》《送你一朵小红花》《奇迹·笨小孩》等为代表的国产励志电影通过展演现实社会中小人物的悲喜故事,演绎出了普通小人物在大城市中生活的酸甜苦辣,挖掘出了普通小人物身上的人性之美。该类型影片在小人物的“自我存在”身... 详细信息

以《海洋天堂》《送你一朵小红花》《奇迹·笨小孩》等为代表的国产励志电影通过展演现实社会中小人物的悲喜故事,演绎出了普通小人物在大城市中生活的酸甜苦辣,挖掘出了普通小人物身上的人性之美。该类型影片在小人物的“自我存在”身份认同之中,进行着人性的探视与识别、励志话语间的视觉化呈现及隐喻化的形象表现,从而更好地审视小人物内在的精神品质,令我们受众感受逆境带来崇高美的同时,也在小人物温暖处事中感知了“不放弃、不抛弃”的情感。

关键词：励志电影小人物形象身份认同励志话语影像隐喻

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航空煤油多组分表征燃料碳烟生成分析

航空动力学报 2024年第2期39卷 1-8页

作者：秦文瑾孙智成邵宇景瑞雄严俊上海理工大学机械工程学院上海200093

选取航空煤油的多组分表征燃料Jet-A world average(JW),运用大涡模拟和详细化学反应机理相结合的方法对该表征燃料的碳烟生成过程进行了数值模拟,从碳烟前驱物的生成、碳烟颗粒的生成及氧化等过程进行了详细预测。结果表明:Dalian碳烟... 详细信息

选取航空煤油的多组分表征燃料Jet-A world average(JW),运用大涡模拟和详细化学反应机理相结合的方法对该表征燃料的碳烟生成过程进行了数值模拟,从碳烟前驱物的生成、碳烟颗粒的生成及氧化等过程进行了详细预测。结果表明:Dalian碳烟模型可以较好地预测定容弹内多组分航空煤油表征燃料射流燃烧的碳烟的生长特性;对于描述碳烟生成的特征量,碳烟质量的增长略微滞后于颗粒数密度的增长;碳烟空间分布主要与当量比和温度的分布相关。当量比越小且温度越高的区域,碳烟生成量则越小。

关键词：航空煤油多组分表征燃料大涡模拟定容弹碳烟