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作者：陈童锦悦广西大学

学位级别：硕士

本文对三株竹鼠源产纤维素酶枯草芽孢杆菌(GL-4、GL-5和GL-8)进行生物学特性研究和安全性评价,同时利用基因工程技术克隆表达纤维素酶相关基因并检测其酶活性。以广西巴马小型猪近交系60日龄仔猪为试验对象,通过日粮添加菌体直接饲喂的... 详细信息

本文对三株竹鼠源产纤维素酶枯草芽孢杆菌(GL-4、GL-5和GL-8)进行生物学特性研究和安全性评价,同时利用基因工程技术克隆表达纤维素酶相关基因并检测其酶活性。以广西巴马小型猪近交系60日龄仔猪为试验对象,通过日粮添加菌体直接饲喂的方式进行猪体内饲喂效果的评价。围绕以上内容,完成3个试验,主要内容如下:本试验对竹鼠肠内容物中分离出的三株产纤维素酶枯草芽孢杆菌进行生长曲线测定、抗生素敏感性试验、耐药基因检测、小鼠体内安全性试验以及耐酸、耐胆盐、自凝聚性、疏水性等生物学特性测定。试验结果表明GL-4、GL-5、GL-8三株受试菌具有如下特性:(1)增殖速度快:1.5 h即可进入对数生长期、5 h即可达到最大生长量;(2)抗逆性强:三株受试菌在p H2.5的条件下存活率均达到65%以上、在胆盐浓度0.3%和0.5%的环境下仍能继续存活增殖;(3)自凝聚及疏水能力好:孵育到24 h,三株菌的自凝聚率均达到85%以上,GL-5和GL-8的疏水率均高于40%;(4)GL-4、GL-5、GL-8三株受试菌对大部分抗生素敏感,对小鼠无毒副作用。本试验根据NCBI数据库公布的枯草芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因序列(CP092631)和β-葡萄糖苷酶基因序列(CP026039)设计引物,从枯草芽孢杆菌GL-4中克隆出两个纤维素酶基因:内切葡聚糖酶基因Cel31和β-葡萄糖苷酶基因Cel39,将Cel31和Cel39基因分别连接到原核表达载体p ET32a(+),构建原核表达质粒,在大肠杆菌中进行表达。结果显示,Cel31基因和Cel39基因均能表达出目的蛋白,蛋白大小分别为73 k Da和45k Da,且重组蛋白均主要以可溶性的形式表达,在IPTG终浓度为0.5mmol/L条件下诱导6 h能获得最高表达量。经酶活测定,BL21/p ET32aCel31的表达产物酶活达209.07 U/m L,是GL-4表达产物酶活的4.2倍,BL21/p ET32a-Cel39的表达产物酶活为52.16 U/m L,是GL-4表达产物酶活的1.5倍,说明本研究表达的内切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的具有较高的酶活性。选用32头广西巴马小型猪近交系仔猪(60日龄),随机分成4组,每组8个重复,每个重复1头猪,试验期28天,试验分为4个处理组:1)基础日粮(CK组);2)基础日粮+枯草芽孢杆菌GL-4(Treat1组);3)基础日粮+枯草芽孢杆菌GL-4、GL-5和GL-8(Treat2组);4)基础日粮+枯草芽孢杆菌GL-4+干酪乳杆菌HJD(Treat3组)。生长性能指标测定结果表明,日粮中添加不同的益生菌组合有改善仔猪料重比的趋势,但只有Treat3组的料重比得到显著改善(P0.05)。营养物质表观消化率结果表明,与CK组相比,Treat3组仔猪的粗纤维、酸性洗涤纤维和磷表观消化率显著提高(P0.05);Treat2组和Treat3组消化能表观消化率显著高于CK组和Treat1组(P0.05)。饲料中添加不同益生菌组合均有增加干物质、粗蛋白和中性洗涤纤维表观消化率的趋势,但没有达到显著水平(P>0.05)。血清生化指标测定结果表明,日粮中添加不同益生菌组合对仔猪对GLU、TP、ALB的影响不显著(P>0.05),但显著提高了ALP、AST、BUN的含量(P<0.05),T-CHO含量显著降低(P<0.05)。免疫指标测定结果显示,试验组仔猪血清中各项免疫指标(IL-6、TNF-α、CRP、Ig G、Ig M、Ig A)的含量均在正常范围内有不同程度的提升。与CK组对比,Treat1组和Treat2组血清中各免疫指标含量显著提高(P<0.05),除血清中IL-6、Ig M和Ig A的含量外,Treat3组血清中TNF-α、CRP、Ig G含量也显著提高(P<0.05)。仔猪粪便微生物多样性的测定结果分析发现,Treat1、Treat2和Treat3组的厚壁菌门与拟杆菌门比值均增大,最大比值为Treat3组,其次为Treat1和Treat2组。粪便短链脂肪酸含量测定结果表明,试验组仔猪粪便中丁酸、乙酸、丙酸、己酸、戊酸、异丁酸、异戊酸的含量均增加。综上结果,日粮中添加枯草芽孢杆菌或者联合添加干酪乳杆菌均能提高仔猪的生长性能、免疫水平以及营养物质的表观消化率。不同益生菌组合,饲喂效果存在差异,Treat3组(枯草芽孢杆菌GL-4+干酪乳杆菌HJD)的饲喂效果最佳,其次是Treat1组和Treat2组。综上所述,本研究发现GL-4、GL-5和GL-8三株受试菌均具有优良的

关键词：枯草芽孢杆菌纤维素酶生物学特性原核表达饲喂效果评价

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竹鼠源产纤维素酶枯草芽孢杆菌的生物学特性研究及安全性初步评价

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中国畜牧杂志 2024年第3期60卷 201-206页

作者：陈童锦悦覃绍敏韦珏刘金凤陈凤莲许力士梁晶兰干球吴健敏广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

本试验旨在对竹鼠肠内容物中分离出的3株产纤维素酶枯草芽孢杆菌进行生物学特性研究和安全性评价。对3株受试菌进行生长曲线测定、抗生素敏感性试验、耐药基因检测、小鼠体内安全性试验以及耐酸、耐胆盐、自凝聚性、疏水性等特性测定。... 详细信息

本试验旨在对竹鼠肠内容物中分离出的3株产纤维素酶枯草芽孢杆菌进行生物学特性研究和安全性评价。对3株受试菌进行生长曲线测定、抗生素敏感性试验、耐药基因检测、小鼠体内安全性试验以及耐酸、耐胆盐、自凝聚性、疏水性等特性测定。结果表明:(1) GL-4、GL-5、GL-8 3株受试菌均生长快,1.5 h即可进入对数生长期、5 h即可达到最大生长量;(2)抗逆性强:3株受试菌在pH2.5的条件下存活率均达到65%以上、在胆盐浓度0.3%和0.5%的环境下仍能继续存活增殖;(3)自凝聚及疏水能力好:孵育到24 h,3株菌的自凝聚率均达到85%以上,GL-5和GL-8的疏水率均高于40%;(4) 3株受试菌对大部分抗生素敏感,对小鼠无毒副作用。GL-4、GL-5、GL-8 3株受试菌均具有优良的生物学特性,且安全性好,可作为畜禽微生态制剂良好的益生菌候选菌株。

关键词：枯草芽孢杆菌生物学特性安全性评价

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发酵酸鱼中乳酸菌的鉴定及特性分析

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中国酿造 2023年第3期42卷 95-100页

作者：韦珏刘金凤覃绍敏秦树英许力士林俊陈凤莲韦珊珊马玲陈童锦悦吴健敏广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

该研究以分离自酸鱼发酵后期的乳酸菌菌株LP224为研究对象,采用形态学观察、生理生化试验和分子生物学技术对其进行菌种鉴定,采用K-B药敏纸片扩散法和聚合酶链式反应(PCR)法对其耐药性和抗性基因进行检测,并研究其生长特性及耐受性。结... 详细信息

该研究以分离自酸鱼发酵后期的乳酸菌菌株LP224为研究对象,采用形态学观察、生理生化试验和分子生物学技术对其进行菌种鉴定,采用K-B药敏纸片扩散法和聚合酶链式反应(PCR)法对其耐药性和抗性基因进行检测,并研究其生长特性及耐受性。结果表明,菌株LP224被鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),其对头孢曲松、链霉素、环丙沙星、磺胺异噁唑、万古霉素、林可霉素等6类15种抗生素耐药,基因组DNA检测出ermC和tetG2种抗性基因,而细菌质粒未检测到抗性基因,说明该菌株相对安全。菌株LP224经55℃水浴处理30 min后存活率为35.06%;p H2.5环境下存活率为52.60%;0.3%胆盐浓度下存活率为31.67%,说明该菌株具有较强的耐热、耐酸、耐胆盐能力。

关键词：植物乳杆菌分离鉴定耐药性耐酸耐胆盐酸鱼

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羔羊STEC的耐药性、毒力基因和血清型分析

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新疆农业科学 2020年第10期57卷 1921-1930页

作者：张凌佟盼盼张毅马晓玉张萌萌刘璐瑶姚刚陈童锦悦苏战强新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

【目的】研究新疆羊源STEC的耐药性和毒力情况,评价羊源STEC在羊产业链饲养阶段的风险。【方法】从某规模化羊场随机采取2月龄羊的肛拭子样本,EC肉汤增菌后用MAC平板结合双重PCR(stx1,stx2)法分离鉴定STEC,用SMAC平板结合双重PCR(rfbE和... 详细信息

【目的】研究新疆羊源STEC的耐药性和毒力情况,评价羊源STEC在羊产业链饲养阶段的风险。【方法】从某规模化羊场随机采取2月龄羊的肛拭子样本,EC肉汤增菌后用MAC平板结合双重PCR(stx1,stx2)法分离鉴定STEC,用SMAC平板结合双重PCR(rfbE和fliC)法分离鉴定*** O157:H7;用K-B法做9类18种药的敏感试验,并用PCR检测相应的耐药基因;用PCR检测STEC的毒力基因(eae,ehxA,hlyA,stx1a,stx1c,stx1d,stx2a等),并检测是否“Top Six”和*** O157:H7血清型。【结果】被检的21只羊中,9只携带STEC(42.86%),其中1只羊还携带*** O157:H7;药敏试验显示仅有2株菌对头孢吡肟具有耐药性,对其他药均敏感;所有分离菌均携带stx1毒力基因,其毒力基因亚型以stx1a(60%)与stx1c(80%)为主,9株STEC不属于“Top Six”或O157血清型。【结论】该场羊源STEC的携带率较高,主要携带致病力较弱的stx1,有*** O157:H7,但是没有“Top Six”血清群;该场羊源STEC对目前的抗菌素普遍敏感,反映了其良好的养殖环境和较少的抗生素使用。

关键词：羊产志贺毒素大肠杆菌毒力基因亚型耐药性血清型

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新型阿卡斑病毒NSs蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备

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中国畜牧兽医 2024年第5期51卷 2015-2026页

作者：蔡畅陈赫威宋瑞鹏覃绍敏刘金凤秦树英孙倩陈童锦悦欧长波刘兴友马玲吴健敏广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室南宁530001 河南科技学院动物科技学院新乡453003 农业农村部(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室南宁530001 广西大学动物科学技术学院南宁530004 新乡学院生命科学与基础医学学院新乡453003

【目的】对新型阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)非结构蛋白(non-structura,NSs)进行生物信息学分析,进而制备抗多克隆抗体,为新型AKAV检测及功能研究提供必要材料。【方法】使用蛋白生物信息学在线分析网站,对新型AKAV NSs蛋白进行系统... 详细信息

【目的】对新型阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)非结构蛋白(non-structura,NSs)进行生物信息学分析,进而制备抗多克隆抗体,为新型AKAV检测及功能研究提供必要材料。【方法】使用蛋白生物信息学在线分析网站,对新型AKAV NSs蛋白进行系统分析。克隆NSs全长基因,利用大肠杆菌表达系统表达NSs重组蛋白,优化蛋白诱导条件并分析重组蛋白的可溶性;收获破碎菌体,经8 mol/L尿素变性、Ni 2+-NTA亲和层析纯化、透析及浓缩后进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定;将纯化的重组NSs蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;应用间接ELISA、Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)测定多克隆抗体效价及特异反应性。【结果】生物信息学分析表明,NSs蛋白由91个氨基酸残基构成,等电点为12.10,属于碱性蛋白,不稳定指数约为79.04,平均亲水性为指数为―0.059,为不稳定的亲水蛋白;无跨膜区和信号肽,属于非分泌蛋白。试验成功构建了NSs蛋白原核表达载体pET-32a-NSs,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定显示,成功表达重组NSs蛋白,分子质量为29.3 ku,主要以包涵体形式存在,与生物信息学分析结果一致;制备的多克隆抗体效价可达1∶16384000,Western blotting和IFA结果表明所制备抗体能够与NSs蛋白发生特异性反应,具有较好的特异性。【结论】试验成功获得纯化的新型AKAV NSs蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性;制备获得效价高、特异性好的多克隆抗体,为后续新型AKAV疫苗开发、检测及NSs蛋白功能研究提供了基础。

关键词：新型阿卡斑病毒(AKAV) NSs蛋白生物信息学原核表达多克隆抗体

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面向预防性维修的两种失效竞争下多状态系统可靠性模型

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系统工程理论与实践 2020年第3期40卷 807-816页

作者：陈童谢经伟海军工程大学管理工程与装备经济系武汉430033

针对装备系统在使用过程中存在退化失效与突发失效竞争的情况,以单个系统为研究对象,考虑单一维修台,采用随机检测策略,根据系统内部性能水平与外部冲击损伤等级分别采用三种不同类型的预防性维修,系统完全故障时进行换件维修,利用Phase... 详细信息

针对装备系统在使用过程中存在退化失效与突发失效竞争的情况,以单个系统为研究对象,考虑单一维修台,采用随机检测策略,根据系统内部性能水平与外部冲击损伤等级分别采用三种不同类型的预防性维修,系统完全故障时进行换件维修,利用Phase-type (PH)分布代替指数分布等典型分布,统一描述模型中各类时间变量分布,建立了通用性更好的系统可靠性模型,获得了系统的主要可靠性参数.最后通过算例验证了模型的适用性,并讨论了不同类型的预防性维修速率以及预防性维修阈值对系统可靠性参数的影响.

关键词：竞争失效多状态系统预防性维修可靠性 Phase-type分布

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基于PH分布的n中取κ系统可靠性模型研究

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系统工程理论与实践 2015年第1期35卷 260-266页

作者：陈童黎放狄鹏海军工程大学管理工程系武汉430033

本文以n中取k系统为研究对象,采用Phase-type(PH)分布代替指数分布等典型分布,假设部件在工作状态、储备状态和维修状态停留时间均为连续时间PH分布;建立了一种描述能力更强的系统可靠性解析模型,利用矩阵解析方法获得了系统稳态概率,... 详细信息

本文以n中取k系统为研究对象,采用Phase-type(PH)分布代替指数分布等典型分布,假设部件在工作状态、储备状态和维修状态停留时间均为连续时间PH分布;建立了一种描述能力更强的系统可靠性解析模型,利用矩阵解析方法获得了系统稳态概率,推导出系统稳态可用度、工作时间、平均故障间隔时间和维修台故障件到达率的解析表达式;并通过算例验证了模型的正确性和适用性,演示了给定n值后,k值变化对系统可靠性规律的影响.

关键词： n中取k系统可靠性 Phase-type分布

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纯电动公交时刻表和车辆排班计划整体优化

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同济大学学报（自然科学版） 2019年第12期47卷 1748-1755页

作者：滕靖林琳陈童同济大学道路与交通工程教育部重点实验室上海201804 同济大学城市交通研究院上海200092 上海电科智能系统股份有限公司上海200063

研究单线路的纯电动公交车辆运营时刻表和车辆排班计划的整体优化方法,以发车间隔平滑、使用车辆数少和充电费用低为目标建立多目标优化模型,考虑包括不同时段发车间隔范围、可用车辆数量的限制和纯电动公交续航里程约束在内的多个约束... 详细信息

研究单线路的纯电动公交车辆运营时刻表和车辆排班计划的整体优化方法,以发车间隔平滑、使用车辆数少和充电费用低为目标建立多目标优化模型,考虑包括不同时段发车间隔范围、可用车辆数量的限制和纯电动公交续航里程约束在内的多个约束.采用多目标粒子群算法进行求解,基于多目标优先级寻找模型的最优解集合.案例表明:和现有的运营计划相比,模型能够平滑发车间隔,减少使用车辆数,充分利用非高峰时段充电以降低充电费用.

关键词：纯电动公交公交时刻表车辆排班计划多目标粒子群算法

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融合自适应注意力的多尺度火灾检测算法

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北京理工大学学报 2024年第1期44卷 91-101页

作者：梁煜陈童张为天津大学微电子学院天津300072

针对实际场景下火灾检测准确度不高的现象,根据火灾自身特征提出了一种基于Anchor-free结构的火灾检测算法.将特征提取网络残差模块设计为多分支结构,并在其基础上嵌入根据火焰特征设计的自适应注意力模块,提取出更具表达力的火焰特征.... 详细信息

针对实际场景下火灾检测准确度不高的现象,根据火灾自身特征提出了一种基于Anchor-free结构的火灾检测算法.将特征提取网络残差模块设计为多分支结构,并在其基础上嵌入根据火焰特征设计的自适应注意力模块,提取出更具表达力的火焰特征.添加亚像素融合,利用高层特征丰富的通道信息增强多尺度特征的表达能力.设计特征增强模块强化最高层特征表示,更好地利用全局空间信息.引入自适应标签分配,强化网络对火焰特征的学习效果.利用改进后的GIoU Loss损失函数对边界框精细回归.该算法在自建数据集上的检测精度达到了94.9%,在公开数据集上也有较好的检测效果,且抗干扰能力强,适用于各种环境下的火灾检测,能够满足实际场景下火灾检测任务的需要.

关键词：深度学习火灾检测自适应注意力多尺度特征增强

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考虑不同维修效果的多状态可修系统可靠性模型

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兵工学报 2014年第9期35卷 1488-1494页

作者：狄鹏黎放陈童海军工程大学管理工程系湖北武汉430033

为了研究不同维修效果下多状态可修系统的可靠性模型,考虑修后恢复修前状态、维修效果较差和维修效果好3种不同维修效果,假设系统工作状态可以划分为完好和一般两类,系统工作时间和维修时间服从连续Phase-type分布,建立系统状态马尔可... 详细信息

为了研究不同维修效果下多状态可修系统的可靠性模型,考虑修后恢复修前状态、维修效果较差和维修效果好3种不同维修效果,假设系统工作状态可以划分为完好和一般两类,系统工作时间和维修时间服从连续Phase-type分布,建立系统状态马尔可夫转换的无穷小生成元矩阵,求得各状态稳态概率向量,给出了系统稳态可用度、稳态故障率的解析表达式。通过算例验证了该模型的有效性和适用性。

关键词：兵器科学与技术多状态可靠性维修效果 Phase-type分布

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