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外泌体中的微小核糖核酸在肾脏纤维化发病机制过程中的作用

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临床肾脏病杂志 2024年第12期24卷 1034-1039页

作者：陈灰等杨成南方医科大学第一临床医学院广州510515 中部战区总医院肾内科武汉430070

外泌体是细胞胞吐过程分泌的一类粒径为30~150 nm的微小囊泡,其组成包括外部的脂质双分子层和内部包裹的细胞来源的脱氧核糖核酸、核糖核酸、脂质和蛋白质等生物分子。近年来一些研究阐明外泌体中的微小核糖核酸(micro ribonucleic acid... 详细信息

外泌体是细胞胞吐过程分泌的一类粒径为30~150 nm的微小囊泡,其组成包括外部的脂质双分子层和内部包裹的细胞来源的脱氧核糖核酸、核糖核酸、脂质和蛋白质等生物分子。近年来一些研究阐明外泌体中的微小核糖核酸(micro ribonucleic acid,miRNA)和肾脏纤维化有密切关系,可以作为潜在的生物标志物和治疗靶点。本文围绕外泌体和miRNA的概念、肾脏纤维化和慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)的概念以及它们之间的相互联系、肾脏纤维化的主要调控机制、不同来源的外泌体中的miRNA调控肾脏纤维化的机制以及外泌体中的miRNA在肾脏纤维化中的作用进行综述,旨在为肾脏纤维化的防治和延缓CKD提供参考。

关键词：外泌体微小核糖核酸肾脏纤维化慢性肾脏病

α7-nAChR介导的小花棘豆臭豆碱对小鼠海马组织谷氨酸代谢的调控机制

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中国兽医学报 2019年第9期39卷 1813-1816页

作者：贺鹏飞陈灰张剑柄内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010020

臭豆碱是小花棘豆的主要有毒成分之一,本试验目的是证明臭豆碱通过作用α7烟碱乙酰胆碱受体(α7-nAChR)调控谷氨酸代谢的毒理作用。结果显示,9 mg/kg和18 mg/kg臭豆碱口服剂量可激动小鼠海马组织α7-nAChR,促进谷氨酸释放及上调谷氨酸/... 详细信息

臭豆碱是小花棘豆的主要有毒成分之一,本试验目的是证明臭豆碱通过作用α7烟碱乙酰胆碱受体(α7-nAChR)调控谷氨酸代谢的毒理作用。结果显示,9 mg/kg和18 mg/kg臭豆碱口服剂量可激动小鼠海马组织α7-nAChR,促进谷氨酸释放及上调谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)表达,该效应可被α7-nAChR抗激动剂MLA抑制。但是,36 mg/kg臭豆碱口服剂量却增加小鼠海马谷氨酸浓度及下调GLAST表达。结果表明,超过36 mg/kg臭豆碱剂量则通过抑制α7-nAChR降低GLAST表达,导致谷氨酸代谢障碍从而具有潜在的谷氨酸神经毒性。

关键词：小花棘豆臭豆碱 α7烟碱乙酰胆碱受体谷氨酸谷氨酸/天冬氨酸转运体

烟碱对LPS诱导的兔子宫内膜上皮细胞炎症因子及前列腺素分泌的影响

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中国畜牧兽医 2021年第11期48卷 4302-4310页

作者：魏泓毓鲍朝霞陈灰曹金山贺鹏飞内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

试验旨在探索α7烟碱乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)的高亲和力激动剂烟碱对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的兔子宫内膜上皮炎症的作用机制。分离发情后期兔的子宫内膜上皮细胞,用100 ng/mL LPS... 详细信息

试验旨在探索α7烟碱乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)的高亲和力激动剂烟碱对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的兔子宫内膜上皮炎症的作用机制。分离发情后期兔的子宫内膜上皮细胞,用100 ng/mL LPS对细胞进行炎性刺激12 h。用CCK8法检测不同浓度烟碱(5、10和20μg/mL)对细胞存活率的影响,筛选合适浓度的烟碱进行后续试验。将细胞分为对照组(CON)、LPS、LPS+烟碱、LPS+烟碱+甲基牛扁碱(MLA)(α7nAChR的特异性颉颃剂)组,通过ELISA法检测细胞培养上清液中白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、前列腺素E2(prostaglandin E_(2),PGE_(2))和前列腺素F_(2α)(PGF_(2α))的含量。试验成功分离兔子宫内膜上皮细胞,且传至第5代仍保持良好的生长状态。CCK8检测结果显示,20μg/mL烟碱组细胞存活率显著降低(P0.05),所以选择10μg/mL烟碱进行后续试验。ELISA结果显示,与对照组相比,LPS组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE_(2)和PGF_(2α)的含量显著增加(P<0.05);与LPS组相比,LPS+烟碱组显著降低IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE_(2)和PGF_(2α)的含量(P<0.05),LPS+烟碱+MLA组炎性因子和前列腺素的含量差异不显著(P<0.05)。以上结果表明,烟碱对LPS诱导的兔子宫内膜上皮细胞分泌IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE2和PGF2α具有下调作用,推测烟碱通过α7nAChR介导炎性因子和前列腺素分泌下调而发挥抗炎作用,该结果可为研究α7nAChR作为子宫内膜炎治疗靶点的药物选择提供参考。

关键词： α7nAChR 烟碱炎性细胞因子前列腺素

磷酸二酯酶在金黄色葡萄球菌性乳腺炎中的表达分析

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黑龙江畜牧兽医 2024年第1期 1-9,16页

作者：张良万凯陈灰李慧萍刘淑英内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 内蒙古自治区基础兽医学重点实验室呼和浩特010018

为了探究磷酸二酯酶(PDEs)家族成员表达与金黄色葡萄球菌性乳腺炎的关系,试验采用PCR技术检测了PDE家族除PDE6、PDE10和PDE11基因外的各亚型在奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)、小鼠乳腺上皮细胞(mMECs)及小鼠乳腺(mMG)中的表达情况,实时荧光定... 详细信息

为了探究磷酸二酯酶(PDEs)家族成员表达与金黄色葡萄球菌性乳腺炎的关系,试验采用PCR技术检测了PDE家族除PDE6、PDE10和PDE11基因外的各亚型在奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)、小鼠乳腺上皮细胞(mMECs)及小鼠乳腺(mMG)中的表达情况,实时荧光定量PCR技术检测了金黄色葡萄球菌刺激下这些PDE家族亚型的表达差异及PDE4抑制剂RO-20-1724对金黄色葡萄球菌诱导的炎症因子表达的影响。结果表明:在bMECs中,PDE3B、PDE5A、PDE8B、PDE9A基因呈高表达;在mMECs中,PDE2A基因呈高表达;而在mMG中,PDE2A、PDE3A基因呈高表达。金黄色葡萄球菌刺激8 h后bMECs中PDE1C、PDE4A、PDE4B、PDE4C、PDE4D、PDE5A、PDE8A基因的相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),而PDE1B、PDE7A、PDE7B基因相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);mMECs中PDE1B、PDE1C、PDE2A、PDE3A、PDE4A、PDE4C、PDE4D、PDE5A基因相对表达量极显著升高(P<0.01),而PDE7A基因相对表达量极显著降低(P<0.01);mMG中PDE1B、PDE3A、PDE4C、PDE4D、PDE5A、PDE8A、PDE8B基因相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),而PDE1C、PDE4B、PDE7B基因相对表达量极显著降低(P<0.01)。加入PDE4抑制剂RO-20-1724孵育8 h后可极显著降低金黄色葡萄球菌诱导的mMECs中IL-1β基因的相对表达量。说明乳腺上皮细胞中PDE家族的一些亚型表达存在种属差异,金黄色葡萄球菌感染后可引起不同PDE亚型表达发生改变。

关键词：乳腺炎磷酸二酯酶金黄色葡萄球菌 mRNA表达上皮细胞

奶牛子宫内膜组织α7-nAChR介导的抗炎效应

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中国兽医学报 2020年第1期40卷 147-152页

作者：阿如娜刘科陈灰曹金山贺鹏飞内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

产后奶牛子宫内膜炎高发并导致严重的繁殖机能障碍使该病防治成为当前研究重点。胆碱能抗炎症通路为新药开发提供新的靶点,主要通过烟碱乙酰胆碱受体(α7-nAChR)发挥抗炎作用,但α7-nAChR能否成为治疗奶牛子宫内膜炎的潜在药物靶点尚无... 详细信息

产后奶牛子宫内膜炎高发并导致严重的繁殖机能障碍使该病防治成为当前研究重点。胆碱能抗炎症通路为新药开发提供新的靶点,主要通过烟碱乙酰胆碱受体(α7-nAChR)发挥抗炎作用,但α7-nAChR能否成为治疗奶牛子宫内膜炎的潜在药物靶点尚无数据报道。本研究的目的是调查奶牛子宫内膜组织α7-nAChR是否参与抗炎效应。结果表明,LPS刺激子宫内膜组织8和12 h il-6 mRNA表达量最高,因此选择8和12 h作为本研究炎症模型最佳LPS作用时间;α7-nAChR特异性激动剂PNU-282987在5,10和15mmol/L浓度下可显著下调促炎细胞因子il-1β、il-6、tnf-α及炎症趋化因子il-8 mRNA表达,同时环氧合酶-2(cox-2)和微粒体前列腺素E合成酶-1(mpges-1)表达水平明显下降,这种效应可被α7-nAChR特异性拮抗剂甲基牛扁碱(MLA)逆转。上述结果初步表明激动子宫内膜α7-nAChR具有抑制炎症效应。

关键词：奶牛子宫内膜炎 α-7烟碱乙酰胆碱受体烟碱抗炎通路环氧合酶-2

奶牛子宫组织a-7nAChR介导LPS上调PGE2合成抑制效应

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中国兽医学报 2020年第7期40卷 1372-1377页

作者：阿如娜杨超陈灰魏泓毓刘科贺鹏飞内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

产后奶牛子宫内膜炎是我国奶牛养殖业高发病之一,因此开发防治子宫内膜炎的药物及筛选药物靶点是当前研究热点。前期研究表明,脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)可明显促进奶牛子宫组织前列腺素E2(PGE2)合成,PGE2是炎症反应中疼痛和发热... 详细信息

产后奶牛子宫内膜炎是我国奶牛养殖业高发病之一,因此开发防治子宫内膜炎的药物及筛选药物靶点是当前研究热点。前期研究表明,脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)可明显促进奶牛子宫组织前列腺素E2(PGE2)合成,PGE2是炎症反应中疼痛和发热的重要介质,抑制PGE2合成可有效控制炎症损伤。在多种组织中激动α-7烟碱乙酰胆碱受体(α-7 nicotinic acetylcholine receptor,α-7 nAChR)具有抗炎效应,但是否通过PGE2合成途径发挥抗炎作用尚有争议。本研究目的在于调查在LPS刺激奶牛子宫内膜组织中,α-7nAChR能否调控PGE2合成。结果表明,LPS刺激子宫内膜组织12 h IL-6 mRNA表达量最高,因此作本研究炎症模型最佳LPS作用时间;α-7nAChR特异性激动剂PNU-2829875,10和15μmol/L浓度下可显著抑制环氧合酶-2(cyclooxygenase 2,COX-2)和微粒体前列腺素E合成酶-1(Microsomal prostaglandin E synthase-1,m PGES-1)mRNA和蛋白表达及PGE2分泌,该抑制效应可被α-7nAChR特异性抑制剂甲基牛扁碱(MLA)逆转。上述结果表明奶牛子宫内膜组织α-7nAChR可抑制LPS上调PGE2合成效应,是防治奶牛子宫内膜炎潜在的药物靶点。

关键词：奶牛子宫内膜炎 α-7烟碱乙酰胆碱受体环氧合酶-2 微粒体前列腺素E合成酶-1 前列腺素E2

复合菌培养物及β-葡聚糖对肉羊抗氧化能力与炎症因子含量的影响

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动物营养学报 2021年第5期33卷 2964-2970页

作者：李冬芳刘世雄于春微郝凌魁陈灰高民胡红莲刘大程内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 内蒙古农牧业科学院动物营养与饲料研究所呼和浩特010031

本试验旨在研究复合菌培养物及β-葡聚糖对肉羊抗氧化能力与炎症因子含量的影响。选取50日龄断奶健康羔羊30只,随机分为3个组,包括2个试验组和1个对照组,每组5个重复,每个重复2只羔羊。对照组饲喂全混合日粮(TMR);复合菌培养物组在TMR... 详细信息

本试验旨在研究复合菌培养物及β-葡聚糖对肉羊抗氧化能力与炎症因子含量的影响。选取50日龄断奶健康羔羊30只,随机分为3个组,包括2个试验组和1个对照组,每组5个重复,每个重复2只羔羊。对照组饲喂全混合日粮(TMR);复合菌培养物组在TMR中添加复合菌培养物,前期每千克饲粮添加量为50 g,中期与后期每千克饲粮添加量为70 g;β-葡聚糖组在TMR中添加β-葡聚糖,每千克饲粮添加量为75 mg。试验期为97 d,其中预试期7 d,正试期90 d。分别在试验第1、30、60和90天采集血样,测定抗氧化指标和炎症因子含量。结果表明:与对照组相比,复合菌培养物组肉羊血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及白细胞介素-lβ(IL-lβ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)含量显著提高(P<0.05),丙二醛(MDA)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)含量显著降低(P<0.05);β-葡聚糖组血清中总抗氧化能力(T-AOC)、SOD活性及TNF-α、IL-6含量显著提高(P<0.05),MDA、IL-10含量显著降低(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加复合菌培养物与β-葡聚糖均可以提高肉羊的抗氧化能力与炎症因子含量,并且添加复合菌培养物在提高抗氧化能力方面的效果优于添加β-葡聚糖。

关键词：复合菌培养物 β-葡聚糖肉羊抗氧化能力炎症因子

奶牛亚临床酮病血液生化指标分析及糖皮质激素影响肝细胞糖异生作用分子机制的研究

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中国预防兽医学报 2023年第9期45卷 959-967页

作者：陈灰李松建杜蕊徐子萱李薛强内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018

为探究围产期奶牛亚临床酮病血清中生化指标的变化特征,本研究选取2~4胎次荷斯坦围产期奶牛45头,分别在分娩前7 d、分娩当天晨饲前经尾根静脉采血,以血酮检测值<1.2 mmol/L为健康组,≥1.2 mmol/L为酮病组。采用ELISA试剂盒测定分娩前7 ... 详细信息

为探究围产期奶牛亚临床酮病血清中生化指标的变化特征,本研究选取2~4胎次荷斯坦围产期奶牛45头,分别在分娩前7 d、分娩当天晨饲前经尾根静脉采血,以血酮检测值<1.2 mmol/L为健康组,≥1.2 mmol/L为酮病组。采用ELISA试剂盒测定分娩前7 d、分娩当天、分娩后7 d、14 d健康组和酮病组奶牛血液中的生化指标。结果显示,酮病组奶牛分娩前7 d和分娩当天血清中皮质醇含量显著高于健康组(P<0.05);并且酮病组奶牛分娩前7 d血清中β-羟丁酸(BHBA)、高密度脂蛋白(HDL-C)含量显著高于健康组(P<0.05);酮病组奶牛分娩前后血清中葡萄糖(Glu)、甘油三脂(TG)、极低密度脂蛋白(VLDL-C)、游离脂肪酸(FFA)含量较健康组虽无显著差异,但均高于健康组。分别以0、1×10^(-7)mmol/L、1×10^(-8)mmol/L、1×10^(-9)mmol/L浓度的糖皮质激素(GC)刺激原代分离培养的犊牛肝细胞,作用0、1 h、3 h、6 h、24 h后采用荧光定量PCR检测肝细胞中糖异生相关受体及其相关酶编码基因的相对转录水平,并以皮尔森相关系数对糖异生相关受体及其相关酶编码基因的转录水平进行相关性分析。q PCR结果显示:高浓度GC促进原代犊牛肝细胞中糖皮质激素受体(GR)NR3CI的转录水平,低浓度GC促进盐皮质激素受体(MR)NR3C2的转录水平。糖异生相关限速酶PC、PEPCK-C、PCK2、11β-HSD1、11β-HSD2编码基因的相对转录水平随GC浓度和其作用时间而变化。皮尔森(Pearson)相关性分析结果显示:PC、PCK2、11β-HSD1基因的相对转录水平与NR3C1极显著相关(P<0.01),PEPCK-C、11β-HSD1、11β-HSD2与NR3C2的相对转录水平显著相关(P<0.05)。上述结果表明酮病奶牛分娩前GC水平升高,而GC可能通过结合其受体GR/MR提高奶牛肝细胞中糖异生关键酶PC、PEPCK-C、PCK2、11β-HSD1和11β-HSD2编码基因m RNA的转录,从而促进糖异生作用。本研究为酮病奶牛体内糖脂代谢相关激素GC的内分泌调节作用及其分子机制和GC的临床应用奠定实验基础。

关键词：奶牛酮病糖皮质激素糖异生糖皮质激素受体盐皮质激素受体

奶牛子宫内膜上皮细胞α7nAChR 经由JAK2/STAT3信号通路抑制炎性反应机制

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中国兽医学报 2023年第7期43卷 1506-1512页

作者：李微微高瑞峰张剑柄陈灰贺鹏飞内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

旨在探究BEEC α7nAChR经由JAK2/STAT3信号通路调控炎症反应机制。应用间接免疫荧光技术鉴定BEEC α7nAChR的表达;α7nAChR非特异激动剂烟碱、特异激动剂PUN282987及特异性抑制剂MLA预处理BEEC后使用终浓度0.1 mg/L LPS刺激BEEC,ELISA检... 详细信息

旨在探究BEEC α7nAChR经由JAK2/STAT3信号通路调控炎症反应机制。应用间接免疫荧光技术鉴定BEEC α7nAChR的表达;α7nAChR非特异激动剂烟碱、特异激动剂PUN282987及特异性抑制剂MLA预处理BEEC后使用终浓度0.1 mg/L LPS刺激BEEC,ELISA检测IL-6、IL-8、IL-10分泌水平;Western blot检测α7nAChR、JAK2、P-JAK2、STAT3和P-STAT3的表达水平。PUN282987及烟碱显著抑制IL-6、IL-8的分泌,促进IL-10的分泌,MLA可拮抗上述效应;PUN282987显著上调STAT3磷酸化水平,α7nAChR表达水平与STAT3磷酸化水平则呈负相关,烟碱显著抑制STAT3磷酸化,α7nAChR表达水平与STAT3磷酸化水平呈正相关;α7nAChR激动剂对JAK2磷酸化水平无显著影响。结果表明:激活BEEC α7nAChR通过调控STAT3磷酸化、抑制促炎细胞因子分泌和促进抗炎因子分泌进而抑制炎症反应,BEEC α7nAChR是防治奶牛子宫内膜炎潜在靶点。研究表明PUN282987与烟碱调控STAT3磷酸化及α7nAChR表达均存在药理学差异,而在其他有关BEEC或α7nAChR的研究中暂未见报道。

关键词：奶牛子宫内膜炎奶牛子宫内膜上皮细胞胆碱能抗炎通路 α7nAChR JAK2/STAT3信号