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泛素结合酶UBE2O通过促进BMAL1的泛素化降解调控生物节律的机制研究

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泛素结合酶UBE2O通过促进BMAL1的泛素化降解调控生物节律的机制研...

作者：陈苏萍苏州大学

学位级别：硕士

研究背景和目的生物钟是机体同步环境的重要内在机制,其功能紊乱严重影响机体的健康和生存。生物钟转录翻译反馈环(Transcriptional/Translational Feedback Loop,TTFL)是调节生物钟震荡的核心分子机制,主要由BMAL1(aryl hydrocarbon re... 详细信息

研究背景和目的生物钟是机体同步环境的重要内在机制,其功能紊乱严重影响机体的健康和生存。生物钟转录翻译反馈环(Transcriptional/Translational Feedback Loop,TTFL)是调节生物钟震荡的核心分子机制,主要由BMAL1(aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator-like protein 1,ARNTL)和CLOCK(circadian locomoter output cycles protein kaput,CLOCK)组成的正性元件及PER(period)和CRY(cryptochrome)等组成的负性元件构成,其调控过程涉及多种蛋白质翻译后修饰。其中蛋白质泛素化修饰在影响蛋白质稳定性和介导细胞信号转导等方面有着重要的作用。关于泛素化调控在生物钟领域的研究已有众多报道,但多仅限于对负性元件的调控。而BMAL1作为经典分子震荡环路中核心蛋白之一,关于其泛素化修饰分子机制及功能的研究还不多,UBE3A(ubiquitin-protein ligase E3A)是目前唯一报道促进BMAL1泛素化修饰的E3泛素连接酶,这限制了我们对其调控生物节律功能的认识。因此,在本论文中,我们通过定量蛋白质组学方法发现更多与BMAL1泛素化相关蛋白,并探索泛素结合酶对生物节律的调控机制。研究方法首先在HEK293T细胞中过表达FLAG-BMAL1及pcDNA3.1质粒,收集细胞获得全蛋白裂解液,并用FLAG M2树脂进行免疫共沉淀,得到BMAL1及其相互作用蛋白和阴性对照蛋白。免疫印迹验证后,用SDS-PAGE分离蛋白,银染后胶内酶解差异条带进行LC-MS/MS质谱分析,数据库搜索获得蛋白定性和定量结果,寻找获得潜在的与泛素修饰系统相关的、与BMAL1相互作用的泛素结合酶UBE2O。接着对UBE2O进行生物学验证,免疫共沉淀、免疫印迹及免疫荧光共定位法进一步验证其与BMAL1是否存在相互作用。然后用生物化学方法探究UBE2O调控BMAL1泛素化、稳定性的分子机制。用双荧光报告基因检测系统及qPCR实验探究UBE2O对BMAL1转录活性的调控。Lumi Cycle实验探究UBE2O对生物节律的影响,并揭示其调控规律。研究结果在前期质谱数据分析中,我们发现UBE2O是唯一检测到的与BMAL1相互作用的E2泛素结合酶。我们的生物学实验进一步发现UBE2O与BMAL1的确有相互作用。HEK293T细胞中,过表达UBE2O能下调BMAL1的蛋白水平,不同细胞系中敲低UBE2O能明显增加BMAL1的蛋白水平。特异性蛋白酶体抑制剂MG132处理后,能使UBE2O引起的BMAL1蛋白水平下降得到明显回升,并使其泛素化程度增加。免疫沉淀和免疫印迹实验发现,与阴性对照组相比,UBE2O确实能促进BMAL1的泛素化水平。双荧光报告基因实验发现在相比阴性对照组UBE2O确实能使E-box转录活性下降,而对RRE-box无影响。进一步qPCR实验发现,在mRNA水平上UBE2O对BMAL1下游的基因有明显的下调作用,但对Bmal1的转录水平并无明显影响。LumiCycle实验发现在敲低UBE2O的Luc-per2::U2OS中生物节律振幅发生明显上升而对周期影响不大。研究结论质谱数据鉴定发现UBE2O是与BMAL1相互作用的E2泛素结合酶。生化实验证实UBE2O与BMAL1相互作用,UBE2O能调控BMAL1蛋白水平变化促进BMAL1泛素化降解。UBE2O能通过调控BMAL1的泛素化和蛋白水平影响其转录活性进而使节律振幅增加但对周期影响不大。本论文证实了UBE2O对生物节律的调控并阐明了其作用的分子机制。

关键词： BMAL1 UBE2O 泛素化修饰转录活性生物节律

基于利益二元结构的环境影响评价公众参与制度研究

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基于利益二元结构的环境影响评价公众参与制度研究

作者：陈苏萍苏州大学

学位级别：硕士

人类活动对环境产生的影响往往是双重的,不仅影响其上所承载的私人环境利益,同时也对环境公共利益产生影响,这两类利益存在着紧密的联系,同时也相互区分。环境法律与制度的设计本应兼顾对二元利益的维护,且在环境影响评价制度中引入公... 详细信息

人类活动对环境产生的影响往往是双重的,不仅影响其上所承载的私人环境利益,同时也对环境公共利益产生影响,这两类利益存在着紧密的联系,同时也相互区分。环境法律与制度的设计本应兼顾对二元利益的维护,且在环境影响评价制度中引入公众参与更应是加强对二元利益关怀的体现,但现实却是,这一制度在对私人环境利益的维护中是相对比较到位的,而对环境公共利益的维护还存在着相当大的缺失。无论在公众参与主体、信息公开、参与方式还是参与权利的救济方面,现有制度在对二元利益的体现和维护中都存在着失衡。因此,有必要基于利益二元结构的视角对环境影响评价中的公众参与制度进行重构,在参与主体方面肯定环境公共利益的代表尤其是环保NGO的参与主体地位,在信息公开、参与方式方面保障环境公共利益的代表主体与私人环境利益的代表主体具有平等的权利,最后,在公众参与环境影响评价的权利遭受损害时,也应给予两类利益的代表充分的救济途径。

关键词：环境影响评价公众参与私人环境利益环境公共利益

肌襻代瓣术治疗原发性下肢深静脉瓣膜功能不全的护理

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中华护理杂志 1991年第6期26卷 255-256页

作者：陈苏萍陈秀英童清邓霞光中国人民解放军第106医院

原发性下肢深静脉瓣膜功能不全是1980年才被肯定的一种下肢静脉系统的多发病,以往一直认为本病与其他原因引起的下肢浅静脉曲张相同采用大隐静脉高位结扎或剥脱术治疗,故效果不佳。该病的主要临床表现为患肢肿胀,色素沉着,静脉曲张。

关键词：肌襻代瓣术下肢腈脉瓣膜功能不全

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让画笔走进语文课堂

青少年日记(教育教学研究) 2019年第1期 232-233页

作者：陈苏萍福建省闽清县城关小学

长期以来小学语文教学中的一大问题就是,教学内容单一枯燥,一味的听说读写,学生缺乏兴趣和主动学习的积极性,对语文学科有抵触情绪。我们无法改变教学内容,但为了达到高效推进语文教学发展的目的,我们可以另辟蹊径,丰富教学方式,吸引我... 详细信息

长期以来小学语文教学中的一大问题就是,教学内容单一枯燥,一味的听说读写,学生缺乏兴趣和主动学习的积极性,对语文学科有抵触情绪。我们无法改变教学内容,但为了达到高效推进语文教学发展的目的,我们可以另辟蹊径,丰富教学方式,吸引我们的学生主动学习语文。由此我们便产生了让画笔走进课堂的想法。色彩缤纷的图画是低年级小学生最喜欢的,因为它能让文字更形象地直接作用与学生感官,符合低年级学生思维的特点。比如更多的小学生喜欢看漫画而不是书,是因为他们对于文字的掌握和应用都属于初级阶段,因此没办法读懂一些相对较难的选段,更谈不上从中得

关键词：低年级学生语文教学语言表达能力

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教训使我变得理智一些了

上海戏剧 1981年第5期 49-50页

作者：陈甦萍

“谁个少年不钟情,谁个少女不怀春”。戏剧界的青年演员由于时常排练和演出爱情题材的戏,情感的种子较之一般青年要萌发得早一些,有的十八、九岁就开始进入“角色”了。他们的生活环境、所受教育和思想修养不尽相同,恋爱态度也各有所异... 详细信息

“谁个少年不钟情,谁个少女不怀春”。戏剧界的青年演员由于时常排练和演出爱情题材的戏,情感的种子较之一般青年要萌发得早一些,有的十八、九岁就开始进入“角色”了。他们的生活环境、所受教育和思想修养不尽相同,恋爱态度也各有所异。究竟怎样按照青年演员的特点,正确对待婚姻恋爱问题呢?我们接触到许多有趣的思想和看法,大家对这件“终身大事”都很关心。因此,本刊从这期起,特辟“青年演员应该怎样对待恋爱”这一专栏,展开讨论。下面,先登载三位青年演员的来稿。为了把这场讨论引向深入,欢迎更多的青年演员结合自己的体验,各抒己见,踊跃来稿。同时,也欢迎年长的演员、从事培养青年演员的同志、以及青年演员的家长们一起来参加这场讨论,给我们的青年演员以亲切的关怀。

关键词：演员青年沪剧来稿

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浅析小学道德与法治课程对家庭教育的影响

试题与研究 2021年第26期 133-134页

作者：陈苏萍福建省福州市仓山区实验小学

道德与法治学科教学在小学教育体系中十分重要,不仅可以让学生通过学习该课程掌握基本的道德与法治的知识,还可以在学习知识点的过程中掌握实践运用能力。目前小学道德与法治教材凭借其内容优势,不仅能够完成小学教育目标,而且对家庭教... 详细信息

道德与法治学科教学在小学教育体系中十分重要,不仅可以让学生通过学习该课程掌握基本的道德与法治的知识,还可以在学习知识点的过程中掌握实践运用能力。目前小学道德与法治教材凭借其内容优势,不仅能够完成小学教育目标,而且对家庭教育也存在一定影响。本文将首先介绍目前小学生家庭教育存在的问题,继而结合笔者自身教学经验,探究小学道德与法治教学对家庭教育所产生的积极影响,为小学教育的发展提出自身意见。

关键词：小学道德与法治家庭教育