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人皮肤成纤维细胞原代培养及增殖能力研究

中国现代医学杂志 2010年第18期20卷 2740-2742,2746页

作者：王晓华姜又红马萍尹元琴隋承光孟凡东田昕李妍中国医科大学第一临床学院肿瘤研究所辽宁沈阳110001

目的探索和建立永生化的人皮肤成纤维细胞,为皮肤成纤维细胞在临床医学上的应用提供可靠的科学依据。方法胰蛋白酶消化法分离培养人皮肤成纤维细胞;细胞生长曲线及MTT法测定细胞增殖能力;流式细胞仪测定成纤维细胞生长周期及细胞增殖指... 详细信息

目的探索和建立永生化的人皮肤成纤维细胞,为皮肤成纤维细胞在临床医学上的应用提供可靠的科学依据。方法胰蛋白酶消化法分离培养人皮肤成纤维细胞;细胞生长曲线及MTT法测定细胞增殖能力;流式细胞仪测定成纤维细胞生长周期及细胞增殖指数。结果不同代次原代及冻存复苏后的人皮肤成纤维细胞增殖能力均很强。结论人皮肤成纤维细胞在增殖能力上完全可以作为体细胞基因治疗的靶细胞,而且是未来最有希望的永生化基因治疗细胞之一。

关键词：成纤维细胞细胞增殖指数永生化

MicroRNA-100调节mTOR表达对肝癌细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响及机制研究

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现代肿瘤医学 2015年第1期23卷 15-19页

作者：隋承光孟凡东付立业中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所二室辽宁沈阳110001

目的:探讨microRNA-100调节m TOR表达对肝癌细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响并研究其可能的分子机制。方法:通过脂质体介导将microRNA-100模拟物及阴性对照转染Hep G2细胞,将细胞分为转染试剂对照组(mock)、阴性对照组(control)和micr... 详细信息

目的:探讨microRNA-100调节m TOR表达对肝癌细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响并研究其可能的分子机制。方法:通过脂质体介导将microRNA-100模拟物及阴性对照转染Hep G2细胞,将细胞分为转染试剂对照组(mock)、阴性对照组(control)和microRNA-100 mimic(miRNA-100 mimic)组。采用realtime PCR检测转染后细胞中miRNA-100的表达水平,Western blot检测m TOR的表达变化,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Tranwell检测细胞的侵袭能力,Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Vimentin、α-SMA和E-cadherin的表达。结果:过表达miRNA-100通过抑制m TOR的表达抑制肝癌细胞的迁移及侵袭能力,并通过下调肝癌细胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Vimentin和α-SMA的表达,上调E-cadherin的表达,阻抑上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的发生。结论:MicroRNA-100可能通过降低m TOR的表达抑制肝癌细胞的转移侵袭能力,并抑制上皮间质转化过程的发生。

关键词： MicroRNA-100 mTOR 上皮间质转化

姜黄素对酒精诱导的HepG2细胞氧化损伤的保护作用

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解剖科学进展 2016年第2期22卷 165-168页

作者：孟凡东隋承光蒋涛王扬中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所二室沈阳110001

目的探讨姜黄素在酒精诱导的Hep G2细胞氧化损伤中的保护作用,揭示姜黄素抗酒精性肝损伤的作用机制。方法不同浓度的姜黄素处理Hep G2细胞24 h后,加入酒精诱导细胞损伤。采用MTT检测姜黄素对损伤细胞活力的影响,试剂盒检测细胞中超氧化... 详细信息

目的探讨姜黄素在酒精诱导的Hep G2细胞氧化损伤中的保护作用,揭示姜黄素抗酒精性肝损伤的作用机制。方法不同浓度的姜黄素处理Hep G2细胞24 h后,加入酒精诱导细胞损伤。采用MTT检测姜黄素对损伤细胞活力的影响,试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量以及活性氧(ROS)水平,采用Real-time PCR检测SOD1、SOD2和CAT m RNA的表达。结果 300 mmol/L酒精可致近50%的细胞死亡,4μmol/L的姜黄素对酒精引起的细胞毒性作用保护效果最为显著,可明显改变细胞内SOD活性、MDA含量及ROS水平。与酒精组比较,4μmol/L的姜黄素可显著上调细胞内SOD1、SOD2和CAT m RNA的表达水平。结论姜黄素通过调节细胞的抗氧化能力削弱酒精对肝癌Hep G2细胞的损伤作用。

关键词：姜黄素人HepG2细胞酒精损伤

不同因素对诱导肿瘤患者cik细胞体外增殖能力及杀伤活性的影响

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中国现代医学杂志 2007年第23期17卷 2864-2867页

作者：王晓华隋承光孟凡东梁红王杨蒋涛付立业姜又红中国医科大学第一临床学院肿瘤研究所辽宁沈阳110001

目的研究不同因素对诱导细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells,CIK)体外增殖能力及杀伤活性的影响。为肿瘤CIK细胞治疗提供实验依据。方法细胞计数法及MTT法测定CIK细胞的增殖能力及杀伤活性。结果低年龄组较高年龄组... 详细信息

目的研究不同因素对诱导细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells,CIK)体外增殖能力及杀伤活性的影响。为肿瘤CIK细胞治疗提供实验依据。方法细胞计数法及MTT法测定CIK细胞的增殖能力及杀伤活性。结果低年龄组较高年龄组CIK细胞体外增殖能力及杀伤活性强;在无血清培养基条件下培养的CIK细胞的体外增殖能力及杀伤活性较完全培养基的强;在一定的培养时间内CIK细胞的体外增殖能力与培养的时间成正比;CIK细胞对各种肿瘤细胞均有杀伤作用。结论不同因素对肿瘤患者CIK细胞体外增殖能力及杀伤活性有影响。

关键词：细胞因子诱导的杀伤细胞增殖能力杀伤活性细胞因子

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hMSH2基因在散发卵巢癌中突变研究

中国医科大学学报 1998年第3期27卷 247-249页

作者：任舒月杨滨任常山隋承光陈红中国医科大学第二临床学院辽宁沈阳中国医科大学肿瘤所辽宁沈阳

目的：研究卵巢癌患者ＤＮＡ错配修复基因ｈＭＳＨ２（ＨｕｍａｎｍｕｔＳｈｏｍｏｌｏｇ）基因突变，同时检测其基因组微卫星Ｄ２Ｓ１２３序列变化。方法：应用ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＤＮＡ序列分析方法检测了１５例卵巢癌患者正... 详细信息

目的：研究卵巢癌患者ＤＮＡ错配修复基因ｈＭＳＨ２（ＨｕｍａｎｍｕｔＳｈｏｍｏｌｏｇ）基因突变，同时检测其基因组微卫星Ｄ２Ｓ１２３序列变化。方法：应用ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＤＮＡ序列分析方法检测了１５例卵巢癌患者正常细胞和肿瘤细胞中的ｈＭＳＨ２基因突变。结果：３例患者存在ｈＭＳＨ２基因生殖细胞或体细胞突变，序列分析表明有碱基置换的同义突变，有碱基丢失产生的无义突变。有３例患者基因组表现Ｄ２Ｓ１２３变化，其中１例检测到ｈＭＳＨ２突变。结论：ｈＭＳＨ２基因突变和卵巢癌发生有关。机理可能为其突变引起基因组不稳定，而引起一系列基因变化。

关键词：卵巢肿瘤 hMSHZ基因基因突变 DNA修复基因

人肝癌细胞中纯化的HSP70的免疫活性研究

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中国现代医学杂志 2011年第15期21卷 1805-1808页

作者：孟凡东隋承光田昕李妍王晓华马萍姜又红刘云鹏中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所第二研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肿瘤内科辽宁沈阳110001

目的用改良的方法提取纯化人肝癌细胞中的HSP70,通过观察其对DC瘤苗的体外活化,证实其免疫活性。方法利用两步超滤及离子交换层析提纯HSP70,体外致敏外周血单核细胞来源的DC,检测DC表面成熟标志的变化。再将此DC与T细胞共培养,用CCK-8... 详细信息

目的用改良的方法提取纯化人肝癌细胞中的HSP70,通过观察其对DC瘤苗的体外活化,证实其免疫活性。方法利用两步超滤及离子交换层析提纯HSP70,体外致敏外周血单核细胞来源的DC,检测DC表面成熟标志的变化。再将此DC与T细胞共培养,用CCK-8试剂盒检测其对HSP70同源及非同源肿瘤的杀瘤活性。结果用这种改良的简便快捷的HSP70生化提纯方法可获得与其他常被采用方法相似得率的目的蛋白,用其体外致敏DC可使其高表达CD80、CD83、CD86及HLA-DR等成熟标志。用此DC与T细胞体外共培养后,具有较高的对HSP70同源肿瘤的特异性杀伤活性。结论用此改良的提纯方法,可获得具有免疫活性的HSP70,在体外具有很好的活化DC瘤苗的能力。

关键词：热休克蛋白70 树突状细胞肿瘤疫苗人肝癌细胞

P21^(WAF1/CIP1)、P16蛋白表达与人脑神经胶质瘤的相关分析

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癌变．畸变．突变 2005年第5期17卷 311-313页

作者：姜又红隋承光孟凡东马萍王晓华戴晓淳中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所辽宁沈阳110001

背景与目的:探讨P21WAF1/CIP1、P16两种抑癌基因与人脑神经胶质瘤恶性程度的关系。材料与方法:采用SABC免疫组织化学方法对98例人脑胶质瘤组织及12例正常脑组织标本中P21WAF1/CIP1和P16的表达进行检测,并进行相关分析。结果:P21WAF1/CIP... 详细信息

背景与目的:探讨P21WAF1/CIP1、P16两种抑癌基因与人脑神经胶质瘤恶性程度的关系。材料与方法:采用SABC免疫组织化学方法对98例人脑胶质瘤组织及12例正常脑组织标本中P21WAF1/CIP1和P16的表达进行检测,并进行相关分析。结果:P21WAF1/CIP1和P16阳性表达率在人脑胶质瘤中分别为58.16%和42.86%,与正常脑组织中的表达情况差异有统计学意义;P21WAF1/CIP1蛋白和P16蛋白阳性表达率均随着胶质瘤的恶性程度的增高而降低;P21WAF1/CIP1蛋白和P16蛋白可协同表达。结论:P21WAF1/CIP1与P16蛋白的阳性表达率及协同表达率可在一定程度上反映胶质瘤细胞的恶性生物学行为,可以作为一项判断其恶性程度的有效指标。

关键词：脑胶质瘤 P21^WAF1/CIP1蛋白 P16蛋白免疫组织化学

HSV-1载体对体外培养神经元感染作用的研究

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中国医学工程 2007年第10期15卷 792-795页

作者：隋承光蒋涛王扬傅立叶姜又红中国医科大学第一附属医院肿瘤研究所辽宁沈阳110001

目的利用重组有lacZ基因的HSV-1假型病毒载体感染体外培养的人胚神经元,(以β-gal组织化学染色来检测报告基因lacZ在神经元中的表达),并观察该载体的细胞毒性及病毒的水平传播情况。方法用重组有lacZ基因的HSV-1扩增子质粒pHSVlac包装... 详细信息

目的利用重组有lacZ基因的HSV-1假型病毒载体感染体外培养的人胚神经元,(以β-gal组织化学染色来检测报告基因lacZ在神经元中的表达),并观察该载体的细胞毒性及病毒的水平传播情况。方法用重组有lacZ基因的HSV-1扩增子质粒pHSVlac包装成复制缺陷的假型病毒载体,并在Vero细胞中传代增殖,产生高滴度的病毒载体,用其感染体外原代培养的神经元,以β-gal染色观察报告基因lacZ在神经元中的表达及该载体的细胞毒性。结果pHSVlac质粒与HSV-1 17 ts K可在Vero细胞中包装成复制缺陷的HSV-1假型病毒载体,经传代其滴度可达1×108PFU/mL。该载体在37℃时能感染体外原代培养的人胚神经元,并在其中表达LacZ基因,未发现细胞毒性改变。结论HSV-1载体能够高效靶向地将外源基因导入非分裂的神经元,HSV-1载体介导的基因转移系统的建立为进一步开展神经机能及神经系统疾病的基因治疗的研究奠定了基础。

关键词：缺陷型HSV-1载体基因转染 lacZ基因人胚神经元

人神经生长因子cDNA的体外扩增和序列测定

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中国医科大学学报 2001年第6期30卷 404-405,407页

作者：尹元琴隋承光陈红任常山中国医科大学基因工程研究中心沈阳110001 中国医科大学肿瘤研究所分子肿瘤研究室

目的 :以人胎盘组织中的mRNA为模板 ,扩增人 βNGFcDNA ,并测定核苷酸序列 ,为进一步研究奠定基础。方法 :采用异硫氢酸胍法提取RNA ;采用RT -PCR技术扩增人 βNGFcDNA ;Sanger双脱氧末端终止法测定核苷酸序列。结果 :从人胎盘组织中提... 详细信息

目的 :以人胎盘组织中的mRNA为模板 ,扩增人 βNGFcDNA ,并测定核苷酸序列 ,为进一步研究奠定基础。方法 :采用异硫氢酸胍法提取RNA ;采用RT -PCR技术扩增人 βNGFcDNA ;Sanger双脱氧末端终止法测定核苷酸序列。结果 :从人胎盘组织中提取出RNA ,以其中的mRNA为模板 ,扩增出人 βNGFcDNA ,经琼脂糖凝胶电泳鉴定大小与目的片段相同 ,进一步测定序列证实为目的片段。结论 :运用RT PCR技术扩增出人 βNGFcDNA ,扩增时在 5′端以限制性内切酶酶切位点加以修饰 ,此片段经核苷酸序列测定证实为目的片段。

关键词：神经生长因子互补DNA 体外扩增序列测定