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骨髓间充质干细胞旁分泌因子治疗重症急性胰腺炎的潜能

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生物医学工程学杂志 2015年第1期32卷 245-248页

作者：陈珂玲(综述) 周总光(综述) 周斌(综述) 李园(审校) 四川大学生物治疗国家重点实验室消化外科研究室成都610041

骨髓间充质干细胞(BMSC)移植是重症急性胰腺炎(SAP)治疗的研究热点。但在临床应用中,该治疗方式却遇到了诸多技术及伦理问题。BMSC的旁分泌因子具有与细胞移植同样的疗效,且可减少上述生物安全问题,具有更安全、更易操控的治疗优势。本... 详细信息

骨髓间充质干细胞(BMSC)移植是重症急性胰腺炎(SAP)治疗的研究热点。但在临床应用中,该治疗方式却遇到了诸多技术及伦理问题。BMSC的旁分泌因子具有与细胞移植同样的疗效,且可减少上述生物安全问题,具有更安全、更易操控的治疗优势。本文就BMSC旁分泌因子在SAP中的治疗潜能作一综述,注射含旁分泌因子的BMSC培养上清有望成为未来SAP细胞治疗的新策略。

关键词：重症急性胰腺炎骨髓间充质干细胞旁分泌因子

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人结直肠癌细胞株研究及使用现状

中华胃肠外科杂志 2015年第1期18卷 93-97页

作者：陈珂玲吕兆瑛周总光李园四川大学生物治疗国家重点实验室消化外科研究室成都610041 四川大学华西医院胃肠外科

结直肠癌细胞株是研究结直肠肿瘤癌变、浸润转移机制、探寻新的治疗药物及策略的理想模型。然而，目前存在结直肠癌细胞株数目众多、质量参差不齐以及研究者对其生物学特性重视不足等众多问题，导致结直肠癌研究中对细胞株的选择及使用... 详细信息

结直肠癌细胞株是研究结直肠肿瘤癌变、浸润转移机制、探寻新的治疗药物及策略的理想模型。然而，目前存在结直肠癌细胞株数目众多、质量参差不齐以及研究者对其生物学特性重视不足等众多问题，导致结直肠癌研究中对细胞株的选择及使用不规范，影响实验结果的准确性，甚至可能得出错误结论。本文对迄今已建立的人结直肠癌细胞株进行整理分类，从其建立和应用、分类与选择、使用现状与存在问题3方面进行总结。

关键词：结直肠肿瘤细胞株分类选择使用现状

雨蛙素刺激大鼠胰腺腺泡细胞AR42J后对XIAP表达及细胞凋亡的影响

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生物医学工程学杂志 2011年第2期28卷 332-336,351页

作者：姜晶晶周总光王玲陈利辉李园晏会周斌刘勇陈珂玲四川大学华西医院消化外科研究室成都610041 四川大学华西医院胃肠外科中心成都610041

探讨雨蛙素（CAE）刺激大鼠胰腺腺泡细胞AR42J后,其X-连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）的表达变化规律及与细胞凋亡的关系。CAE刺激组及空白对照组,加药后继续培养12 h设为0 h时间点,分别在0、4、8、12及24 h收集细胞,电镜观察细胞超微结构变化... 详细信息

探讨雨蛙素（CAE）刺激大鼠胰腺腺泡细胞AR42J后,其X-连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）的表达变化规律及与细胞凋亡的关系。CAE刺激组及空白对照组,加药后继续培养12 h设为0 h时间点,分别在0、4、8、12及24 h收集细胞,电镜观察细胞超微结构变化,实时荧光定量PCR法检测XIAP及细胞凋亡指标caspase-3和caspase-9的mRNA表达,用Western blot法检测XIAP蛋白表达,用流式细胞术检测NF-κB激活率。结果发现,CAE刺激后,AR42J细胞凋亡在8 h最明显;XIAP表达随时间呈先降低后恢复的趋势,并在8 h达最低点（与其余各组差异均有统计学意义,P〈0.05）;caspase-3及caspase-9含量则随时间呈先升高后恢复的趋势,且与XIAP含量呈负相关（P〈0.001）;而NF-κB激活增加,并在4~8 h达高峰。由此推测,在CAE刺激所导致的炎症条件下,XIAP负向调控AR42J细胞的凋亡,而随着炎症的进展,NF-κB的激活逐渐增多,上调XIAP的表达,细胞凋亡指标的表达逐渐恢复。

关键词：急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J 雨蛙素 X-连锁凋亡抑制蛋白凋亡

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地球上最淡的海水在哪里

中文自修 2024年第Z1期 68-70页

作者：陈珂玲《环球人文地理》杂志

海水的盐度在各个不同的海域、海区是有差异的,存在着一定的变化。有一个科学问题,对所有人可称天经地义,但许多人却不知其所以然,那就是“海水为什么是咸的?”海水的咸来自于其含有相当数量的盐(35‰左右)。海水里能有如此多的盐,有两...

海水的盐度在各个不同的海域、海区是有差异的,存在着一定的变化。有一个科学问题,对所有人可称天经地义,但许多人却不知其所以然,那就是“海水为什么是咸的?”海水的咸来自于其含有相当数量的盐(35‰左右)。海水里能有如此多的盐,有两个原因。

关键词：

稳定沉默GRP78基因的胰腺腺泡细胞株AR42J的建立

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四川大学学报（医学版） 2012年第5期43卷 645-650页

作者：刘勇李园陈珂玲周斌杨烈晏会周总光四川大学华西医院胃肠外科中心成都610041 四川大学华西医院消化外科研究室成都610041

目的设计并构建编码大鼠葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的短发夹样RNA(shRNA)慢病毒载体,用以建立稳定沉默GRP78基因的大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J。方法设计并合成3条编码大鼠GRP78mRNA的shRNA质粒表达载体,用三质粒包装系统包装成慢病毒,并以... 详细信息

目的设计并构建编码大鼠葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的短发夹样RNA(shRNA)慢病毒载体,用以建立稳定沉默GRP78基因的大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J。方法设计并合成3条编码大鼠GRP78mRNA的shRNA质粒表达载体,用三质粒包装系统包装成慢病毒,并以相应慢病毒转导大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J。经流式细胞分选术(FCAS)筛选出绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞,采用real-time PCR及Western blot方法检测GRP78基因的mRNA和蛋白表达。结果测序证实,成功构建了编码GRP78的shRNA慢病毒载体LVshGRP78-1、LVshGRP78-2和LVshGRP78-3。慢病毒转导AR42J细胞后,经荧光显微镜和FCAS证实转导效率>85%。经real-time PCR验证,与未处理组相比,LVshGRP78-1、LVshGRP78-2和LVshGRP78-3处理组对GRP78mRNA表达的沉默效率分别为69.4%±1.42%、74.7%±1.69%和86.6%±1.73%(P0.05)。Western blot结果显示各组GRP78蛋白表达与mRNA表达趋势一致。结论成功构建了编码GRP78的shRNA慢病毒载体,建立了稳定沉默GRP78基因的胰腺腺泡细胞株AR42J,为探讨GRP78基因在急性胰腺炎发病机制中的作用提供了新的细胞模型。

关键词：葡萄糖调节蛋白78 RNA干扰慢病毒急性胰腺炎 AR42J

一种急性胰腺炎腺泡细胞凋亡/坏死体外模型的改良

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四川大学学报（医学版） 2018年第5期49卷 765-770页

作者：陈珂玲陈家乐池俊霖周总光李园四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室消化外科研究室成都610041 四川大学华西医院胃肠外科成都610041

目的首次将共培养体系及混合腹水技术应用于急性胰腺炎腺泡细胞凋亡/坏死体外模型,并与常见的雨蛙素及雨蛙素联合脂多糖(LPS)模型进行对比研究,以观察其改良效果。方法体外培养的大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J分为4组:对照组(培养液+PBS),雨... 详细信息

目的首次将共培养体系及混合腹水技术应用于急性胰腺炎腺泡细胞凋亡/坏死体外模型,并与常见的雨蛙素及雨蛙素联合脂多糖(LPS)模型进行对比研究,以观察其改良效果。方法体外培养的大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J分为4组:对照组(培养液+PBS),雨蛙素组(培养液+10nmol/L雨蛙素),雨蛙素+LPS组(培养液+10nmol/L雨蛙素+10mg/L LPS)及改良腹水组。改良腹水组采用牛黄胆酸钠诱导的重症急性胰腺炎动物模型腹水,混合后加入共培养体系,刺激体外培养的同源腺泡细胞造模。共培养体系的设置为:培养板中置入孔径为1μm的小室,以体积比1∶1于孔板和小室中分别加入培养液及混合腹水。各组刺激24h后收集腺泡细胞,采用流式细胞术检测腺泡细胞的凋亡/坏死率,Western blot检测凋亡/坏死相关蛋白B淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、受体相互作用蛋白1(RIP1)的表达情况,透射电镜观察腺泡细胞的亚显微结构。结果改良腹水模型中腺泡细胞以坏死特征为主,与其余3组相比,其凋亡率及坏死率均上调,RIP1及BAX蛋白表达水平上调,而Bcl-2蛋白呈下调趋势。透射电镜结果显示改良腹水组腺泡细胞细胞器结构破坏,细胞膜降解。而雨蛙素及雨蛙素+LPS模型与对照组相比,腺泡细胞凋亡率上调,坏死率无改变;促凋亡蛋白Bax表达升高,而RIP1蛋白的表达水平无显著上调。透射电镜结果显示雨蛙素及雨蛙素+LPS组细胞染色质固缩成团,胞质降解,细胞膜完整,呈现出典型的凋亡特征。结论相较于以腺泡细胞凋亡特征为主、研究轻症急性胰腺炎的雨蛙素及雨蛙素+LPS模型,改良的腹水模型以腺泡细胞的坏死特征为主,是研究腺泡细胞坏死及重症急性胰腺炎的良好模型。

关键词：急性胰腺炎体外模型凋亡/坏死腹水

应用联合酶建立BALB／c鼠枯否氏细胞体外分离培养方法

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四川大学学报（医学版） 2008年第2期39卷 298-301页

作者：郑雪莲严茂林廖大清周总光陈珂玲四川大学华西医院消化外科研究室成都610041 福建省省立医院四川大学华西医院麻醉科研究室

目的用作用功效不同的酶联合消化分离BALB／c鼠枯否氏细胞（KC），建立简便易行，产量、活性、纯度较稳定的KC分离培养方法。方法将0．1％Ⅳ型胶原酶、0．2％链霉蛋白酶、0．01％Dnase Ⅰ酶按1：1：1比例混合原位灌注和离体消化肝组织，... 详细信息

目的用作用功效不同的酶联合消化分离BALB／c鼠枯否氏细胞（KC），建立简便易行，产量、活性、纯度较稳定的KC分离培养方法。方法将0．1％Ⅳ型胶原酶、0．2％链霉蛋白酶、0．01％Dnase Ⅰ酶按1：1：1比例混合原位灌注和离体消化肝组织，经Percoll梯度离心，贴壁培养纯化细胞，应用荧光显微镜观察、免疫组织化学染色、吞噬功能实验进行鉴定。结果KC获得率为（2～3）×10^6／鼠肝，细胞存活率达96％，免疫组化和吞噬实验鉴定细胞纯度达92％。KC贴壁后形态大小不规则，呈多角形或星形，免疫组织化学染色显示溶菌酶阳性，胞浆内见吞噬的碳素墨汁颗粒。结论用作用功效不同的酶联合消化KC，经梯度离心和贴壁培养，可获得高产量、高活性、高纯度的BALB／c鼠KC，为进一步研究KC在肝脏疾病中的作用提供可靠的细胞来源。

关键词：联合酶枯否氏细胞分离 BALB/c鼠

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高成本驱动下的CAR-T工艺发展趋势

中国生物工程杂志 2024年第7期44卷 49-57页

作者：陈珂玲曾顺泽许鹏超余艳冯慧玲李园转化医学国家重大科技基础设施(四川)生物制剂规模化制备中心、四川大学华西医院成都610041

近年来随着科学技术的飞速发展,嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor-T cell,CAR-T)产品从分子设计到制备技术均取得了突破性进展,疾病治疗范围从血液系统肿瘤逐步扩大至自身免疫性疾病及实体瘤。然而,生产成本高、产能低是目... 详细信息

近年来随着科学技术的飞速发展,嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor-T cell,CAR-T)产品从分子设计到制备技术均取得了突破性进展,疾病治疗范围从血液系统肿瘤逐步扩大至自身免疫性疾病及实体瘤。然而,生产成本高、产能低是目前CAR-T产品面临的最大现实问题,严重限制了其临床可及性。原辅料价格高昂、定制化生产导致的质检费用和公用设施设备投入无法摊薄、技术依赖下的高人力成本均是CAR-T产品成本居高不下的重要原因。对目前造成CAR-T产品高成本的具体因素及针对性解决方案进行分析,总结发展趋势,以期为CAR-T制备技术的降本增效提供一些参考和建议。基因转导工艺改良,特别是非病毒转导系统的开发、通用型细胞治疗产品的探究、国产自动化设备的布局,是未来CAR-T技术发展的重要方向。随着科研人员的持续攻坚,CAR-T产品成本下降将成为必然趋势,最终成为普通患者可及的“平民化”治疗药物,为重病患者提供更多治疗机会。

关键词： CAR-T 降本增效通用型CAR-T 自动化生产线细胞治疗

糖原合酶激酶3β在轻型/重症急性胰腺炎细胞模型中的表达

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中华实验外科杂志 2015年第1期32卷 30-32页

作者：周斌刘勇陈珂玲余江李园四川大学华西医院消化外科研究室成都610041 四川大学华西医院胃肠外科中心成都610041

目的探讨糖原合酶激酶3β（GSK3β）在轻型/重症急性胰腺炎发病中的表达及作用方法采用单独雨蛙素、雨蛙素联合脂多糖刺激分别构建轻型急性胰腺炎（MAP）和重症急性胰腺炎（SAP）的细胞模型,分别在2、4、8、12、24 h收集细胞培养基上... 详细信息

目的探讨糖原合酶激酶3β（GSK3β）在轻型/重症急性胰腺炎发病中的表达及作用方法采用单独雨蛙素、雨蛙素联合脂多糖刺激分别构建轻型急性胰腺炎（MAP）和重症急性胰腺炎（SAP）的细胞模型,分别在2、4、8、12、24 h收集细胞培养基上清,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测淀粉酶、脂肪酶、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的表达变化,流式细胞术检测细胞凋亡率及坏死率,实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测GSK3β及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3、-8、-9 mRNA表达变化.结果雨蛙素组和雨蛙素＋脂多糖组各时间点淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6较对照组均增高,且在大多数时间点,雨蛙素＋脂多糖组组比雨蛙素组水平更高,开始上调时间相同或更早（P＜0.05）.刺激24 h后,雨蛙素组凋亡率[（19.2±0.9）％]显著高于雨蛙素＋脂多糖组[（10.2±0.5）％,P ＜0.05].雨蛙素组坏死率[（5.8±0.3）％]显著低于雨蛙素＋脂多糖组[（13.6±0.7）％,P＜0.05].SAP组的坏死/凋亡比值是MAP组的5倍.GSK3β的mRNA水平在雨蛙素组中是2h短暂下调[相对表达量为（0.5±0.1）倍]后于8h显著上升[相对表达量为（3.0±1.1）倍,P ＜0.05],然后又逐步下降;而在雨蛙素＋脂多糖组中则是是8h才缓慢上调[相对表达量为（1.8±0.6）倍,P＜0.05],至24 h达到高峰[相对表达量为（3.6±0.3）倍,P＜0.05].GSK3β和Caspase-3 mRNA水平均有升高,但差异无统计学意义（P＞0.05）.结论采用单独雨蛙素、雨蛙素联合脂多糖刺激分别建立MAP和SAP细胞模型可行;GSK3β在MAP和SAP中可能通过促进腺泡细胞凋亡来起作用.

关键词：糖原合酶激酶3β 急性胰腺炎细胞模型凋亡