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苏云金芽孢杆菌介导的小菜蛾精氨酸激酶基因的RNA干扰

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苏云金芽孢杆菌介导的小菜蛾精氨酸激酶基因的RNA干扰

作者：陈金芝福建农林大学

学位级别：硕士

RNA干扰(RNA interference,简称RNAi)技术已被开发利用于害虫控制,但具体的应用技术还有待进一步研究。本论文尝试在苏云金芽孢杆菌(Bt)中表达小菜蛾精氨酸激酶基因(PxAK)的dsRNA,通过Bt介导来沉默小菜蛾上的PxAK,达到杀虫的目的,以期为... 详细信息

RNA干扰(RNA interference,简称RNAi)技术已被开发利用于害虫控制,但具体的应用技术还有待进一步研究。本论文尝试在苏云金芽孢杆菌(Bt)中表达小菜蛾精氨酸激酶基因(PxAK)的dsRNA,通过Bt介导来沉默小菜蛾上的PxAK,达到杀虫的目的,以期为RNAi技术在小菜蛾防治中的应用提供新的途径。具体研究内容与结果如下： PxAK氨基酸序列的分析结果表明,PxAK与家蚕、棉铃虫、斜纹夜蛾等14种鳞翅目昆虫的精氨酸激酶(AK)一致性达91%-95%,与其他目昆虫的同源性也都在81%以上。推断了基因保守区域并以其中的325bp片段(AKi)作为RNAi的靶标。克隆Bt的启动子序列pro3a,在其后连接上AKi,然后连接到质粒pHT304上,最后把启动子pro3a反向连接到AKi的另一端,得到质粒pHT304+pro3a(+)+AKi+pro3a(-),命名为pHTAKR。利用重叠延伸PCR技术突变pHTAKR中来自质粒pHT304的Sph Ⅰ酶切位点,从而获得只有单个SphⅠ酶切位点的载体pHTAKR2。利用电穿孔技术把载体pHTAKR2分别转入BtBMB171和Bt8010,获得工程菌BMB171-AKi和8010-AKi。经检测,工程菌8010-AKi中存在晶体蛋白,但晶体数量比Bt8010少,且形状由菱形为主转变成菱形、方形、椭圆形等多种形状并存;工程菌8010-AKi的生长速率在对数期比菌株8010慢,形成的芽孢数也少;在经选择压处理的工程菌8010-AKi中,30代内外源质粒pHTAKR2的稳定性都在90%以上。用Bt菌液浸泡处理的叶片喂饲小菜蛾,发现工程菌8010-AKi处理的小菜蛾幼虫在两天后开始出现死亡,第六天死亡率达60%,死亡个体主要出现体节皱缩,胸部扁缩等由于AK被抑制后的形态,但比8010的死亡率低;工程菌BMB171-AKi处理的幼虫第六天死亡率达53.3%,比BMB171的死亡率高,其死亡个体也出现了体节皱缩等由于AK被抑制后的形态,而无因Bt毒蛋白而死亡的形态。工程菌8010-AKi干扰后的实时荧光定量PCR结果表明,经过处理的小菜蛾幼虫,其PxAK表达被抑制。这意味着采用工程菌介导对小菜蛾幼虫进行RNAi是有效。本研究首次利用Bt介导RNA干扰,通过喂饲小菜蛾来抑制PxAK的表达,从而影响小菜蛾的生长发育。如此可见,把杀虫微生物和RNAi技术相结合是可行的。

关键词：小菜蛾精氨酸激酶苏云金芽孢杆菌 RNA干扰害虫控制

紫外线照射充氧自血回输治疗急性脑梗死32例近期疗效观察

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山东医药 2008年第17期48卷 105-106页

作者：陈金芝杨俊美禹城市人民医院山东禹城251200

2006年7月～2007年10月,我们采用紫外线照射充氧自血回输(UBIO)治疗急性脑梗死患者32例,取得较好效果.现报告如下.临床资料:64例急性脑梗死患者,男43例,女21例;年龄47～72岁;CT示出血灶位于左侧基底节23例,右侧基底节23例,脑叶16例,小脑... 详细信息

2006年7月～2007年10月,我们采用紫外线照射充氧自血回输(UBIO)治疗急性脑梗死患者32例,取得较好效果.现报告如下.临床资料:64例急性脑梗死患者,男43例,女21例;年龄47～72岁;CT示出血灶位于左侧基底节23例,右侧基底节23例,脑叶16例,小脑2例,多发性梗死5例.

关键词：紫外线照射充氧自血回输治疗急性脑梗死患者疗效观察

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家长对幼儿园保教价值的认可度

学前教育研究 2014年第8期 60-63页

作者：俞文陈金芝高云湖北省武汉市教育科学研究院武汉430000 湖北省武汉市直属机关永红幼儿园武汉430030

对A园四个园区629位家长的问卷调查和对其中24位家长的访谈发现,家长对A园的保教价值总体上非常认可。其中不同性别的家长对A园的货币成本的看法差异显著;不同年龄的家长对A园的员工价值、管理价值、情感价值和成本价值的看法差异显著;... 详细信息

对A园四个园区629位家长的问卷调查和对其中24位家长的访谈发现,家长对A园的保教价值总体上非常认可。其中不同性别的家长对A园的货币成本的看法差异显著;不同年龄的家长对A园的员工价值、管理价值、情感价值和成本价值的看法差异显著;员工价值是家长总体上感知A园保教价值的主要参考指标。

关键词：幼儿园管理保教价值家长评价

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DNA干扰现象及其作用机理研究进展

福建农业学报 2017年第4期32卷 456-460页

作者：芮祥云陈金芝黄鹏榕杨广闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福建福州350002 农业部闽台作物有害生物综合治理重点实验室福建福州350002 闽台特色作物病虫生态防控协同创新中心福建福州350002

与体内某一基因相同的DNA序列可特异性抑制细胞内靶标基因的表达,这种现象称之为DNA干扰(DNAi)。DNAi是随着转录后基因沉默现象而在烟草属植物上被发现,之后在一些动植物及其细胞上也被发现。在原核生物中也存在DNAi现象,且原核生物的Ag... 详细信息

与体内某一基因相同的DNA序列可特异性抑制细胞内靶标基因的表达,这种现象称之为DNA干扰(DNAi)。DNAi是随着转录后基因沉默现象而在烟草属植物上被发现,之后在一些动植物及其细胞上也被发现。在原核生物中也存在DNAi现象,且原核生物的Ago在体外也能实现DNAi。原核生物DNAi的机理主要是Ago以DNA为向导切割DNA或RNA,而真核生物可能是基因转录后抑制、基因组甲基化和启动子结合的转录抑制等。本文还对DNAi的进一步研究和应用进行了讨论和展望。

关键词： DNA干扰基因沉默 Ago蛋白

人生理想幻灭的悲剧——评莎士比亚笔下的奥瑟罗

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现代语文（上旬．文学研究） 2008年第8期 122-134页

作者：陈金芝徐州高等师范学校文理系

对于莎士比亚笔下的奥瑟罗，历来评论家对其褒贬不一。奥瑟罗为什么会前后判若两人，酿成悲剧的原因是什么，这是问题的核心。究其本质，笔者以为这是人生理想幻灭的悲剧。奥瑟罗对真善美的人生美好理想的执着、信任和追求遭到了摧毁性... 详细信息

对于莎士比亚笔下的奥瑟罗，历来评论家对其褒贬不一。奥瑟罗为什么会前后判若两人，酿成悲剧的原因是什么，这是问题的核心。究其本质，笔者以为这是人生理想幻灭的悲剧。奥瑟罗对真善美的人生美好理想的执着、信任和追求遭到了摧毁性的打击，理想之高造成了幻灭之深，付出了惨痛的代价。

关键词：人生理想幻灭悲剧

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从鲁迅小说的民俗描写探视人物灵魂深处

语文学刊(教育版) 2015年第22期 43-44页

作者：陈金芝徐州高等师范学校

鲁迅的小说以民俗描写见长,运用独特乡域的民俗风情显示社会生活的典型环境,塑造处于浓厚民俗氛围中的人物,民俗描写对刻画人物性格、表现人物内心世界,具有非常重要的作用,以《阿Q正传》和《祝福》为例,从民俗视角深刻剖析两位主人公... 详细信息

鲁迅的小说以民俗描写见长,运用独特乡域的民俗风情显示社会生活的典型环境,塑造处于浓厚民俗氛围中的人物,民俗描写对刻画人物性格、表现人物内心世界,具有非常重要的作用,以《阿Q正传》和《祝福》为例,从民俗视角深刻剖析两位主人公的内心灵魂。

关键词：民俗社会环境性格灵魂

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论林徽因新诗的艺术特色

文学教育(上) 2012年第10期 26-27页

作者：陈金芝江苏省徐州高等师范学校中文系

才女林徽因作为新月派后期的诗人,诗歌虽数量不多,却多为佳作,呈现出独特的艺术魅力,本文试从诗歌的情感内蕴、绘画美、音乐美、语言风格等方面对其艺术特色进行探究。

关键词：情感绘画美音乐美语言风格

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凉膈散加减治疗猩红热三例

中国实用医刊 1990年第1期 49-50页

作者：陈金芝信阳地区中医院

猩红热乃是乙型溶血性链球菌感染所致的急性传染性疾病。临床以发热、咽炎、全身弥漫性鲜红色皮疹和疹退后明显脱屑为其特征。祖国医学称为“烂喉痧”。如清代《秘传烂喉痧治法经验》载:“有烂喉痧一症,发于冬春之际,不分老幼,遍相传染... 详细信息

猩红热乃是乙型溶血性链球菌感染所致的急性传染性疾病。临床以发热、咽炎、全身弥漫性鲜红色皮疹和疹退后明显脱屑为其特征。祖国医学称为“烂喉痧”。如清代《秘传烂喉痧治法经验》载:“有烂喉痧一症,发于冬春之际,不分老幼,遍相传染发者壮热烦渴,(疒丹)密肌红,宛如锦文,咽喉肿痛,腐痛一团,火热内炽。”因其具有传

关键词：猩红热喉痧疫喉环口苍白圈祖国医学复方氨基比林杨梅舌草莓舌泄热疫毒肺胃蕴热喉疹