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H9N2禽流感病毒分子进化和致病性研究

H9N2禽流感病毒分子进化和致病性研究

作者：陈照坤山东师范大学

学位级别：硕士

H9N2亚型禽流感(AI)持续在我国鸡群中广泛流行,不仅可以感染禽类,还可以感染哺乳动物以及人类,为了明确山东及周边养殖场H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的分子进化情况及其致病性,本研究在2016年019年间从山东及周边养殖场病鸡、病鸭等分离鉴... 详细信息

H9N2亚型禽流感(AI)持续在我国鸡群中广泛流行,不仅可以感染禽类,还可以感染哺乳动物以及人类,为了明确山东及周边养殖场H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的分子进化情况及其致病性,本研究在2016年019年间从山东及周边养殖场病鸡、病鸭等分离鉴定出37株H9N2 AIV,经病毒纯化后,将病毒各基因片段进行RT-PCR扩增和克隆测序,获得各分离株全基因组序列,并进行遗传演化和重要的氨基酸位点的变异分析。结果显示:37株H9N2 AIV 8个基因片段均属于欧亚谱系,但8个基因片段的分子进化关系呈现出基因多样性:37株HA和NA基因来自Y280-like;HA基因之间的核苷酸同源性为92.2%9.9%,NA基因之间的核苷酸同源性为90.6%9.9%;M、NS基因来自G1-like;PA、NP、PB1基因来自F98-like;PB2基因来自G9-like。HA蛋白的受体结合位点149、198、234和235位点变异最多,37株分离株HA第234位氨基酸(相当于H3第226位氨基酸)全部由Q突变为L,235位点全部突变为M,32株分离株在HA蛋白21800位糖基化位点缺失,所有分离株均在31315位出现潜在的糖基化位点;仅3株分离株的NA蛋白399位出现糖基化位点,而在264位有13株分离株出现了新的潜在糖基化位点,所有分离株NA蛋白颈部的63-65位氨基酸缺失;6株分离株在PB2蛋白的627位点发生变异,1株在714位点发生变异。选取HA基因进化距离较远和核苷酸同源性差异较大的12株H9N2 AIV进行抗原性分析,结果发现H9N2 AIV之间的交叉HI和R值存在差异,部分毒株抗原性存在差异显著。以上结果表明,近四年山东周边地区流行的H9N2 AIV是由不同进化方式而来,部分重要氨基酸位点和抗原性发生变异,具有潜在感染哺乳动物的可能性,因此需加强H9N2 AIV的分离鉴定,密切监测其遗传变异。基于对HA基因进化树和核苷酸同源性的分析,选取HA基因进化树距离较远和核苷酸同源性差异较大的代表毒株进行生物学活性测定,研究不同年代分离株SPF鸡和BALB/c小鼠的感染性和致病性。结果显示2016年019年间H9N2 AIV代表株对SPF鸡胚的适应性较好,EID数值在100之间;在MDCK细胞上测定的TCID值在100之间,差异比较显著;所有代表株都能在鸡体进行复制并排毒,但病毒滴度较低;21株代表毒株中19株病毒不经适应就能在小鼠肺脏进行复制,并且大部分毒株的病毒滴度较高并引起明显的病理损伤和体重下降。结果表明近四年H9N2 AIV分离株在哺乳动物细胞和体内的复制能力存在差异,且对小鼠肺脏的感染能力相对于鸡肺脏的感染能力呈现一定上升趋势。因此,应重视家禽中H9N2 AIV的监测及其对哺乳动物致病性的变化,为低致病性AIV跨物种感染哺乳动物提供预警。为解析H9N2 AIV对哺乳动物感染能力增强的分子机制,本试验通过以上持续流行病学调查,结合生物信息学技术,筛选可能增强AIV感染哺乳动物的关键HA氨基酸突变位点,进一步利用H9N2 AIV反向遗传平台进行HA基因点突变,构建突变病毒,测定其生物学特性并鉴定HA互作差异宿主蛋白。本研究成功构建9株突变病毒,其中突变株CK/SD/903(N313Q)、CK/SD/903(T198I)、CK/SD/903(M235Q)、CK/SD/903(M235R)的TCID值较野毒株略有增加,H9N2 AIV缺失HA蛋白218位糖基化位点后降低其在哺乳动物细胞中的感染能力。野毒株CK/SD/903和突变株CK/SD/903(N218Q)的HA蛋白共有互作宿主蛋白有27个,这些蛋白主要参与Anti gene processing and presentation、Ribosome、Spliceosome等信号通路,差异互作蛋白参与Antigen processing and presentation、Protein processing in endoplasmic reticμLum、Pathogenic Escherichia coli infection等通路。结果表明,H9N2 AIV病毒HA蛋白218位糖基化、Thr198和Met235位点的某种氨基酸突变能够提高病毒在哺乳动物细胞上的增殖,HA蛋白218位糖基化位点可能通过影响病原感染、抗原提呈、病毒蛋白合成等过程增强病毒对哺乳动物细胞的感染性。本试验结果为H9N2 AIV适应哺乳动物并引起致病的研究提供新的视角,为进一步探索H9N2 AIV跨物种感染机制奠定基础。

关键词： H9N2AIV 遗传进化分析致病性互作差异蛋白

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更年期妇女与Ⅱ型糖尿病相关性研究进展

护士进修杂志 2002年第12期17卷 900-901页

作者：陈照坤周国萍梁业梅卢佳广西玉林市第一人民医院广西玉林537000

妇女更年期是指由生育期到老年期的一个特定转变的过渡时期,女性一般发生于45～55岁之间,更年期期间由于雌激素分泌低下,卵巢功能衰退,性激素分泌减少,促性腺激素升高[1],从而引起植物神经功能紊乱,导致形式、程度不一的心理障碍,约有75... 详细信息

妇女更年期是指由生育期到老年期的一个特定转变的过渡时期,女性一般发生于45～55岁之间,更年期期间由于雌激素分泌低下,卵巢功能衰退,性激素分泌减少,促性腺激素升高[1],从而引起植物神经功能紊乱,导致形式、程度不一的心理障碍,约有75%的妇女出现更年期症状,而且,进入更年期后,妇女各系统功能逐渐出现退行性改变,功能减退,可发生相应疾病,特别是消化代谢功能的下降,更容易患糖尿病及心血管疾病.这对更年期妇女的保健及更年期疾病防治均提出了新的要求,拓展了医疗、护理工作的范畴,本文就其进展作一综述.

关键词：更年期妇女 Ⅱ型糖尿病相关性研究进展激素预防

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实行整体护理临床效果分析

中华医院管理杂志 1997年第10期13卷 605-606页

作者：陈照坤冯明珍钟家盛广西玉林地区人民医院

实行整体护理临床效果分析陈照坤冯明珍钟家盛我院自１９９６年下半年开始引进了以护理程序为框架，“以病人为中心”的整体护理模式，并结合本院的具体情况制订了“整体护理”改革方案。实施半年多来，已取得初步成效。现就５个病区实... 详细信息

实行整体护理临床效果分析陈照坤冯明珍钟家盛我院自１９９６年下半年开始引进了以护理程序为框架，“以病人为中心”的整体护理模式，并结合本院的具体情况制订了“整体护理”改革方案。实施半年多来，已取得初步成效。现就５个病区实施情况进行系统分析，就此对“以病人...

关键词：整体护理护理临床效果

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讲做练有机融合提升实验专题复习效果

物理教学探讨（中学教学教研版） 2017年第1期35卷 8-10页

作者：陈照坤浙江省宁海县柔石中学

实验专题复习中存在过于重视教师讲授而轻视学生动手实验、重视学生训练而轻视教师讲授、简单重复做实验等不良倾向，导致复习效果不佳。要提升复习效果就要既重视发挥教师的主导作用，也要突出学生的主体地位，在专题复习中做到教师的... 详细信息

实验专题复习中存在过于重视教师讲授而轻视学生动手实验、重视学生训练而轻视教师讲授、简单重复做实验等不良倾向，导致复习效果不佳。要提升复习效果就要既重视发挥教师的主导作用，也要突出学生的主体地位，在专题复习中做到教师的讲授、学生的动手做实验和实验题的纸笔训练有机融合。

关键词：讲做练融合实验专题复习效果

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妇女原发性骨质疏松危险因素及防治研究

中国公共卫生 2004年第9期20卷 1059-1060页

作者：陈照坤梁雁芳梁业梅朱新青卢佳广西玉林市第一人民医院护理部 537000

目的　分析玉林市妇女原发性骨质疏松的相关因素。方法　在妇女健康普查中 ,随机抽取玉林城区、林场、市郊的 386 2名妇女 ,经整群抽样筛选 2 5～ 70岁妇女 6 4 0名 ,用单光子骨密度仪测量不同年龄段妇女的骨密度 ,根据骨密度情况分为... 详细信息

目的　分析玉林市妇女原发性骨质疏松的相关因素。方法　在妇女健康普查中 ,随机抽取玉林城区、林场、市郊的 386 2名妇女 ,经整群抽样筛选 2 5～ 70岁妇女 6 4 0名 ,用单光子骨密度仪测量不同年龄段妇女的骨密度 ,根据骨密度情况分为观察组和对照组 ,抽取空腹静脉血测定血钙 (Ca)、磷 (P)、镁 (Mg)的含量 ;并逐个评定更年期症状指数。结果　骨质疏松组 (观察组 )的血微量元素P、Mg值较骨密度正常值 (对照组 )偏低 (P <0 0 5 ) ,观察组的更年期指数也高于对照组 (P <0 0 0 1) ,非体力劳动组骨密度低于体力劳动组 (P <0 0 5 ) ,且非体力劳动组骨质疏松发生率( 39 1% )明显高于体力劳动组 ( 12 2 % )。结论　微量元素血P、Mg偏低 ,骨密度也降低 ;同时 ,骨密度降低组 ,更年期指数有所升高 ,提示微量元素P、Mg及更年期症状指数均与骨密度有关系。

关键词：骨密度微量元素妇女更年期指数体力劳动

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老年手术病人健康教育需求研究

广西医科大学学报 1999年第S1期16卷 290-291页

作者：陈照坤广西玉林市第一人民医院护理部玉林537000