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陈焕春:奶牛重大疫病预警体系建设的目标和要求

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中国畜禽种业 2006年第8期2卷 12-12页

作者：陈焕春中国工程院

为了实现疫情预警的目的,有效运作的疫情监测系统必须满足预警的以下四个基本要求:1 监测系统必须能够在被监测的对象群体中发现最微小的健康状态方面的变化主要指在一年或一个地区中,发现任何的疾病病例,以及发现疫病流行中的异常趋势... 详细信息

为了实现疫情预警的目的,有效运作的疫情监测系统必须满足预警的以下四个基本要求:1 监测系统必须能够在被监测的对象群体中发现最微小的健康状态方面的变化主要指在一年或一个地区中,发现任何的疾病病例,以及发现疫病流行中的异常趋势.因此,敏感的监测系统有利于早期发现潜在的疫病病例事件.早发现对疫病的控制有非常重要的作用,主要表现在:通过早发现,在疫情发生的最初时间内启动流行病学调查和实验室分析,同时采取有效的干预或控制措施,防止疫情的进一步扩散.

关键词：预警体系疫病奶牛监测系统健康状态疫情

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细菌性脑膜炎概述

中国感染控制杂志 2022年第1期21卷 97-103页

作者：彭忠李春辉陈焕春王湘如华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070 中南大学湘雅医院医院感染控制中心湖南长沙410008

社区获得性细菌性脑膜炎依然是一种在世界范围内具有较高发病率和病死率的感染性疾病,也是一种需要被紧急救治的疾病。早期准确诊断、及时治疗以及提前预防是有效降低细菌性脑膜炎发病率的关键因素。本文对引起细菌性脑膜炎的主要病原... 详细信息

社区获得性细菌性脑膜炎依然是一种在世界范围内具有较高发病率和病死率的感染性疾病,也是一种需要被紧急救治的疾病。早期准确诊断、及时治疗以及提前预防是有效降低细菌性脑膜炎发病率的关键因素。本文对引起细菌性脑膜炎的主要病原菌及其流行病学、细菌性脑膜炎的发生机制以及该病的诊断、治疗和预防现状进行综述,为进一步认识细菌性脑膜炎的发生发展及防控治疗提供参考。

关键词：细菌性脑膜炎病原学流行病学发生机制诊断治疗疫苗

表达绿色荧光蛋白突变体的重组伪狂犬病毒的构建及其增殖特性

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第6期34卷 757-762页

作者：方六荣陈焕春肖少波张辉牛传双华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒研究室武汉430070 华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒研究室

将绿色荧光蛋白突变体M 1(EGFPS14 7/P)基因融合到伪狂犬病毒 (PRV)非必需糖蛋白 gG的第 8个氨基酸下游 ,通过同源重组、空斑纯化和PCR筛选获得能表达M 1并导致gG基因部分缺失的重组病毒 gG-/M1+ 。重组病毒经Southern杂交、Western印... 详细信息

将绿色荧光蛋白突变体M 1(EGFPS14 7/P)基因融合到伪狂犬病毒 (PRV)非必需糖蛋白 gG的第 8个氨基酸下游 ,通过同源重组、空斑纯化和PCR筛选获得能表达M 1并导致gG基因部分缺失的重组病毒 gG-/M1+ 。重组病毒经Southern杂交、Western印迹和荧光观察证实构建正确。纯化的重组病毒以低感染指数接种PK 15细胞 ,在感染早期 (6h)就能观察到荧光 ,随着病毒的增殖 ,荧光逐渐增强 (2 4～ 36h) ,直至完全病变 ,荧光淬灭。进一步对重组病毒gG-/M1+ 与亲本株gG-/LacZ+ 、野毒株的增殖特性进行比较 ,发现 3种毒株在增殖滴度上无显著差异。上述结果表明构建的PRVgG-/M1+ 突变株能作为活细胞示踪实时监测病毒感染的动态分析。

关键词：伪狂犬病毒绿色荧光蛋白突变体标记增殖特性

长链非编码RNA CTO-S对伪狂犬病毒复制的影响

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微生物学报 2022年第2期62卷 754-763页

作者：苏乐段龙川姜慧付雯李林涛陈焕春刘正飞华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北洪山实验室湖北武汉430070 温州科技职业学院动物科学学院浙江温州325000

【目的】研究伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)CTO-S对于病毒复制的影响。【方法】利用3′RACE和5′RACE鉴定CTO-S的全长序列。验证CTO-S是否具有编码多肽的能力。Red重组方法构建CTO-S... 详细信息

【目的】研究伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)CTO-S对于病毒复制的影响。【方法】利用3′RACE和5′RACE鉴定CTO-S的全长序列。验证CTO-S是否具有编码多肽的能力。Red重组方法构建CTO-S缺失株以及回复突变株。分析野毒株、缺失株和回复突变株复制的差异。利用RNA pull down联合质谱的方法筛选与CTO-S互作的宿主蛋白。利用RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)方法进行验证。最后利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测野毒株、缺失株和回复突变株对细胞凋亡的影响。【结果】CTO-S全长267 bp,不具有编码多肽的能力。CTO-S缺失不影响PRV的复制。CTO-S与泛醇细胞色素c还原酶的组成部分cytochrome b-c1 complex subunit 1互作,诱导细胞凋亡。【结论】CTO-S对于PRV的复制是非必需的,CTO-S与泛醇细胞色素c还原酶的组成部分cytochrome b-c1 complex subunit 1互作,诱导细胞凋亡。

关键词：伪狂犬病毒长链非编码RNA CTO-S 突变株复制互作

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复合材料混合模式分层断裂的实验表征

固体火箭技术 1998年第2期21卷 56-61页

作者：赵时熙陈焕春王波北京航空航天大学材料科学与工程系北京100083

介绍了一种碳纤维增强复合材料混合模式层间断裂试验方法，它采用改进的混合模式弯曲试验构型，可对Ⅰ型对Ⅱ型断裂按比例加载，且使用对称开裂的梁形试件。讨论了影响混合模式能量释放率测量值准确度的因素。为获得精确的结果，推荐了... 详细信息

介绍了一种碳纤维增强复合材料混合模式层间断裂试验方法，它采用改进的混合模式弯曲试验构型，可对Ⅰ型对Ⅱ型断裂按比例加载，且使用对称开裂的梁形试件。讨论了影响混合模式能量释放率测量值准确度的因素。为获得精确的结果，推荐了一种针对剪切变形和梁根部旋转的修正方法，这些因素在梁理论分析中没有恰当地模拟．最后，作为实例展示了两种复合材料混合模式层间断裂试验的结果。

关键词：复合材料脱层断裂韧度试验能量释放率

日本脑炎病毒NS3蛋白酶活性检测及抑制剂高通量筛选方法的建立

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生物工程学报 2014年第2期30卷 194-202页

作者：周景云汪雪裴超宋云峰陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是单股正链RNA病毒,全基因组仅含有一个开放阅读框,编码一条多聚蛋白前体,病毒编码的NS3蛋白酶在JEV多聚蛋白加工过程中起着重要作用,是重要的药物靶标。通过PCR扩增了NS2BH-NS3蛋白酶的... 详细信息

日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是单股正链RNA病毒,全基因组仅含有一个开放阅读框,编码一条多聚蛋白前体,病毒编码的NS3蛋白酶在JEV多聚蛋白加工过程中起着重要作用,是重要的药物靶标。通过PCR扩增了NS2BH-NS3蛋白酶的编码区,构建了原核表达质粒并转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到可溶性的NS3蛋白酶,用镍亲和层析方法进行了纯化。建立了基于荧光共振能量转移的NS3蛋白酶活性检测方法,并确定了最佳的反应条件,对113个化合物进行了筛选,发现其中两个化合物对JEV NS3蛋白酶具有一定的抑制活性。本研究为JEV NS3蛋白酶的活性研究及抑制剂筛选提供了一种操作方便、成本低廉的方法。

关键词：日本脑炎病毒 NS3蛋白酶可溶性表达酶活性抑制剂高通量筛选

猪白细胞介素-6在巴斯德毕氏酵母(Pichia pastoris)中的分泌表达

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微生物学报 2005年第3期45卷 387-391页

作者：严琳顾贫陈焕春华中农业大学动物医学院武汉430070

白细胞介素6 (Interleukin_6 ,IL_6 )是一种具有多种生物学效应的细胞因子,在疾病诊断与疫苗佐剂领域有广阔的应用前景。在本试验中,猪白细胞介素_6 (pIL_6 )的cDNA序列被克隆入甲醇酵母(Pichiapastoris)分泌表达载体pPIC9K中,并转化入P... 详细信息

白细胞介素6 (Interleukin_6 ,IL_6 )是一种具有多种生物学效应的细胞因子,在疾病诊断与疫苗佐剂领域有广阔的应用前景。在本试验中,猪白细胞介素_6 (pIL_6 )的cDNA序列被克隆入甲醇酵母(Pichiapastoris)分泌表达载体pPIC9K中,并转化入P .pastorisGS115菌株。其重组菌株GS115 pPIC9K_IL6经1%甲醇诱导后,能分泌表达分子量约为2 4 5KD的重组蛋白,Westernblot确证为pIL_6。该酵母表达产物无N端糖基化修饰。用依赖IL6生长的B9细胞株检测提纯后的pIL_6 ,其生物学活性可达8×10 4 IU mg。

关键词：猪白细胞介素6 Pichia pastoris 酵母表达生物学活性

副猪嗜血杆菌Flp-FRT双基因敲除方法的建立与优化

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畜牧兽医学报 2022年第1期53卷 219-230页

作者：肖静肖坤雪王翘楚陈焕春蔡旭旺徐晓娟华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

本研究旨在利用Flp-FRT位点特异性重组系统建立副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis)的无抗性标记基因敲除方法,为G.parasuis的毒力因子、致病机制和基因工程疫苗研究提供有力的遗传操作工具。首先利用λ噬菌体cI857/P_(RM)/P_(R)基因... 详细信息

本研究旨在利用Flp-FRT位点特异性重组系统建立副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis)的无抗性标记基因敲除方法,为G.parasuis的毒力因子、致病机制和基因工程疫苗研究提供有力的遗传操作工具。首先利用λ噬菌体cI857/P_(RM)/P_(R)基因表达调控系统调控Flp重组酶的表达,实现抗性突变体中抗性基因的消除;然后将Flp表达质粒电转化引入G.parasuis CF7066,再自然转化介导同源重组的自杀性质粒获得有抗性标记的基因缺失突变株,调节Flp酶表达并筛选无抗突变株,提高培养温度消除表达Flp酶的温敏质粒;进一步通过筛选突变FRT位点以保证基因敲除的效率。结果表明成功构建了温敏穿梭质粒pSHG5C-Flp,证实了λcI857/P_(RM)/P_(R)表达系统可调控Flp重组酶在G.parasuis中表达并切除抗性突变株ΔnanH::Kan_(R)中的抗性基因;然后用Flp重组酶表达质粒pSHG5C-Flp电转化G.parasuis CF7066,再用自杀性质粒pKF-ΔnanH和pKF-Δapd2对其进行两次连续自然转化,依次在自然转化的初代转化子中筛选并获得了无抗的单基因缺失株ΔnanH和双基因缺失株ΔnanHΔapd,提高培养温度至42℃培养消除了Flp重组酶表达质粒。尽管该系统实现了G.parasuis两个基因的连续敲除,但敲除第2个基因时的效率明显下降,这很可能源于细菌细胞中Flp重组酶表达的积累,对转化质粒介导的同源重组产生了干扰。因此,作者筛选了突变的FRT位点、构建自杀性质粒pKFM-Δapd进行自然转化,显著提高了自然转化后获得突变株的效率,从而保证了该敲除系统的有效性和稳定性。本研究首次报道了可用于G.parasuis的无抗性标记双基因缺失突变系统,为其分子致病基因与基因工程疫苗的研究奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌表达调控 Flp-FRT 基因敲除无抗缺失

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中国主要猪病流行特点与防控

今日养猪业 2022年第2期 8-15页

作者：陈焕春刘馨媛(整理) 李成林(整理) 中国工程院不详

经历非洲猪瘟疫情之后,我国各地区生猪养殖格局和生物安全理念都发生了重大变化,本文对目前中国主要流行的猪病情况、防控难点及疫病实验室检测进行分析和探究,并在此基础之上,对当前猪场健康体系的建设和保障展开探讨,以期为行业同仁... 详细信息

经历非洲猪瘟疫情之后,我国各地区生猪养殖格局和生物安全理念都发生了重大变化,本文对目前中国主要流行的猪病情况、防控难点及疫病实验室检测进行分析和探究,并在此基础之上,对当前猪场健康体系的建设和保障展开探讨,以期为行业同仁提供参考。

关键词：非洲猪瘟猪病流行生猪养殖实验室检测安全理念行业同仁防控难点疫病