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抗体靶向合成型平滑肌细胞MR探针合成及体外成像的实验研究

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江苏医药 2014年第10期40卷 1130-1133页

作者：陈相汛马占龙尚松安孟欢施海彬南京医科大学第一附属医院放射科江苏省210029 东南大学分子影像与功能影像重点实验室

目的探讨合成型平滑肌细胞单克隆抗体(SMemb)超微超顺磁性MR分子探针作为抗体靶向特异性探针体外MR成像的可行性。方法采用EDC/NHS化学偶联方法将SMemb与USPIO颗粒相结合,并测定其电子粒径、水合粒径、Zeta电位及弛豫效能等表征特性。SM... 详细信息

目的探讨合成型平滑肌细胞单克隆抗体(SMemb)超微超顺磁性MR分子探针作为抗体靶向特异性探针体外MR成像的可行性。方法采用EDC/NHS化学偶联方法将SMemb与USPIO颗粒相结合,并测定其电子粒径、水合粒径、Zeta电位及弛豫效能等表征特性。SMemb标记探针(SMemb-USPIO)为实验组,未标记USPIO探针(USPIO)为对照组,PBS溶液为空白组。实验组及对照组探针分别与不同铁浓度探针恒温孵育,普鲁士蓝染色鉴定细胞内铁,确定最佳标记浓度。实验组和对照组探针与合成型VSMC共孵育,在7.0TMRI行体外MRI T2WI成像。结果抗体靶向探针与USPIO颗粒磁性相似,稳定性高。实验组及对照组各浓度间蓝染率有统计学差异(P<0.05)。合成型平滑肌细胞体外MR成像,实验组MR信号较对照组及空白组降低明显;随着细胞数的增加,实验组不同细胞浓度T2信号逐渐下降(P<0.01)。结论采用EDC/NHS方法制备抗体靶向探针及利用该探针进行体外MR成像是可行的。

关键词：合成型平滑肌细胞超微超顺磁性氧化铁单克隆抗体磁共振成像

靶向动脉粥样硬化斑块内腱糖蛋白-C表达磁共振体内成像的实验研究

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中华心血管病杂志 2016年第4期44卷 342-347页

作者：孟欢马占龙严海浪陈相汛尚松安余静宋佳成施海彬南京医科大学附属南京儿童医院放射科 210029 南京医科大学第一附属医院放射科南京医科大学附属江苏盛泽医院放射科苏北人民医院放射科

目的观察腱糖蛋白-C（TN-C）在动脉粥样硬化斑块中的表达变化,并探讨磁共振靶向TN-C体内成像的可行性.方法雄性载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠,10周龄,采用高脂饮食法建立主动脉粥样硬化模型,其中靶向探针组8只,对照组6只.高脂饲... 详细信息

目的观察腱糖蛋白-C（TN-C）在动脉粥样硬化斑块中的表达变化,并探讨磁共振靶向TN-C体内成像的可行性.方法雄性载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠,10周龄,采用高脂饮食法建立主动脉粥样硬化模型,其中靶向探针组8只,对照组6只.高脂饲养14周后,使用7.0T小动物MR成像仪（7.0T micro-MRI）观察主动脉斑块情况;采用苏木素伊红染色、油红O染色观察主动脉血管壁病理学改变,免疫组织化学检测TN-C在主动脉粥样硬化斑块内的表达情况;化学耦联法合成抗体靶向TN-C的磁共振成像探针（抗TN-C-USPIO探针）,并通过尾静脉注入靶向探针组小鼠体内,对照组注射单纯超小超顺磁性氧化铁颗粒（USPIO）,并于注射8h后行磁共振扫描,观察两组小鼠腹主动脉内膜信号变化.成像后立即取两组小鼠腹主动脉作为标本,行普鲁士蓝染色,观察斑块内铁颗粒的沉积.结果开始建模14周后,磁共振成像可见小鼠腹主动脉壁增厚,T1WI、PDWI为稍高信号,T2WI为稍低信号,苏木素伊红染色可见动脉内膜明显增厚,油红O染色证实为脂质沉积,免疫组织化学示TN-C在动脉粥样硬化斑块内高表达.靶向探针组小鼠注射抗TN-C-USPIO探针8h后,可见增厚的血管壁T2WI信号较注射前明显降低（△OD值=4.78±1.41,=9.59,P＜0.05）,而对照组注射单纯USPIO前后则无明显变化（△OD值=1.45±1.01,t=1.93,P＞0.05）;普鲁士蓝染色结果示靶向探针组小鼠腹主动脉内粥样硬化斑块内可见蓝染颗粒（铁颗粒沉积）,而对照组则蓝染极少.结论 TN-C在动脉粥样硬化斑块内高表达,而磁共振靶向TN-C体内成像可显示这一变化,为进一步开展斑块内磁共振分子影像学研究提供了依据.

关键词：动脉粥样硬化磁共振成像腱糖蛋白

原肌球蛋白-4抗体靶向标记合成型血管平滑肌细胞MR体外成像的实验研究

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中华放射学杂志 2013年第12期47卷 1132-1138页

作者：尚松安马占龙陈相汛陈宇辰安艳丽滕皋军东南大学附属中大医院放射科江苏省分子与功能影像重点实验室南京210009

目的分离、培养并鉴定合成型血管平滑肌细胞（VSMC）,检测靶向标记原肌球蛋白-4（TPM-4）,并采用免疫分子成像技术构建TPM-4抗体靶向型MRI探针,探讨靶向合成型VSMC体外MR成像的可行性.方法体外分离培养合成型VSMC与内皮细胞（EC）,采... 详细信息

目的分离、培养并鉴定合成型血管平滑肌细胞（VSMC）,检测靶向标记原肌球蛋白-4（TPM-4）,并采用免疫分子成像技术构建TPM-4抗体靶向型MRI探针,探讨靶向合成型VSMC体外MR成像的可行性.方法体外分离培养合成型VSMC与内皮细胞（EC）,采用SMA、Ⅷ因子免疫细胞化学染色方法分别行细胞鉴定;免疫荧光双重染色验证合成型VSMC高表达TPM-4蛋白;应用化学交联法合成靶向TPM-4 MRI分子探针,TPM-4标记探针（TPM4-USPIO）为实验探针组、IgG标记探针（IgG-USPIO）为阴性探针组、未标记探针（USPIO）为对照探针组,PBS为空白组,实验组探针分别与合成型VSMC及EC共孵育,阴性组、对照组探针与VSMC EC共孵育.采用普鲁士蓝染色分析探针特异靶向性,噻唑蓝（MTT）比色法分析不同铁浓度条件下（含铁浓度梯度分别为0、5、10、20、40 μg/ml）对细胞体外生物学活性的影响;采用7.0TMR扫描仪检测探针磁学特性,并对不同探针组标记的合成型VSMC（n=3）以及1×103、5×103、1 × 104、5 ×104、1×105个/管（n=3）不同浓度梯度TPM4-USPIO标记细胞行体外细胞T2WI成像分析.T2信号数据以及MTT结果数据组间比较先行单因素方差分析（ANOVA）,若差异有统计学意义,再用LSD法行组间两两比较.结果成功分离并培养了合成型VSMC,合成型VSMC中TPM-4呈高表达;成功构建TPM-4、IgG抗体标记靶向型探针,TPM4-USPIO、IgG-USPIO探针弛豫率分别为0.0350×106、0.0316×106 mol/s,同USPIO（0.0292×106 mol/s）磁学特性相似,稳定性高;普鲁士蓝染色结果显示实验组探针与合成型VSMC呈特异性结合,与EC无特异性结合,MTT结果表明铁浓度≤40 μg/ml范围内对合成型VSMC增殖活性无影响;实验探针组标记细胞T2WI呈低信号,较阴性探针组、对照探针组及空白组信号变化明显,T2弛豫时间为（116.67 ±2.08） ms,明显短于以上3组探针[（217.67±2.52）、（219.33±2.08）及（205.33±1.53） ms],差异具有统计学意义（F=1670.43,,＜0.01）;1×103、1 ×104、1×105 3种浓度细胞之间T2弛豫时间分别为（184.33±2.08）、（169.67±1.15）、（116.67±2.08） ms,差异具有统计学意义（F=684.35,P＜0.01）,T2 WI信号梯度减低,同一数量级细胞之间T2值变化差异无统计学意义（P值均＞0.05）.结论血小板衍化生长因子（PDGF）-BB处理后可获得合成型VSMC,TPM4-USPIO探针能够高效、靶向性结合合成型VSMC,高场强MRI T2WI信号变化显著,为血管性疾病在体靶向合成型VSMC的相关分子影像学研究提供了新的切入点.

关键词：肌,平滑,血管磁共振成像细胞

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合成型血管平滑肌细胞的分离、培养及鉴定

中华实验外科杂志 2013年第12期30卷 2563-2565页

作者：尚松安陈相汛安艳丽丁洁滕皋军马占龙江苏省分子与功能影像重点实验室东南大学附属中大医院放射科南京210009

目的探讨合成型血管平滑肌细胞（VSMCs）的分离、培养及鉴定方法.方法采用改良Ⅱ型胶原酶消化法分离、体外培养SD大鼠胸主动脉VSMCs,胰酶消化传代获取第3代细胞,分为空白组与血小板衍生因子-BB（PDGF-BB）处理组.噻唑蓝（MTT）比色法... 详细信息

目的探讨合成型血管平滑肌细胞（VSMCs）的分离、培养及鉴定方法.方法采用改良Ⅱ型胶原酶消化法分离、体外培养SD大鼠胸主动脉VSMCs,胰酶消化传代获取第3代细胞,分为空白组与血小板衍生因子-BB（PDGF-BB）处理组.噻唑蓝（MTT）比色法及细胞划痕实验分别检测分析细胞增殖活性与迁移活性;倒置显微镜、结晶紫染色观察形态学改变;免疫细胞化学染色鉴定VSMCs并测定分析收缩型标记蛋白α-平滑肌肌动蛋白（SMA）以及合成型标记蛋白平滑肌胚胎型肌球蛋白重链（SMemb）、原肌球蛋白-4（TPM-4）表达量的变化.结果空白组VSMCs呈典型“谷峰状”生长,SMA细胞免疫荧光染色及免疫细胞化学染色阳性率≥95％;PDGF-BB处理组VSMCs由收缩型长梭状形态向合成型扁平状形态转化（P＜0.05）,VSMCs增殖及迁移活性分别增加11.48％、1.92倍（P＜0.05）;收缩型标记蛋白SMA表达下降（P＜0.05）,合成型标记蛋白SMemb及TPM-4表达均增加（P＜0.05）.结论 PDGF-BB处理后,VSMCs由收缩表型向合成表型转化,增殖迁移活性增加,收缩型标记蛋白表达下降、合成型标记蛋白呈现高表达,表现为高合成型VSMCs的特点.

关键词：血管平滑肌细胞细胞表型血小板衍生因子细胞培养

3T MR ADC值与视网膜母细胞瘤不良预后因素的相关性研究

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川北医学院学报 2019年第5期34卷 497-499页

作者：陈相汛蒋敏波赵萌南京医科大学第一附属医院放射科

目的:探讨3TMRDWI表观扩散系数(ADC)与视网膜母细胞瘤(RB)不良预后因素的相关性。方法:回顾性分析24例RB患儿MR弥散加权扫描的影像资料,分析ADC值与患儿存活时间、肿瘤大小、双眼发病、生长方式及视神经侵犯的相关性。结果:24例患儿ADC... 详细信息

目的:探讨3TMRDWI表观扩散系数(ADC)与视网膜母细胞瘤(RB)不良预后因素的相关性。方法:回顾性分析24例RB患儿MR弥散加权扫描的影像资料,分析ADC值与患儿存活时间、肿瘤大小、双眼发病、生长方式及视神经侵犯的相关性。结果:24例患儿ADC平均值为(0.74±0.11)mm2/s,且与手术化疗后存活时间、肿瘤大小、双眼发病及视神经侵犯有相关(P0.05)。结论:ADC值与公认的RB不良预后因素有一定相关性,可作为RB预后评估的新手段。

关键词：视网膜母细胞瘤表观扩散系数磁共振成像

不同方法对血管平滑肌细胞表型特性影响的实验研究

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中国心血管病研究 2013年第10期11卷 794-797,I0001,I0002页

作者：尚松安马占龙陈相汛安艳丽丁洁滕皋军江苏省分子影像与功能影像重点实验室东南大学附属中大医院放射科南京市210009

目的通过两种分离方法体外获取血管平滑肌细胞（VSMCs）,比较细胞表型差异及生物学特性,为血管性疾病研究提供精确实验基础.方法分别采用组织块法及酶消化法获取SD大鼠胸主动脉VSMCs,分为组织块组与酶消化组.倒置显微镜、结晶紫染色... 详细信息

目的通过两种分离方法体外获取血管平滑肌细胞（VSMCs）,比较细胞表型差异及生物学特性,为血管性疾病研究提供精确实验基础.方法分别采用组织块法及酶消化法获取SD大鼠胸主动脉VSMCs,分为组织块组与酶消化组.倒置显微镜、结晶紫染色观察形态学改变并定量分析；MTT比色法及TransweU细胞迁移实验分别检测分析细胞增殖与迁移活性；流式细胞周期测定细胞周期分布；细胞免疫荧光染色鉴定VSMCs并测定分析收缩型标记蛋白α-平滑肌肌动蛋白（SMA）以及合成型标记蛋白平滑肌胚胎型肌球蛋白重链（SMemb）、原肌球蛋白-4（TPM-4）表达量的变化.结果两组细胞SMA细胞免疫荧光染色阳性率≥95％,细胞呈现谷峰状结构生长.组织块组与酶消化组两组细胞长径径值分别为（95.10±16.23）μm和（114.67±15.92）μm.与酶消化组相比,组织块组细胞增殖及迁移活性分别增加23.04％和1.54倍（P＜0.05）,S＋G2期所占比例增加49.68％（P＜0.05）,SMA蛋白表达量下降（P＜0.05）,SMemb及TPM-4蛋白表达均增加（P＜0.05）.结论组织块法获取细胞多以合成表型为主,酶消化法则主要呈收缩表型.伴随细胞形态学、增殖及迁移活性、表型特异性蛋白表达等不同改变,两种细胞获取方法可为不同目的研究提供精确的体外模型.

关键词：血管平滑肌细胞表型转化细胞培养

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儿童后颅窝肿瘤的MRI影像特征

江苏医药 2016年第20期42卷 2196-2199,F0003页

作者：赵萌蒋敏波陈相汛陆超胡毓华唐文伟南京医科大学第一附属医院放射科江苏省210029 南京医科大学第一附属医院儿科江苏省210029 南京医科大学附属南京儿童医院放射科

目的探讨儿童后颅窝肿瘤的MRI影像特征。方法回顾性分析33例经病理学证实的后颅窝肿瘤患儿的MRI影像学表现。其中,髓母细胞瘤18例,毛细胞型星形细胞瘤8例,室管膜瘤3例,脉络丛乳头状癌、非典型畸胎瘤/横纹肌样瘤、皮样囊肿伴感染、脑膜瘤... 详细信息

目的探讨儿童后颅窝肿瘤的MRI影像特征。方法回顾性分析33例经病理学证实的后颅窝肿瘤患儿的MRI影像学表现。其中,髓母细胞瘤18例,毛细胞型星形细胞瘤8例,室管膜瘤3例,脉络丛乳头状癌、非典型畸胎瘤/横纹肌样瘤、皮样囊肿伴感染、脑膜瘤各1例。结果MRI检查显示,儿童后颅窝肿瘤好发于中线区。髓母细胞瘤以实性成分为主,增强扫描实性成分呈中度到明显强化;肿瘤实质扩散加权成像(DWI)序列呈高信号,表观扩散系数(ADC)图为低信号,ADC值为(0.68±0.05)×10-3 mm^2/s。毛细胞型星形细胞瘤实性成分DWI序列呈低信号,ADC图为高信号,ADC值为(1.80±0.03)×10^(-3) mm2/s。室管膜瘤为实性或囊实性肿块,增强后呈囊性改变,DWI序列及ADC图肿瘤实质信号强度介于髓母细胞瘤与毛细胞型星形细胞瘤之间。结论通过对MRI多序列扫描的综合分析,儿童后颅窝肿瘤术前一般可明确诊断。

关键词：后颅窝肿瘤磁共振成像儿童

靶向动脉粥样硬化斑块内腱糖蛋白－C表达磁共振体内成像的实验研究

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中华心血管病杂志（网络版） 2016年第4期44卷 E1-E1页

作者：孟欢马占龙严海浪陈相汛尚松安余静宋佳成施海彬南京医科大学附属南京儿童医院放射科南京医科大学第一附属医院放射科南京医科大学附属江苏盛泽医院放射科南京医科大学第一附属医院放射科苏北人民医院放射科南京医科大学第一附属医院放射科南京医科大学第一附属医院放射科南京医科大学第一附属医院放射

目的观察腱糖蛋白－C(TN－C)在动脉粥样硬化斑块中的表达变化,并探讨磁共振靶向TN－C体内成像的可行性。方法雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE－/－)小鼠,10周龄,采用高脂饮食法建立主动脉粥样硬化模型,其中靶向探针组8只,对照组6只。高脂... 详细信息

目的观察腱糖蛋白－C(TN－C)在动脉粥样硬化斑块中的表达变化,并探讨磁共振靶向TN－C体内成像的可行性。方法雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE－/－)小鼠,10周龄,采用高脂饮食法建立主动脉粥样硬化模型,其中靶向探针组8只,对照组6只。高脂饲养14周后,使用7.0T小动物MR成像仪(7.0T micro－MRI)观察主动脉斑块情况；采用苏木素伊红染色、油红O染色观察主动脉血管壁病理学改变,免疫组织化学检测TN－C在主动脉粥样硬化斑块内的表达情况；化学耦联法合成抗体靶向TN－C的磁共振成像探针(抗TN－C－USPIO探针),并通过尾静脉注入靶向探针组小鼠体内,对照组注射单纯超小超顺磁性氧化铁颗粒(USPIO),并于注射8 h后行磁共振扫描,观察两组小鼠腹主动脉内膜信号变化。成像后立即取两组小鼠腹主动脉作为标本,行普鲁士蓝染色,观察斑块内铁颗粒的沉积。结果开始建模14周后,磁共振成像可见小鼠腹主动脉壁增厚,T1WI、PDWI为稍高信号,T2WI为稍低信号,苏木素伊红染色可见动脉内膜明显增厚,油红O染色证实为脂质沉积,免疫组织化学示TN－C在动脉粥样硬化斑块内高表达。靶向探针组小鼠注射抗TN－C－USPIO探针8 h后,可见增厚的血管壁T2WI信号较注射前明显降低(ΔOD值＝4.78±1.41,t＝9.59,P0.05)；普鲁士蓝染色结果示靶向探针组小鼠腹主动脉内粥样硬化斑块内可见蓝染颗粒(铁颗粒沉积),而对照组则蓝染极少。结论 TN－C在动脉粥样硬化斑块内高表达,而磁共振靶向TN－C体内成像可显示这一变化,为进一步开展斑块内磁共振分子影像学研究提供了依据。

关键词：动脉粥样硬化磁共振成像腱糖蛋白

交感神经系统在肝硬化及其并发症中的作用研究进展

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中国医学科学院学报 2024年第1期46卷 128-134页

作者：陈相林丁珺程翅喻田遵义医科大学附属医院麻醉科贵州遵义563000 遵义医科大学麻醉与器官保护基础研究省级重点实验室贵州遵义563000

交感神经系统(SNS)在维持器官正常功能和疾病发生发展中起着重要作用。目前研究发现交感神经与肝硬化、肝硬化心肌病和肝肾综合征(HRS)的发生发展密切相关,SNS也许可作为肝脏相关疾病的治疗靶点。为了深入理解交感神经在肝硬化及其并发... 详细信息

交感神经系统(SNS)在维持器官正常功能和疾病发生发展中起着重要作用。目前研究发现交感神经与肝硬化、肝硬化心肌病和肝肾综合征(HRS)的发生发展密切相关,SNS也许可作为肝脏相关疾病的治疗靶点。为了深入理解交感神经在肝硬化及其并发症的作用,本文综述了交感神经在肝硬化、肝硬化心肌病和HRS中的作用研究进展,以此为治疗肝硬化及其并发症提供新思路。

关键词：交感神经肝硬化进展机制