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石河子地区奶牛临床型乳腺炎源葡萄球菌的分离鉴定与药敏试验

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黑龙江畜牧兽医 2023年第12期 92-96,146,147页

作者：刘荣慧寇茜茜张伟史超于海涛霍明凯王震张辉石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

为了解新疆石河子地区奶牛临床型乳腺炎源葡萄球菌的耐药情况,试验采用选择培养基对来自石河子地区规模化奶牛场患临床型乳腺炎奶牛乳样中的葡萄球菌进行分离,并对分离菌进行革兰氏染色观察、生化鉴定、16S rDNA基因PCR鉴定和药敏试验... 详细信息

为了解新疆石河子地区奶牛临床型乳腺炎源葡萄球菌的耐药情况,试验采用选择培养基对来自石河子地区规模化奶牛场患临床型乳腺炎奶牛乳样中的葡萄球菌进行分离,并对分离菌进行革兰氏染色观察、生化鉴定、16S rDNA基因PCR鉴定和药敏试验。结果表明:革兰氏染色观察到两种形态的葡萄球菌疑似菌,经生化鉴定及16S rDNA基因PCR鉴定确定分离到1株金黄色葡萄球菌和1株产色葡萄球菌,分别命名为金黄色葡萄球菌sau raw milk China和产色葡萄球菌sch raw milk China;其中金黄色葡萄球菌sau raw milk China对氨苄西林、庆大霉素、卡那霉素和复方新诺明耐药,对青霉素G、环丙沙星、氟哌酸中介,对头孢噻吩、红霉素、克林霉素、四环素和氧氟沙星敏感;而产色葡萄球菌sch raw milk China对红霉素中介,对其他11种药物敏感。说明金黄色葡萄球菌和产色葡萄球菌可能是石河子地区奶牛临床型乳腺炎的主要病原菌,且对临床常用抗生素具有一定的敏感性。

关键词：石河子地区奶牛临床型乳腺炎葡萄球菌分离鉴定药敏试验

DDX1影响猪流行性腹泻病毒复制的机制研究

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中国畜牧兽医 2023年第4期50卷 1556-1566页

作者：霍明凯关飞虎邱润辉魏春燕于海涛朱嘉乐张辉石河子大学动物科技学院石河子832000 新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室石河子832000 动物健康养殖国家国际联合研究中心石河子832000

【目的】探究RNA解旋酶DEAD-box家族蛋白DDX1在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染猪回肠上皮细胞(IPI-2I)期间发挥的作用,为揭示DDX1的生物学功能奠定基础。【方法】参照GenBank中猪源DDX 1基因序列(登录号:X... 详细信息

【目的】探究RNA解旋酶DEAD-box家族蛋白DDX1在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染猪回肠上皮细胞(IPI-2I)期间发挥的作用,为揭示DDX1的生物学功能奠定基础。【方法】参照GenBank中猪源DDX 1基因序列(登录号:XM_021087822.1),设计特异性引物PCR扩增DDX 1基因全长并连接至pMD19-T克隆载体,双酶切鉴定成功后连接至pcDNA3.1表达载体;连接产物转化后筛选阳性菌落;培养IPI-2I细胞,取传代2次的细胞铺于6孔板内进行后续试验,将阳性菌落的重组质粒转染至6孔板培养24 h后收集蛋白质,Western blotting检测DDX1转染效率;以感染复数(MOI)为1.0的PEDV感染已转染pcDNA3.1-DDX1或PBS(对照)的IPI-2I细胞,建立PEDV感染细胞模型,PEDV感染12 h后分别收集细胞总蛋白质和RNA;间接免疫荧光试验检测细胞水平上PEDV N蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测PEDV N基因mRNA表达水平,Western blotting检测PEDV N蛋白的表达水平;使用生物信息学软件预测DDX1蛋白的磷酸化位点;免疫沉淀试验检测PEDV感染IPI-2I细胞12 h后DDX1的磷酸化水平。【结果】PCR成功扩增得到大小为2223 bp的DDX 1目的基因条带。双酶切鉴定结果显示,成功构建pMD19-T-DDX1克隆载体和pcDNA3.1-DDX1真核表达载体。与PBS组相比,转染pcDNA3.1-DDX1的细胞DDX1蛋白表达水平极显著上升(P<0.01),表明DDX1转染成功。间接免疫荧光试验结果显示,与PBS组相比,PEDV感染组中出现大量绿色荧光信号,表明PEDV感染IPI-2I细胞模型构建成功;与PBS组相比,PEDV N蛋白的荧光信号明显减少,PEDV N基因mRNA表达水平及蛋白表达水平均极显著降低(P<0.01)。生物信息学分析发现,DDX1蛋白具有多个磷酸化位点,其中包括17个丝氨酸、12个苏氨酸及6个酪氨酸。免疫沉淀试验结果显示,与未感染组相比,PEDV感染组中DDX1磷酸化水平极显著上升(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了pcDNA3.1-DDX1真核表达载体,发现PEDV感染IPI-2I细胞12 h后,DDX1抑制了PEDV的复制,升高了磷酸化水平,说明DDX1在PEDV感染期间可能通过磷酸化抑制PEDV的复制。

关键词： DDX1 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 磷酸化

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鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr)的生物信息学分析及原核表达载体构建

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黑龙江畜牧兽医 2024年第7期 81-89页

作者：张伟史超于海涛霍明凯魏春燕黄炜涵周霞王震张辉石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室新疆石河子832003

为了获得高纯度的鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr),试验利用生物信息学软件对Bfr的结构、翻译后修饰和抗原表位等进行预测分析;通过PCR扩增鼠伤寒沙门氏菌Bfr基因,将其与pET-32a(+)载体连接并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过SD... 详细信息

为了获得高纯度的鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr),试验利用生物信息学软件对Bfr的结构、翻译后修饰和抗原表位等进行预测分析;通过PCR扩增鼠伤寒沙门氏菌Bfr基因,将其与pET-32a(+)载体连接并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过SDS-PAGE分析和Western-blot检测表达及纯化后的目的蛋白。结果表明:Bfr由476个氨基酸组成,分子式为C_(1440)H_(2406)N_(476)O_(606)S_(85),相对分子质量为38808.87,理论等电点为5.25;无信号肽和跨膜区,二级结构包含α-螺旋(81.01%)、无规则卷曲(13.19%)、β-折叠(3.16%)和延伸链(1.90%);含有9个线性B淋巴细胞抗原表位和5个T淋巴细胞抗原表位,以及10个磷酸化位点和10个互作蛋白,Bfr和Bfrd蛋白表面匹配良好、结合稳定。试验成功克隆出Bfr基因,其大小约为476 bp,获得大小约为35 ku的高纯度重组蛋白Bfr。说明Bfr蛋白具有良好的反应原性,有可能成为鼠伤寒沙门氏菌的疫苗开发和疾病诊断的候选蛋白。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr) 生物信息学原核表达 SDS-PAGE

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生鲜乳中海氏肠球菌的分离鉴定

中国兽医杂志 2024年第7期60卷 58-64页

作者：史超张伟刘素平寇茜茜刘荣慧于海涛霍明凯王震张辉石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室新疆石河子832003

为了解生鲜乳中是否存在肠球菌污染,本试验从石河子某奶牛场无菌采集7份生鲜乳样品,通过细菌分离纯化、生化鉴定、16S rRNA和肠球菌RNA聚合酶α亚基(rpoA)编码基因的扩增和序列分析对分离菌株进行菌种鉴定,并利用纸片扩散法药敏试验和... 详细信息

为了解生鲜乳中是否存在肠球菌污染,本试验从石河子某奶牛场无菌采集7份生鲜乳样品,通过细菌分离纯化、生化鉴定、16S rRNA和肠球菌RNA聚合酶α亚基(rpoA)编码基因的扩增和序列分析对分离菌株进行菌种鉴定,并利用纸片扩散法药敏试验和小鼠致病性试验确定分离菌株的药物敏感性和致病性。结果显示,从生鲜乳中分离到1株细菌,其培养特性和生化特性与肠球菌相似,16S rRNA基因测序结果显示其为肠球菌,rpoA基因测序结果显示其分子特征符合海氏肠球菌;药敏试验结果显示,分离海氏肠球菌对氨基糖苷类、林可胺类、磺胺类和多肽类药物表现一定的耐药性,而对四环素类、β-内酰胺类和部分喹诺酮类药物具有不同程度的敏感性;小鼠致病性试验结果显示,该菌株具有一定的致病性。本试验基于生鲜乳中海氏肠球菌的分离鉴定、耐药性和致病性分析,初步说明该牛场乳品中存在肠球菌污染的风险,且分离菌株具有一定耐药性和致病性,因此需在日常生产加工环节加强监测。

关键词：生鲜乳海氏肠球菌 rpoA基因耐药性致病性

布鲁氏菌分泌蛋白BMCO基因缺失株的构建及生物学特性研究

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中国畜牧兽医 2022年第5期49卷 1630-1640页

作者：邱润辉关飞虎王梓行郭嘉朱德馨张伟魏春燕霍明凯孙志华张辉石河子大学动物科技学院石河子832000 新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室石河子832000 动物健康养殖国家国际联合研究中心石河子832000

【目的】试验旨在构建牛种布鲁氏菌S2308的多铜氧化酶(BMCO)基因缺失株,探究缺失株的生长特性及在宿主细胞中的存活能力,并分析BMCO蛋白的结构。【方法】利用PCR扩增BMCO基因上、下游同源臂和Kan基因,通过融合PCR技术将3段基因进行融合... 详细信息

【目的】试验旨在构建牛种布鲁氏菌S2308的多铜氧化酶(BMCO)基因缺失株,探究缺失株的生长特性及在宿主细胞中的存活能力,并分析BMCO蛋白的结构。【方法】利用PCR扩增BMCO基因上、下游同源臂和Kan基因,通过融合PCR技术将3段基因进行融合。融合片段与pMD19-T载体连接,制作牛布鲁氏菌S2308感受态细胞,1800 V电压、400Ω电阻电转化至牛种布鲁氏菌S2308感受态细胞中,涂布于Kan抗性的布鲁氏菌固体培养基中,筛选挑取阳性菌落,连续培养10代,检测第10代阳性菌落的遗传稳定性和生长变化趋势,将pBBR1MCS-4-BMCO融合质粒电转至能够稳定遗传BMCO基因缺失的牛种布鲁氏菌中,培养筛选阳性菌落。以感染复数(MOI)100分别用亲本株、缺失株、回补株侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,通过平板计数法分别检测3种菌株在细胞内的生存能力。【结果】试验成功获得片段大小为522、539、1054 bp的BMCO基因上、下游同源臂和Kan基因;成功构建pMD19-T-BMCO-Kan融合片段重组载体;获得稳定遗传的BMCO基因缺失株,命名为S2308ΔBMCO;成功构建BMCO基因回补株,命名为ΔBMCO::BMCOS2308;缺失株和亲本株表现的生长曲线相同,均在12 h达到对数生长期,30 h进入平台期;侵染小鼠巨噬细胞RWA264.7后,与亲本株S2308相比,S2308ΔBMCO株在胞内的生存能力极显著降低(P<0.01)。生物信息学分析结果表明,BMCO属于疏水蛋白,定位于胞质且含有大量的无规则卷曲、α-螺旋和延伸链,预示该蛋白具有多个结合位点。【结论】本研究成功构建了布鲁氏菌BMCO基因的缺失株和回补株,BMCO基因的缺失不影响其生长性能,但其在宿主细胞内的存活能力显著性降低,初步分析了BMCO蛋白的结构,为后续布鲁氏菌分泌蛋白的功能研究奠定基础。

关键词：布鲁氏菌 BMCO基因缺失株生长曲线胞内生存

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多黏菌素耐药mcr基因的研究进展

黑龙江畜牧兽医 2023年第19期 29-36页

作者：曹兴旺李益涛徐道元付祥益宁何欣陈扬田美卉王超丽霍明凯肖陈城李亚玲石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 石河子兽医协会新疆石河子832000

多黏菌素是治疗多重耐药革兰氏阴性菌感染的“最后一道防线”,然而质粒介导的多黏菌素抗性基因mcr-1及其变异体在全球传播,给畜牧业健康发展和人类公共卫生安全带来了严重挑战。文章综述了mcr-1基因的发现、结构和流行情况,mcr-1基因变... 详细信息

多黏菌素是治疗多重耐药革兰氏阴性菌感染的“最后一道防线”,然而质粒介导的多黏菌素抗性基因mcr-1及其变异体在全球传播,给畜牧业健康发展和人类公共卫生安全带来了严重挑战。文章综述了mcr-1基因的发现、结构和流行情况,mcr-1基因变异体、流行特征以及防治策略等的研究进展,以期为相关科研人员和临床工作者提供参考,共同应对抗生素耐药日益严峻的局面。

关键词： mcr-1基因多黏菌素耐药性肠杆菌科质粒

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高层建筑的近地空间与城市空间的整合

规划师 2003年第1期19卷 58-58页

作者：霍明凯建筑学专业2000级

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教师教材观：新教材使用效能提升的重要支点

内蒙古社会科学 2025年第1期 197-204页

作者：张铭凯程姣姣西南大学西南民族教育与心理研究中心西南大学教育学部

教师教材观是教师对教材的根本性认识、立场和理念的内生性生成与衍射式呈现，直接影响着实践场域的教材运作及其效能提升。促进与新课程标准相适配的新教材价值实现，要把教师教材观作为重要视点和关键保障。回顾已有教师教材观可知，... 详细信息

教师教材观是教师对教材的根本性认识、立场和理念的内生性生成与衍射式呈现，直接影响着实践场域的教材运作及其效能提升。促进与新课程标准相适配的新教材价值实现，要把教师教材观作为重要视点和关键保障。回顾已有教师教材观可知，其主要表征为基于“我者”立场、“他者”立场和“交互”立场三种核心价值意识，这是推进教师新教材观重塑的前提性认识。而教师是教材使用中最关键的主体，教师教材观贯穿教材使用的全过程且孕育着教材的实践品格，这正是教师教材观影响教材的使用效能的价值机理。由此来看，提升新教材使用效能特别需要教师审慎理解教材变革、科学推进教材实践、自觉展开教材反思，由此塑造与新教材相适配的教师教材观。具体而言，可以从唤起教师对新教材使用的使命感、强化教师新教材使用的适应性测度、展开常态化教材使用的增值性引领、激活数智技术对教材使用的潜能和谋求教材创新使用的广泛性共识五个方面，探寻认知觉醒、过程监测、行动跟进、技术赋能和协同支持的教师教材观更新路向，最终以恰切、适配、有效的教师教材观保障新教材使用效能的不断提升和价值的稳步实现。

关键词：新课程标准新教材教师教材观教材使用效能立德树人

基于WOA优化FNN-PID的单晶硅加热炉炉温控制

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半导体技术 2025年第1期50卷 86-94页

作者：周佳凯张洪江南大学机械工程学院江苏无锡214000 江苏省食品先进制造装备技术重点实验室江苏无锡易214000

针对单晶硅加热炉炉温控制的大惯性、强耦合、长调节时间等问题,提出了基于鲸鱼优化算法(WOA)的优化模糊神经网络(FNN)比例-积分-微分(PID)算法。通过测试实验装置的温度推算出模型表达式,采用WOA进行选代寻优,得到合适的PID参数,利用FN... 详细信息

针对单晶硅加热炉炉温控制的大惯性、强耦合、长调节时间等问题,提出了基于鲸鱼优化算法(WOA)的优化模糊神经网络(FNN)比例-积分-微分(PID)算法。通过测试实验装置的温度推算出模型表达式,采用WOA进行选代寻优,得到合适的PID参数,利用FNN对PID参数进行实时调整,以实现动态解耦。通过仿真软件进行仿真验证,并在搭建的模型上分别进行阶跃响应实验和信号跟随实验。仿真结果表明,相较于传统的PID算法和FNN-PID算法,基于WOA的优化FNN-PID算法有效提升了系统的升温速度且无超调。对加热炉进行升温实验,结果表明温度超调量最高为0.9℃,恒温区温控精度保持在±0.3℃,表明该方法可有效提升系统升温速度和稳定性。

关键词：多温区温度控制鲸鱼优化算法(WOA) 模糊神经网络(FNN) 比例-积分-微分(PID) 单晶硅加热炉