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三角帆蚌CypA基因的克隆及其在嗜水气单胞菌感染后的表达分析

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水生生物学报 2024年第5期48卷 859-866页

作者：夏虎雷婷杨品红刘良国余嘉张运生邓以国陈福艳陈秀荔贺欢乐湖南文理学院生命与环境科学学院湖南省水生生物资源沅江澧水监测站微生物技术创新团队环洞庭湖水产健康养殖及加工湖南省重点实验室常德415000 农业农村部中国(广西)-东盟水产种质资源综合开发与利用重点实验室(部省共建) 广西壮族自治区水产科学研究院南宁530021 五强溪镇农业综合服务中心怀化418000

为研究亲环蛋白A(Cyclophilin A,CypA)在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)免疫系统中的作用,研究利用PCR与RACE技术克隆获得三角帆蚌CypA基因全长cDNA序列(基因序列登录号:MN121742)。三角帆蚌CypA基因cDNA序列全长1237 bp,其5′非编码区(U... 详细信息

为研究亲环蛋白A(Cyclophilin A,CypA)在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)免疫系统中的作用,研究利用PCR与RACE技术克隆获得三角帆蚌CypA基因全长cDNA序列(基因序列登录号:MN121742)。三角帆蚌CypA基因cDNA序列全长1237 bp,其5′非编码区(UTR)长度为57 bp,3′非编码区长度为688 bp,三角帆蚌CypA基因的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)长度为492 bp,编码164个氨基酸,CypA蛋白质理论等电点为8.9,相对分子量为17.29 kD。在GenBank中进行同源序列检索,三角帆蚌CypA氨基酸序列与其他贝类CypA的相似性依次为池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)(99.39%)、青蛤(Cyclina sinensis)(77.44%)、菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)(78.05%)、近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)(78.66%)和大竹蛏(Solen grandis)(75.05%)。通过SWISS-MODEL预测三角帆蚌CypA含有8个β折叠和2个α螺旋,可能形成CypA的活性中心区域。利用MEGA 5.1软件将三角帆蚌CypA与其他物种CypA基因进行序列比对并构建系统进化树,分析发现三角帆蚌CypA与池蝶蚌的CypA聚为一支,其与池蝶蚌CypA具有最近的亲源关系。通过qRT-PCR检测CypA基因在三角帆蚌不同组织中表达,发现三角帆蚌性腺中CypA基因的表达量最高,肝脏、肾和鳃中的表达量次之。对三角帆蚌浸泡感染嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),CypA基因在肝脏、性腺、肠和鳃中的表达水平在感染72h先升高后降低,其表达量在性腺和鳃中6h最高,肝脏中12h达到峰值,肠中24h达到最高值,表明三角帆蚌感染嗜水气单胞菌后,可显著诱导CypA基因的表达。CypA基因在性腺中的表达量到达峰值的时间要早于肠与肝脏,且到达峰值时的相对表达量(14.91)也显著高于肝脏(9.89)、肠(9.78)和鳃(7.53),推测CypA在三角帆蚌性腺中具有防御细菌感染的重要作用,三角帆蚌性腺可能不仅具有生殖的功能,同时在免疫防御系统中也发挥着重要的作用。

关键词：亲环蛋白A 嗜水气单胞菌免疫应答三角帆蚌

广西地区凡纳滨对虾白斑综合征病毒同源重复区基因的比较分析

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病毒学报 2024年第1期40卷 115-124页

作者：童桂香谭红连杨明伟陈福艳吴铁军黄婷李莉萍雷爱莹韦信贤广西水产科学研究院/广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室南宁530021 广西水产畜牧学校南宁530021

为了解广西地区对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus, WSSV)分子变异特征,选取2010-2019年采自广西沿海地区的120份WSSV阳性凡纳滨对虾(Litopenarus vannamei)样品,进行同源重复区ORF75、ORF94和ORF125基因的扩增和测序,并比... 详细信息

为了解广西地区对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus, WSSV)分子变异特征,选取2010-2019年采自广西沿海地区的120份WSSV阳性凡纳滨对虾(Litopenarus vannamei)样品,进行同源重复区ORF75、ORF94和ORF125基因的扩增和测序,并比较分析其重复单元变化差异(Variable number of tandem repeats, VNTR)及单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms, SNPs)。结果显示,ORF75的重复单元(Repeat units, RUs)是45bp(RUs-45 bp)和102 bp(RUs-102 bp),RUs数目存在3、4、6、7、8、9类型,最多的是6 RUs型;ORF94的RUs是54bp(RUs-54 bp),RUs数目有0、1、2、3、4、6、8、9、11、12类型,最多的是2 RUs型;ORF125的RUs前两个是72 bp(RUs-72 bp),第3个之后的RUs为69 bp(RUs-69 bp),RUs有3、5、6、8、9类型,最多的是6 RUs型。SNPs分析结果表明,ORF75的RUs-45 bp的第3、15、30、42、44位存在多态性,RUs-102 bp的第83位存在多态性;ORF94的RUs-54 bp的第48位具有多态性,为G、T或C;ORF125的RUs-72 bp不存在多态性,RUs-69 bp(从第1个到倒数第2个)的第2、12、19、22、37、40、48、53、60、63位具有多态性,第2位为T/C,12和22位为G/T,19位为G/A,37、40、48、53和63位为A/G,60位为C/T,出现较多的位点是第12、22、37、60、63位,其中第60、63位多态性最为普遍。结果表明,WSSV广西株同源重复区存在较大变异,序列的RUs数目和SNP存在多样性。

关键词：凡纳滨对虾白斑综合征病毒同源重复区基因序列分析

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卵形鲳鲹细菌性病害快速诊断与防治初探

卵形鲳鲹细菌性病害快速诊断与防治初探

作者：陈福艳广西大学

学位级别：硕士

近年来随着卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)养殖规模不断扩大,卵形鲳鲹的养殖逐渐出现抗病能力下降,病害发生频繁等问题,病害问题成为制约该产业健康发展的瓶颈问题。为了了解广西养殖卵形鲳鲹病害发生情况及提高病害防治能力,开展几方面... 详细信息

近年来随着卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)养殖规模不断扩大,卵形鲳鲹的养殖逐渐出现抗病能力下降,病害发生频繁等问题,病害问题成为制约该产业健康发展的瓶颈问题。为了了解广西养殖卵形鲳鲹病害发生情况及提高病害防治能力,开展几方面的研究并得出结果如下： 1.2012年对广西沿海卵形鲳鲹养殖区进行病害调查,结果表明发生细菌病、寄生虫病、神经坏死病毒病和肝胆综合症,共分离保种7种共18株菌,其中创伤弧菌5株、哈氏弧菌4株、海豚链球菌3株、副溶血弧菌2株、费尼斯弧菌1株、巴西弧菌1株、美人发光杆菌2株;研究了卵形鲳鲹临床病害(细菌性肠炎、赤皮、寄生虫病和肝胆综合症等)的防治方法,具有临床应用意义。 2.采用分子生物学检测中的双重PCR检测方法,建立创伤弧菌和哈氏弧菌的双重PCR快速检测方法。该方法根据创伤弧菌GenBank数据库中的特异性基因溶细胞毒素序列设计引物,哈氏弧菌根据toxR基因序列设计引物,两对引物大小分别为128bp和211bp,可检测创伤弧菌最低浓度为12cfu/m1、哈氏弧菌最低浓度为18cfu/ml,具有良好的特异性、敏感性、快速、省时和省力的优点,具有一定的临床应用性。 3.通过8种药物对卵形鲳鲹稚鱼的毒性试验,表明各种药物安全浓度分别为：高锰酸钾为0.5mg/L、癸甲溴铵复合戊二醛为12.64mg/L、聚维酮碘为38.64mg/L、二溴海因为4.59mg/L、二氧化氯为21.77mg/L、伊维菌素为5.01mg/L、氯氰菊酯为0.044mg/L、伊维菌素和印楝提取物为2.06mg/L。鉴于几种药物对卵形鲳鲹的敏感性及毒性作用大小,建议卵形鲳鲹选择聚维酮碘、二溴海因、二氧化氯、癸甲溴铵复合戊二醛、伊维菌素及伊维菌素和印楝提取物作为病害防治用药,而慎用氯氰菊酯和高猛酸钾。

关键词：卵形鲳鲹细菌病快速诊断药敏毒性病害防治

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双棘黄姑鱼源致病发光杆菌的分离与鉴定

西南农业学报 2022年第6期35卷 1462-1469页

作者：黄婷陈福艳张彬黎铭林勇李莉萍童桂香唐瞻杨韦信贤蒋伟添广西壮族自治区水产科学研究院/广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室南宁530021 广西北海市海城区海洋局广西北海536000

【目的】分离鉴定双棘黄姑鱼(Protonibea diacanthus)源致病发光杆菌,为查明引起双棘黄姑鱼出现大批量死亡的病因及科学指导防控该病的规范用药提供参考依据。【方法】对从广西北海市铁山港网箱养殖发病双棘黄姑鱼肾脏中分离到的菌株(编... 详细信息

【目的】分离鉴定双棘黄姑鱼(Protonibea diacanthus)源致病发光杆菌,为查明引起双棘黄姑鱼出现大批量死亡的病因及科学指导防控该病的规范用药提供参考依据。【方法】对从广西北海市铁山港网箱养殖发病双棘黄姑鱼肾脏中分离到的菌株(编号20210120)进行人工感染试验,确定其是否为双棘黄姑鱼致病菌;并对该菌株进行形态学观察、多基因(gapA、topA、mreB、ftsZ、gyrB和16S rRNA)序列分析及药敏试验。【结果】分离菌株与托鲁尼发光杆菌(Photobacterium toruni)16S rRNA序列在系统发育进化树上聚类为一支,其序列相似性达99.93%,与5个管家基因(gyrB、gapA、topA、ftsZ和mreB)序列的相似性分别为99.50%、99.86%、100.00%、99.83%和99.44%,因此确定菌株20210120为托鲁尼发光杆菌。人工感染双棘黄姑鱼病鱼出现与自然发病相同的病症,且再次从其肾脏中分离到与自然发病相同的细菌。药敏试验结果表明,菌株20210120对恩诺沙星、氧氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、头孢氨苄、链霉素和庆大霉素7种药物敏感。结合农业农村部《水产养殖用药明白纸》文件中批准使用的药物目录,建议选用恩诺沙星对双棘黄姑鱼托鲁尼发光杆菌进行防治。【结论】托鲁尼发光杆菌是引起广西北海双棘黄姑鱼发病死亡的病原菌,实际生产中可考虑将恩诺沙星、氧氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、头孢氨苄、链霉素和庆大霉素7种药物(尤其是恩诺沙星)作为托鲁尼发光杆菌引起双棘黄姑鱼相关疾病的防治用药。

关键词：双棘黄姑鱼托鲁尼发光杆菌分离鉴定 16S rRNA 药敏试验

刺激隐核虫感染卵形鲳鲹血细胞及血清生化指标的影响

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广西水产科技 2017年第2期 3-9页

作者：陈福艳广西水产科学研究院广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室

在实验室条件下,用刺激隐核虫（Cryptocaryon irritans）人工感染健康卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）,然后观察卵形鲳鲹血细胞及血清生化指标的变化。结果表明,卵形鲳鲹感染后血红细胞数量极显著降低（P〈0.01）,白细胞数量显著增加（P... 详细信息

在实验室条件下,用刺激隐核虫（Cryptocaryon irritans）人工感染健康卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）,然后观察卵形鲳鲹血细胞及血清生化指标的变化。结果表明,卵形鲳鲹感染后血红细胞数量极显著降低（P〈0.01）,白细胞数量显著增加（P〈0.05）,红细胞长径显著增加（P〈0.05）,而其余白细胞的长径和短径略有增加,但差异不显著（P〉0.05）;感染后血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）含量显著降低（P〈0.01）;谷草比谷丙（AST/ALT）升高,甘油三酯（TG）、钠Na、磷P和钾K极显著增加（P〈0.01）;总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）和球蛋白（GLB）显著升高（P〈0.05）;而白蛋白/球蛋白（ALB/GLO）、总胆固醇（TCH）和钙Ca略有增加,但不显著（P〉0.05）。可见卵形鲳鲹感染刺激隐核虫后血细胞数量和血清生化指标发生不同程度的变化。

关键词：刺激隐核虫卵形鲳鲹血细胞血清生化指标

致病性鮰爱德华氏菌药敏及中草药体外抑菌作用研究

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水产科技情报 2010年第6期37卷 282-287页

作者：张彬黄婷陈明陈福艳雷爱莹梁万文广西水产研究所鱼病研究室南宁530021

采用琼脂扩散法和二倍稀释法测定了29种抗生素和10种中草药及其组合对致病性鮰爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)的抑菌作用。结果表明:病原菌对29种抗菌类药物中的头孢克洛、复达欣、头孢噻吩、先锋必、氨曲南、恩诺沙星、头孢拉定、... 详细信息

采用琼脂扩散法和二倍稀释法测定了29种抗生素和10种中草药及其组合对致病性鮰爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)的抑菌作用。结果表明:病原菌对29种抗菌类药物中的头孢克洛、复达欣、头孢噻吩、先锋必、氨曲南、恩诺沙星、头孢拉定、头孢克肟、阿莫西林、新生霉素、先锋Ⅴ、氧氟沙星、呋喃妥因、头孢呋肟、头孢氨苄和羧苄青霉素等16种敏感,对克拉霉素、菌必治、红霉素、林可霉素、多粘菌素B、罗红霉素等6种表现出耐药性。10种中草药制剂对鮰爱德华氏菌均有不同程度的抑菌作用,其中黄芩的抑菌作用最强,它对鮰爱德华氏菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度分别为3.75mg/mL和7.50mg/mL,抑菌圈平均直径达29.17±1.60mm;连翘、大黄、蒲公英、金银花、黄柏有较强的抑菌作用,MIC为7.50～15.0mg/mL,抑菌圈平均直径均在20mm以上;而龙胆草表现出较弱的抑菌作用。试验中所选15组由2种中草药组合的复方制剂,大部分具有协同作用,少数药物配伍后可能因拮抗而抵消作用。

关键词：中草药鮰爱德华氏菌药敏试验抑菌

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罗氏沼虾的越冬管理及亲虾培育

罗氏沼虾的越冬管理及亲虾培育

投喂乙醇假丝酵母对罗非鱼生长、免疫和肠道菌群的影响

作者：陈福艳广西水产研究所

罗氏沼虾作为世界淡水虾养殖对象之一,在我国经过20多年的发展,特别是近10年全国兴起大规模养殖罗氏沼虾之后,各地育苗场也如雨后春笋般建立起来。随着各地虾苗流通的泛滥,造成疾病相互传染和种质的混杂,出现罗氏沼虾种质退化、个体变...

罗氏沼虾作为世界淡水虾养殖对象之一,在我国经过20多年的发展,特别是近10年全国兴起大规模养殖罗氏沼虾之后,各地育苗场也如雨后春笋般建立起来。随着各地虾苗流通的泛滥,造成疾病相互传染和种质的混杂,出现罗氏沼虾种质退化、个体变小、抗病力弱、各种致命性的急性或慢性病的快速传播,在一定程度上影响了罗氏沼虾的养殖。针对这些情况,我所罗氏沼虾良种场加大对罗氏沼虾种质的研究,注重对亲虾来源和性状的挑选,进行多种杂交试验,已繁育出新一代优质罗氏沼虾。在此,笔者对做好亲虾的越冬保种和产前强化培育做一总结,以期为罗氏沼虾的健康养殖积累经验。

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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南方水产科学 2021年第5期17卷 10-17页

作者：廖庆钊陈福艳覃雅黄婵婵黄罗冬申佩弘广西大学广西南宁530005 广西水产科学研究院广西南宁530021

为探究乙醇假丝酵母(Candida ethanolica GXU01)在罗非鱼养殖中的益生潜能,为罗非鱼可持续养殖寻找生态友好的饲用添加菌,该研究将乙醇假丝酵母作为饲料添加菌饲喂尼罗罗非鱼(Oreochroms niloticus),通过测定罗非鱼的生长性能、肠道消... 详细信息

为探究乙醇假丝酵母(Candida ethanolica GXU01)在罗非鱼养殖中的益生潜能,为罗非鱼可持续养殖寻找生态友好的饲用添加菌,该研究将乙醇假丝酵母作为饲料添加菌饲喂尼罗罗非鱼(Oreochroms niloticus),通过测定罗非鱼的生长性能、肠道消化酶、血清非特异性免疫指标、肠道微生物群落结构以及用无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)对罗非鱼进行攻毒试验,全面评价了乙醇假丝酵母对罗非鱼生长及其免疫力的影响。结果表明,摄食乙醇假丝酵母可以使罗非鱼的生长性能、消化酶活性、血清溶菌酶活性和补体C3含量显著提高(P<0.05)。投喂乙醇假丝酵母后,罗非鱼肠道中梭杆菌门、鲸杆菌属(Cetobacterium)和艾克曼菌属(Akkermansia)等有益菌群的丰度显著上调,蓝细菌门大幅减少。攻毒试验中,摄食酵母饲料的罗非鱼成活率增加26.66%。研究表明乙醇假丝酵母对罗非鱼肠道消化能力和免疫抗病能力均有促进作用。

关键词：罗非鱼乙醇假丝酵母肠道菌群益生菌

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以水蚯蚓为饵料的美洲鳗鲡工厂化养殖研究

中国水产 2022年第10期563卷 78-81页

作者：陈福艳李旻林佳豪陶冶李昭信廖威梁万文黎建斌广西壮族自治区水产科学研究院广西遗传育种与健康养殖遗传重点试验室广西中南渔业有限公司广西壮族自治区农业农村厅广西职业技术学院

美洲鳗是近年来国内新兴的养殖品种,随着市场需求量增加,养殖地域出现“东鳗西移”的趋势。本团队结合广西当地实际开展了美洲鳗工厂化养殖试验,用甘蔗制糖废弃滤泥养殖水蚯蚓,水蚯蚓再作为工厂化养殖美洲鳗的饵料,有效降低了生产成本,... 详细信息

美洲鳗是近年来国内新兴的养殖品种,随着市场需求量增加,养殖地域出现“东鳗西移”的趋势。本团队结合广西当地实际开展了美洲鳗工厂化养殖试验,用甘蔗制糖废弃滤泥养殖水蚯蚓,水蚯蚓再作为工厂化养殖美洲鳗的饵料,有效降低了生产成本,实现了资源综合利用。

关键词：工厂化养殖水蚯蚓美洲鳗鲡养殖品种甘蔗制糖资源综合利用生产成本饵料