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htert启动子特异性诱导端粒酶逆转录酶siRNA对HeLa细胞生长的抑制作用

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htert启动子特异性诱导端粒酶逆转录酶siRNA对HeLa细胞生长的抑制...

作者：栾雪晶天津医科大学

学位级别：硕士

研究背景和目的 RNA干扰(RNA interference, RNAi)是由dsRNA介导的特异性基因沉默现象,能快速便捷的对基因的功能进行分析。它能在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。RNAi作为一种强大的基因沉默技术,具有高效性和高特... 详细信息

研究背景和目的 RNA干扰(RNA interference, RNAi)是由dsRNA介导的特异性基因沉默现象,能快速便捷的对基因的功能进行分析。它能在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。RNAi作为一种强大的基因沉默技术,具有高效性和高特异性等特点。尽管RNAi已经广泛应用于基因治疗,特别是在病毒感染,肿瘤治疗和遗传性疾病等方面。但目前越来越多的研究表明RNAi可以引发脱靶效应(off-target effects),如：非靶基因的抑制,干扰素反应的激活和细胞内沉默机器的饱和。这将严重影响RNAi技术的应用前景。已经知道大约90%的人类肿瘤细胞存在端粒酶逆转录酶(hTERT human telomerase reverse transcriptase)活性,而在正常细胞中检测不到端粒酶逆转录酶的活性。因此hTERT被认为是广谱的肿瘤性标志。本课题中我们利用端粒酶逆转录酶启动子(htert promoter)的肿瘤特异性特异性建立一种特异性表达siRNA的系统,将siRNA表达局限在肿瘤细胞中,而在正常细胞中不表达。这将为RNAi的基因治疗奠定基础。我们又进一步构建了表达靶定端粒酶逆转录酶的小RNA的重组质粒,研究siRNA-telomerase对HeLa细胞生长的影响。方法构建pShuttleA-htertp-siRNA-GFP表达载体,将其转染宫颈癌细胞HeLa,通过RT-PCR方法,验证siRNA-GFP在肿瘤细胞的表达。我们又将pShuttleA-htertp-siRNA-GFP表达载体与表达绿色荧光蛋白质粒pCDNA3.1/EGFP共转染宫颈癌细胞HeLa,人胚肾细胞HEK293和人正常成纤维细胞BJ,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达量的变化。构建表达pShuttleA-htertp-siRNA-telomerase质粒,转染人宫颈癌HeLa细胞,通过软琼脂克隆形成实验和平板克隆形成实验,观察其对细胞生长的影响。结果在转染了pShuttleA-htertp-siRNA-GFP的HeLa细胞中,通过RT-PCR可以检测到大约70bp的siRNA-GFP的表达,而在转染了对照质粒的细胞中,检测不到siRNA-GFP的表达。通过荧光显微镜观察到在共转染了表达载体pShuttleA-htertp-siRNA-GFP和质粒pCDNA3.1/EGFP的HeLa细胞和HEK293细胞中荧光表达量明显下降,蛋白表达量的抑制率分别为69%和75%。而正常细胞BJ中的荧光表达量没有变化。软琼脂克隆形成实验和平板克隆形成实验表明,转染了质粒pShuttleA-htertp-siRNA-telomerase的HeLa细胞,其细胞生长明显受到抑制,抑制率为42.9%。结论我们发现构建含hTERT启动子的siRNA表达载体在肿瘤细胞中能特异性表达,并有效的发挥干扰作用,而在正常人成纤维细胞BJ中不表达。利用重组质粒pShuttleA-htertp-siRNA-telomerase封闭了HeLa细胞内hTERT的表达后,能特异性抑制细胞的生长。

关键词： RNAi脱靶效果(off-target) 端粒酶逆转录酶启动子端粒酶逆转录酶宫颈癌细胞HeLa 人胚肾细胞HEK293 人成纤维细胞BJ

全国档案查询利用服务平台建设存在问题分析与对策研究

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全国档案查询利用服务平台建设存在问题分析与对策研究

作者：加雪晶郑州大学

学位级别：硕士

当前档案工作领域面临着社会发展和公众需求变化导致的新技术应用水平和管理服务能力提升的双重压力。人工智能、大数据、云计算、物联网等新一代信息技术催生档案新技术应用推陈出新;国家治理体系和治理能力现代化战略的实施也要求加... 详细信息

当前档案工作领域面临着社会发展和公众需求变化导致的新技术应用水平和管理服务能力提升的双重压力。人工智能、大数据、云计算、物联网等新一代信息技术催生档案新技术应用推陈出新;国家治理体系和治理能力现代化战略的实施也要求加快推进档案治理体系和治理能力现代化的步伐,档案系统面临转型升级,以信息化为核心的档案管理现代化加快推进,并不断取得新的进步。李明华在全国档案局馆长会议上的工作报告中,总结2018年工作的同时,明确提出2019年将启动全国档案查询利用服务平台建设的目标和任务。全国档案查询利用服务平台的出现将大力提升档案部门的公共服务能力,提高公众查档满意度。因此,本文从问题与对策视角对全国档案查询利用服务平台建设进行研究,共分为四个部分:第一部分为绪论,介绍全国档案查询利用服务平台建设研究的选题背景、相关概念界定、国内外研究现状等。第二部分为全国档案查询利用服务平台相关建设实践总结。基于全国一体化在线政务服务平台建设的时代背景,全国档案查询利用服务平台随之出现。这一部分梳理全国一体化在线政务服务平台的发展现状,对档案领域出现的区域或行业档案查询利用服务平台的现状进行总结概括,分析相关平台的档案服务情况。第三部分是全国档案查询利用服务平台建设存在问题探讨,这一部分基于现状调查,从制度、组织、资源、技术、服务五个层面分析制约全国档案查询利用服务平台建设的因素。第四部分是全国档案查询利用服务平台建设的应对策略。提出制度标准先行规避风险、充实档案服务组织体系、建设目标导向的数字档案资源体系、多重技术策略保障档案信息安全、互联网思维创新档案服务机制五个方面的改进措施,以期促进全国档案查询利用服务平台建设迈上一个新的台阶。

关键词：全国档案查询利用服务平台档案利用档案服务

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固定床气化过程焦油生成影响因素的研究

固定床气化过程焦油生成影响因素的研究

作者：臧雪晶煤炭科学研究总院

学位级别：硕士

固定床气化作为三大主流气化技术之一,有其独特的优势,煤的固定床低焦油气化有很大的市场需求,因此,煤炭科学技术研究院有限公司正在开发低焦油固定床气化技术。本文旨在探究固定床气化焦油生成的影响因素,为后续进一步研究焦油的“抑... 详细信息

固定床气化作为三大主流气化技术之一,有其独特的优势,煤的固定床低焦油气化有很大的市场需求,因此,煤炭科学技术研究院有限公司正在开发低焦油固定床气化技术。本文旨在探究固定床气化焦油生成的影响因素,为后续进一步研究焦油的“抑制”与“原位转化”提供研究借鉴和基础支持。首先研究建立煤气化热力学模型,引入焦油模型化合物CHO,进行计算与分析,然后进行了固定床气化煤气化动力学与焦油热解动力学的系统研究,结合实验数据进行了固定床气化动力学的模拟研究,最后将主要因素对焦油产率与气化指标的协同影响进行了探讨,并用小试试验装置进行了初步验证。研究结果表明:(1)气化压力、温度、通入水蒸气对煤气中焦油含量有显著的影响。增大压力、提高温度、将水蒸气作为气化剂会降低焦油含量。(2)煤种的选择对挥发性有机物的析出有重要的影响。在同一反应条件下,低变质程度的煤更容易析出挥发性有机物与转化C,因此也更容易生成焦油。(3)煤粒径影响挥发性有机物的析出。通过调节粒径大小来改变析出挥发性有机物的总量,从而控制焦油的生成。(4)通过实验得到二氧化碳与碳的还原反应以及水蒸气分解反应的活化能分别为:40202J/mol、19544J/mol并用于后续模拟研究。(5)不同的干馏终温对焦油产率有较大的影响,实验表明,温度在600℃时焦油的生成是最多的,因此在固定床气化的干馏层中,控制好干馏层温度,对控制焦油的生成具有重要意义。(6)焦油的热重-质谱分析图表明不同的温度段下,焦油可裂解成为不同的小分子气体HO、CH、CH、CH、C、H、CO、CO进入到煤气中,将焦油难以利用的热量转化到煤气中,故控制好不同温度段可有利于实现焦油的有效转化与能量利用。(7)利用Aspen Plus进行气化动力学流程模拟发现:在气化过程的允许范围内适量提高空气配比、增加水蒸气通入量、提高压力均能降低焦油的产率。(8)加压气化炉与煤科低焦油气化炉的小试试烧试验结果表明:压力与炉型对焦油的生成亦有重要的影响,尤其是炉型及其结构对焦油生成的影响,亦应作为日后低焦油气化炉开发的着重点之一。

关键词：固定床气化焦油生成动力学热力学模拟研究热重分析影响因素

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“人”“文”关怀：包天笑小说创作研究

“人”“文”关怀：包天笑小说创作研究

作者：丘雪晶福建师范大学

学位级别：硕士

包天笑翻译小说和编辑期刊的成就为他赢得“鸳鸯蝴蝶派”代表的名声,但他的小说创作历来颇受冷落。当回归到历史现场,试着仔细品读包天笑的作品,可以发现他的小说创作清晰地记录了社会动荡、时代更迭时普通人民的真实反应与人生遭际,展... 详细信息

包天笑翻译小说和编辑期刊的成就为他赢得“鸳鸯蝴蝶派”代表的名声,但他的小说创作历来颇受冷落。当回归到历史现场,试着仔细品读包天笑的作品,可以发现他的小说创作清晰地记录了社会动荡、时代更迭时普通人民的真实反应与人生遭际,展现了现代上海畸形的社会环境和重利轻情的社会风气。受翻译小说影响,包天笑的小说创作借鉴吸收了西方小说的技巧,“五四”之后,他的小说创作更出现了许多在艺术方面的实践创新,彰显了与他的早期小说创作不一样的新质。本论文以“人”“文”关怀来概括包天笑小说创作在思想上的特点和艺术上的追求,“人”即普通人民百姓,“文”指具体小说创作。论文选取包天笑的小说创作为主要研究对象,辅之以包天笑早期的翻译小说和晚年的回忆录,以文本细读为主,探究包天笑小说创作体现的对社会动荡之下普通百姓的关心同情和对人从传统走向现代的忧虑,以及包天笑在小说创作方面的用心关注和实践变革。通过对这一角度的研究,重构客观真实的历史场景,可以看见:一个传统知识分子在新旧变革的环境下对儒家仁爱情怀的继承与坚守;一个被视为“旧派”的作家对时代新潮的关注,孜孜不倦地调整自己的创作思想和创作手法的努力。从而呈现出一个更为丰富立体的作家形象,增加对包天笑小说创作的理解和认识。

关键词：包天笑小说创作仁爱情怀自我革“新”

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我国专利权质押的法律问题研究

我国专利权质押的法律问题研究

作者：豆晶雪广东财经大学

学位级别：硕士

随着科技的进步和社会的发展，以专利权为核心的新兴的知识产权经济得以迅速崛起，占据市场有利地位，科技型企业依靠专利权的优势取得显著成绩，但同发达国家或地区相比，我国的专利权质押制度较为落后，专利权质押方面的法律规定较为... 详细信息

随着科技的进步和社会的发展，以专利权为核心的新兴的知识产权经济得以迅速崛起，占据市场有利地位，科技型企业依靠专利权的优势取得显著成绩，但同发达国家或地区相比，我国的专利权质押制度较为落后，专利权质押方面的法律规定较为模糊，且专利权本身的特性，阻碍企业进行专利权质押，从而造成专利权质押实现的困境。本文采用文献法和比较研究的方法，力求通过对专利权质押基本理论的详细阐述，分析我国专利权质押的现状及存在主要法律问题，之后介绍美国、日本、英国、法国和台湾地区的专利权质押的立法实践及对我国专利权质押立法完善的启示，并在前期研究的基础上提出解决我国专利权质押制度法律问题的建议。第一部分阐述了专利权质押的基本理论。首先，阐述专利权质押的概念和性质;其次，归纳总结专利权质押的特征;再次，对专利权质押与动产质押及其他权利质押进行比较分析;最后论述了专利权质押的作用。第二部分介绍了我国专利权质押的现状及其存在的主要法律问题。对专利权质押的立法现状和实施现状进行介绍的同时，论述了我国专利权质押存在的主要法律问题，包括专利权质押立法协调性差、专利权质押标的范围不清楚、质权实现方式单一、专利权价值评估体系不完善以及专利权质押风险承担机制不健全等等。第三部分阐述了域外发达国家和地区专利权质押的立法实践及对我国专利权质押立法完善的借鉴和启示。介绍了发达国家中的美国、日本、英国、法国和我国台湾地区专利权质押方面的立法实践经验，汲取其中有借鉴价值的内容，得出完善我国专利权质押法律制度的有关结论。第四部分提出了解决我国专利权质押法律问题的建议，一是完善立法，进一步协调法律关系;二是界定专利权质押标的及范围;三是进一步促进质权实现方式的多元化发展;四是完善我国专利权质押价值评估体系及风险承担机制。

关键词：专利权质押法律问题完善建议

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杨增新的民族观研究

杨增新的民族观研究

作者：海雪晶新疆大学

学位级别：硕士

杨增新是民国时期治理新疆时间最长的一位统治者。其治新期间（1912-1928年），实行了一系列有利于新疆民族团结与安定统一的政策。政策是有思想做基础的，要想深刻理解这些政策实施的根源，就需要对杨增新的民族观进行分析。本文在原... 详细信息

杨增新是民国时期治理新疆时间最长的一位统治者。其治新期间（1912-1928年），实行了一系列有利于新疆民族团结与安定统一的政策。政策是有思想做基础的，要想深刻理解这些政策实施的根源，就需要对杨增新的民族观进行分析。本文在原始文献的基础上，从四个方面对杨增新的民族观进行探讨。第一，“晚清民国初期的中国社会”。从晚清民国初期的时代背景出发，阐述这一时期新思想的传入及中国传统文化的近代转型，杨增新作为中国旧式知识分子的典型代表，在传统与现代的矛盾冲突中，进行艰难抉择;第二，论述“杨增新民族观的形成与发展”。分析了中国传统文化中的民族观、“仁爱”思想、经世致用思想以及杨增新在甘肃、新疆等地的当政经验，对其民族观的形成与发展所起到的作用;第三，阐述“杨增新民族观的基本内容”。认为杨增新始终以维护国家统一为宗旨，将其对中国传统民族观的理解运用于实践中，以谋求各民族的平衡发展。第四，探讨“杨增新民族观的历史地位与局限性”。杨增新的民族观及其指导下的民族政策，维护了新疆的大致稳定与民族团结，但因受阶级与时代局限性的影响，其对民族的看法，在实践中并未完全实现。

关键词：杨增新民族观新疆

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聚醚酮熔体过滤的研究

聚醚酮熔体过滤的研究

作者：伍雪晶长春工业大学

学位级别：硕士

聚醚酮是近几十年新开发的强度高、热稳定性十分优良的特种工程塑料,并以其优异的性能成为众多尖端科技领域的关键材料,高纯度的聚醚酮可用于军工领域,航空业,汽车业,医疗领域和压缩机行业等。从聚醚酮的合成原料,到反应过程,再到精制... 详细信息

聚醚酮是近几十年新开发的强度高、热稳定性十分优良的特种工程塑料,并以其优异的性能成为众多尖端科技领域的关键材料,高纯度的聚醚酮可用于军工领域,航空业,汽车业,医疗领域和压缩机行业等。从聚醚酮的合成原料,到反应过程,再到精制及干燥,都会带入或产生细小颗粒的杂质,另外熔体挤出造粒中,聚醚酮因长时间塑化和加热,熔体会产生残渣,这些杂质一旦进入挤出模具中,会造成流道堵塞或制品残缺,同时也不同程度的影响聚醚酮的性质及应用范围。为了得到高纯度的聚醚酮产物,就需要对其熔体进行过滤。工艺过程采用挤出机熔融、加压,再经熔体泵加压,经过高目数过滤网对聚醚酮产物进行过滤。依据过滤要求,对熔体泵、换网器,过滤网进行选型和设计。特别是换网器形式、孔间距大小对过滤过程的压力影响较大,对操作过程的连续性及能否成功过滤至关重要。在对设备的安装和调试过程中物料发生了变性,并出现了测量信号失真和系统不稳定等现象。通过前期设计,安装调试,再经改进、完善,把分散的温度和压力控制系统改进为计算机集中控制系统,成功实现了聚醚酮产物过滤的工业化生产。研究结果表明,聚醚酮熔体过滤工艺及过滤设备投入生产运行后,事宜的操作条件及结果为：挤出机加料速度65Kg/h,挤出机加热温度380℃,出口压力10MPa,熔体泵出口压力30MPa,过滤网304材质、网筒外径20mm、网孔直径5μm,每个过滤器内并列放置5根过滤管,换网次数1次/2h,整个实验过程进行稳定运行,设计改进顺畅。测试结果表明,过滤后φ5μm的颗粒杂质个数≤6个/cm2,纯物料收率95.5%。

关键词：聚醚酮过滤挤出机熔体泵换网器

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高中议论文写作的语言教学策略

高中议论文写作的语言教学策略

作者：桂雪晶河南大学

学位级别：硕士

高中议论文写作一直是语文学科教学中的重中之重,学生在初中阶段主要考察记叙文的写作能力,而到高中更多地是接触和写作议论文,它在考试中所占分值高,涉及内容广,写作难度大,是每一位语文教师不能回避的考点。在议论文立意准确之外,学... 详细信息

高中议论文写作一直是语文学科教学中的重中之重,学生在初中阶段主要考察记叙文的写作能力,而到高中更多地是接触和写作议论文,它在考试中所占分值高,涉及内容广,写作难度大,是每一位语文教师不能回避的考点。在议论文立意准确之外,学生的语言表达水平显得尤为重要。他们在初中阶段已了解认识到议论文语言的基本特点,做好初高中议论文学习与写作的过渡,做好平日议论文写作语言的积累与训练,是每个高中语文老师必须重视的一个环节。绪论部分,介绍了高中生议论文写作中语言教学的相关研究背景、研究意义,讲述了本文的研究方法和些许创新之处,并对高中议论文写作语言教学的研究现状进行了梳理和综述。第一章首先界定议论文的文体概念,明确议论文中叙述、描写、抒情性语句需从属于说理论证的观点。通过具体事例,归纳分析议论文语言的四个特点,并对这四个特征做综合论述,避免了认识上的单一片面性,也为议论文写作的语言教学指明方向。通过对初、高中语文课程标准的对比研究,认识到初高中议论文阅读、写作教学衔接的重要性,强调学生对议论文语言的赏析与积累。而在教、学、考的有机联系中,《高考作文评分标准》中有关语言方面的要求足以让教师和学生找到目标,认清不足,进而拟定更好的方案以提升议论文的表达水平。第二章在与高三部分学生的访问谈话中,就精心设计的11个有关议论文写作的语言问题,了解学生的学情与需要,对高中生议论文写作语言的认识情况摸底探析、查找原因,明晰高中生写作议论文时的诉求与困惑。通过与高中一线语文教师的交流,总结其议论文语言教学情况,进而找准教学目标,并学习他们在议论文语言教学中的宝贵经验。最后一章在学生议论文语言认识、积累、训练存在不足的现状下,以学情促教法,提出议论文写作的语言积累和训练建议。具体到教师与学生的教学互动,包括“贴抄本”的准备、优秀议论文语言的归类与识记,做好写作的语言积累。依据《高考作文评分标准》涉及语言方面的要求——流畅、有文采、丰富、深刻,遵循以教师为引导、学生为主体的教学原则,开展教师示范、学生范例赏析、日常练习与交流分享等教学活动,把论证语言的文采、丰富、深刻统一起来,作为训练的主体目标,同时分享一些笔者思考并实践的做法,作为议论文写作语言的提升策略。秉承作文写作“在精不在多”的原则,提出片段练习与作文修改的建议,以实现作文语言的升格发展。相较于篇章练习,学生更愿意练习段落写作,也更乐于对自己的作文进行修改。这一章以高三学生日常习作和考场作文为例,能真实地反映学生语言问题,对学生写作训练的过程和结果做出适时的效果评价,同步跟进日常作文教学,便于及时反馈,查漏补缺。结语部分,总结研究的成果,即对议论文写作语言特点的全面把握,并在具体的教学设计、教学方法中贯穿此理念,对学生议论文语言的评价标准力求多元,既可以形象生动的文采取胜,也可以词汇、句式的丰富作为亮点,同样,论证语言的深刻亦不能忽略。最后反思论文的不足之处,确定今后的改进目标。本文尝试“化零为整”,把散落的零碎的议论文写作语言提升策略做综合论述。笔者结合自身的教学实践,尝试找寻议论文写作语言教与学存在的问题,希望通过一些具体的教学活动,提升学生议论文的语言写作水平。在此过程中,虽然取得了一定成效,但学生语言水平参差不齐,一些语言功底不好的同学需继续关注,不断进行思索与改进。

关键词：议论文语言特点教学情况教学策略

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市井文化视域下文创产品体验再设计研究

市井文化视域下文创产品体验再设计研究

作者：费雪晶天津理工大学

学位级别：硕士

近些年随着国家文化产业的大力发展,国家将文化产业作为国民经济和社会的重要组成部分,在我国市民的文化生活中,越来越多的文化产业与产品都呈现了百花齐放的趋势,在此背景下,文创产品类型也层出不穷。本次课题通过对于国内外文创产品... 详细信息

近些年随着国家文化产业的大力发展,国家将文化产业作为国民经济和社会的重要组成部分,在我国市民的文化生活中,越来越多的文化产业与产品都呈现了百花齐放的趋势,在此背景下,文创产品类型也层出不穷。本次课题通过对于国内外文创产品调研后发现,许多产品对于文化内涵的运用出现过度的相似情况,文化不加以提炼而直接复刻于产品之上导致了文创产品的同质化严重,缺乏独特性,以及文化内涵的不深刻性,基于此类问题,本次课题展开研究。在研究方法中主要是通过人工调研与实地走访将我国通过地域分类的方式找出三个典型城市群代表的文化圈,分别为京津冀文化圈、长三角文化圈、珠三角文化圈,并通过资料收集为三个文化圈梳理出了三条脉络进行市井文化总结与分析。同时在用户研究方法中主要使用调研问卷发放的方式,进行用户细分与市井文化导向文创产品的需求提取,从而为产品设计找到切入点。最后产品设计部分通过前面市井文化调研进行文化基因的提取,总结目标用户的产品需求,在产品的造型、配色、功能方面进行系统性的设计,同时在用户的情感化设计方面分为三个维度进行研究,把控设计方向,注重用户体验。

关键词：市井文化地域文化文创产品设计用户画像文化基因