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基于CRISPR技术构建发光噬菌体及其在大肠埃希菌鉴定中的应用

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中华检验医学杂志 2024年第4期47卷 437-443页

作者：李民伟颜菁李航逸郝治云倪忠胡朝阳王笑蓉许梦寒王驰李芮冰王成彬温州医科大学检验医学院生命科学学院温州325035 剑桥大学兽医系英国剑桥CB30ES 解放军总医院第一医学中心检验科北京100853 江苏大学生命科学学院镇江212013

目的构建针对大肠埃希菌的重组发光噬菌体(HT7),并评估其对大肠埃希菌的鉴定能力。方法首先通过基因工程构建小向导RNA表达质粒pCRISPR-sg(1~10)和PFN-1000同源重组质粒菌株,并用双层平板筛选切割效率最高的小向导RNA(sgRNA);采用同源... 详细信息

目的构建针对大肠埃希菌的重组发光噬菌体(HT7),并评估其对大肠埃希菌的鉴定能力。方法首先通过基因工程构建小向导RNA表达质粒pCRISPR-sg(1~10)和PFN-1000同源重组质粒菌株,并用双层平板筛选切割效率最高的小向导RNA(sgRNA);采用同源重组与规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)系统联合介导的基因编辑技术,将Nanoluc萤光素酶基因整合入T7噬菌体10A基因下游的非编码区,并成功构建发光噬菌体HT7;通过噬菌斑实验和液体扩增实验评估HT7噬菌体与T7噬菌体生物特性差异;此外用2022年1月至2023年6月解放军总医院第一医学中心临床采集分离的51株大肠埃希菌、20株肺炎克雷伯菌、14株金黄色葡萄球菌、6株屎肠球菌、5株粪肠球菌、3株鲍曼不动杆菌和1株铜绿假单胞菌评估HT7噬菌体的检测专一性和检出限。结果构建的10个CRISPR靶向切割系统中,sgRNA8靶标的切割效率最高,成斑效率为0.18;噬菌体经pCas9/pCRISPR/PFN-10003质粒系统3轮重组筛选后,PCR验证均为2798 bp的重组噬菌体条带,说明成功构建了HT7噬菌体。重组噬菌体在裂解效率(P<0.001)、一步生长曲线(P=0.001)、感染复数(P=0.031)的生物特性分析中,均有显著差异,裂解暴发点和对数生长节点均延长了10 min,最佳感染复数为0.1;临床样本测试,可识别裂解6株大肠埃希菌,其余菌株均不裂解,4.5 h内可检出低于10 CFU/ml的病原菌。结论成功开发了一种高效的噬菌体基因编辑系统,并成功构建发光噬菌体HT7,该噬菌体在4.5 h内能特异性检测出低于10 CFU/ml的大肠埃希菌,且对其他菌株无裂解作用,显示出良好的检测专一性和低检出限。

关键词：细菌噬菌体基因编辑大肠杆菌萤光素酶类同源重组

本科生动物营养和饲料学综合实验课程设计与实践

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安徽农学通报 2024年第7期30卷 124-127页

作者：赵磊姜宁李雁冰刘东宇李沐阳黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为适应现代高等教育人才培养的需要,本文剖析了动物营养和饲料学综合实验课程实践教学现状。从优化实践教学内容和考核方式,强化实验室条件建设,增加案例分析的课程思政内容,以及开展教学评价方面进行了课程设计与教学实践改革。以增强... 详细信息

为适应现代高等教育人才培养的需要,本文剖析了动物营养和饲料学综合实验课程实践教学现状。从优化实践教学内容和考核方式,强化实验室条件建设,增加案例分析的课程思政内容,以及开展教学评价方面进行了课程设计与教学实践改革。以增强学生实践能力和创新能力,提高实验教学效果,实现人才培养目标。

关键词：动物营养和饲料学综合实验农学人才培养蛋白质饲料资源饲料加工新技术

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高效处理河道黑臭淤泥施工技术研究

工程技术研究 2024年第12期9卷 217-219页

作者：覃辉煌肖清泉樊玉冰刘林基杨相细深圳市东深工程有限公司广东深圳518000 深圳市建艺市政工程有限公司广东深圳518000 深圳市大鹏新区建筑工务署广东深圳518000 广东城华工程咨询有限公司广东广州510000

针对河道水质发臭、淤泥堆积的问题,文章提出一种有效处理河道黑臭淤泥的施工技术,通过筛分除杂、砂水分离、泥水分离模块,结合采用PLC+GPRS控制系统实行远程监控。施工过程中严格把控操作要点,包括施工前准备工作、场地清理基础铺垫和... 详细信息

针对河道水质发臭、淤泥堆积的问题,文章提出一种有效处理河道黑臭淤泥的施工技术,通过筛分除杂、砂水分离、泥水分离模块,结合采用PLC+GPRS控制系统实行远程监控。施工过程中严格把控操作要点,包括施工前准备工作、场地清理基础铺垫和河底清淤、设备组装和进泥调试、杂质分离、砂分离、泥水分离等,通过把控进泥量控制淤泥处理速率,确定絮凝剂的添加量、搅拌速率参数等控制质量,进而实现项目的输出与收益最大化目标。

关键词：河道淤泥泥水分离砂分离筛分除杂

虚拟现实技术对非小细胞肺癌患者术后疼痛及焦虑的影响

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四川生理科学杂志 2024年第8期46卷 1674-1676页

作者：王晓冰刘亚龙马玉慧闫莎莎河南大学第一附属医院胸外科河南开封475000 河南大学第一附属医院泌尿外科河南开封475000

目的:探讨虚拟现实技术(Virtual reality,VR)对非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)患者术后疼痛及焦虑的影响。方法:选取2022年8月至2023年8月期间在本院接受手术治疗的98例NSCLC患者作为研究对象,随机分为对照组和观察组,... 详细信息

目的:探讨虚拟现实技术(Virtual reality,VR)对非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)患者术后疼痛及焦虑的影响。方法:选取2022年8月至2023年8月期间在本院接受手术治疗的98例NSCLC患者作为研究对象,随机分为对照组和观察组,各49例。对照组开展临床常规护理,观察组在对照组基础上联合VR进行干预。分析对比两组的疼痛情况,不良情绪,生活质量以及服务满意度。结果:术后1 d、术后3 d、术后5 d观察组疼痛视觉模拟评分法(Visual analogue scale,VAS)评分与对照组相比均显著降低(P<0.05)。干预后,观察组焦虑自评量表(Self-rating anxiety scale,SAS)、抑郁自评量表(Self-rating depression scale,SDS)评分均明显低于对照组(P<0.05)。干预后,观察组健康状况调查简表(36-item short form health survey,SF-36)中躯体疼痛、精神健康、生理功能、情感职能维度评分与对照组相比均明显提高(P<0.05)。观察组住院服务满意度明显高于对照组(P<0.05)。结论:虚拟现实技术能有效减轻NSCLC患者术后疼痛程度,改善焦虑、抑郁等不良情绪,提升生活质量及住院服务满意度。

关键词：虚拟现实技术非小细胞肺癌疼痛焦虑生活质量

社区老年多重慢性病患者社会参与水平及影响因素分析

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郑州大学学报（医学版） 2024年第4期59卷 475-479页

作者：原田甜周俊阁李国鑫刘安琪贾蕙冰张浩李润鑫张洪剑郑州大学公共卫生学院社会医学与卫生事业管理学教研室郑州450001

目的:探讨社区老年多重慢性病患者社会参与水平及影响因素。方法:采用多阶段分层整群抽样法于2021年9月至12月抽取青岛市、广州市和苏州市6个街道社区的多重慢性病老年患者(≥60岁),对社会参与水平现状和健康状况等进行调查。分析不同... 详细信息

目的:探讨社区老年多重慢性病患者社会参与水平及影响因素。方法:采用多阶段分层整群抽样法于2021年9月至12月抽取青岛市、广州市和苏州市6个街道社区的多重慢性病老年患者(≥60岁),对社会参与水平现状和健康状况等进行调查。分析不同特征老年多重慢性病患者社会参与水平状况差异,采用多因素线性逐步回归分析一般资料和常见慢性病共病组合等对老年多重慢性病患者社会参与水平的影响。结果:672例老年多重慢性病患者的社会参与总分为(43.42±17.86)分。年龄(b=3.710,95%CI:2.029~5.392)、居住方式(与家人同住:b=5.669,95%CI:1.738~9.600)、子女探望频率(1周1次:b=7.324,95%CI:4.004~10.645;15~30 d 1次:b=6.146,95%CI:2.481~9.811)、患高血压+脑卒中(b=4.490,95%CI:0.380~8.600)、患高血压+冠心病(b=-4.252,95%CI:-8.170~-0.334)、患糖尿病+脑卒中(b=6.046,95%CI:0.184~11.909)等共病模式均是社区老年多重慢性病患者社会参与水平的影响因素。结论:社区老年多重慢性病患者社会参与水平受到一定程度的限制,应给予该类患者更多生活支持和人文关怀,提高其社会参与水平。

关键词：社区老年人多重慢性病社会参与影响因素

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贝母枳术方治疗胃食管反流性咳嗽的回顾性队列研究

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广州中医药大学学报 2024年第9期41卷 2333-2339页

作者：王海强马纪长高峰吴蔚胡雪冰王彬中国中医科学院望京医院北京100102

【目的】回顾性分析297例胃食管反流性咳嗽(gastroesophageal reflux cough,GERC)患者临床资料,探讨贝母枳术方(枳术丸加味)治疗GERC的临床疗效和安全性。【方法】采用回顾性队列研究,共计纳入2021年7月至2023年7月就诊于中国中医科学... 详细信息

【目的】回顾性分析297例胃食管反流性咳嗽(gastroesophageal reflux cough,GERC)患者临床资料,探讨贝母枳术方(枳术丸加味)治疗GERC的临床疗效和安全性。【方法】采用回顾性队列研究,共计纳入2021年7月至2023年7月就诊于中国中医科学院望京医院门诊的297例胃气上逆型GERC患者,根据是否应用贝母枳术方分为暴露组136例和非暴露组161例,暴露组应用贝母枳术方治疗,非暴露组应用质子泵抑制剂(艾司奥美拉唑镁肠溶片)治疗,并经1∶1倾向性评分匹配(PSM)得到119对病例,观察匹配后2组患者治疗前后唾液胃蛋白酶水平的变化情况,比较匹配后2组患者治疗2周、8周后的咳嗽缓解总有效率和反流相关症状缓解率(包括反酸、烧心、嗳气、胃胀缓解率),并记录不良反应发生情况。【结果】(1)症状缓解率方面,匹配后,暴露组治疗2周后的咳嗽缓解总有效率及反酸、烧心、嗳气、胃胀等反流相关症状缓解率分别为84.87%(101/119)、80.77%(84/104)、82.61%(76/92)、82.5%(66/80)、84.42%(65/77),非暴露组分别为73.95%(88/119)、72.90%(78/107)、70.41%(69/98)、65.38%(51/78)、64.38%(47/73),组间比较,暴露组除反酸缓解率外的其他症状缓解率均明显优于非暴露组(P0.05),暴露组对唾液胃蛋白酶水平的下降作用明显优于非暴露组,组间治疗2周后及治疗前后差值比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(3)安全性方面,非暴露组有4例(2.48%)患者出现不适反应,暴露组未出现相关不良反应,2组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=1.180,P=0.178)。【结论】贝母枳术方可有效缓解胃气上逆型GERC患者的咳嗽及反酸、烧心、嗳气、胃胀等反流相关症状,降低唾液胃蛋白酶水平,且具有较高的安全性。

关键词：贝母枳术方枳术丸胃食管反流性咳嗽胃气上逆临床疗效唾液胃蛋白酶安全性回顾性队列研究

基于灰色关联度的鹿骨提取物免疫调节作用的谱效关系研究

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中国医院药学杂志 2024年第7期44卷 757-763页

作者：王跃龙杨小倩兰梦张楠茜申嘉明李冬冰刘璐王硕张辉孙佳明长春中医药大学/吉林省人参科学研究院吉林长春130117

目的:研究鹿骨的指纹图谱与免疫调节作用的关联性,明确鹿骨能够发挥免疫作用的活性成分。方法:以不同提取温度制备10组鹿骨样品,建立指纹图谱;对指纹图谱中的共有峰进行多元统计分析,采用液质联用技术和标准品对照对其进行指认;通过测... 详细信息

目的:研究鹿骨的指纹图谱与免疫调节作用的关联性,明确鹿骨能够发挥免疫作用的活性成分。方法:以不同提取温度制备10组鹿骨样品,建立指纹图谱;对指纹图谱中的共有峰进行多元统计分析,采用液质联用技术和标准品对照对其进行指认;通过测定10组鹿骨提取物作用于RAW264.7损伤模型的细胞活力和一氧化氮(NO)浓度,以此为指标评价鹿骨的免疫调节作用,并通过灰色关联度建立鹿骨的谱效关系。结果:鹿骨指纹图谱有10个共有峰,利用液质联用技术对这10个峰进行结构鉴定,并通过标准品比对确定了6个化合物。鹿骨指纹图谱相似度大于0.9。聚类分析和主成分分析结果相同,将鹿骨聚为6类,OPLS-DA筛选出5个变量投影重要性(VIP)大于1的色谱峰,分别是4号、7号(尿苷)、10号(鸟苷)、5号、9号(肌苷)。而灰色关联度结果显示10个色谱峰关联度均大于0.6,表明鹿骨可能通过多成分起到免疫调节作用;有9个色谱峰关联度大于0.7表明有较大的关联性;前6个色谱峰是7号(尿苷)、10号(鸟苷)、9号(肌苷)、2号(胞苷)、3号(尿嘧啶)、6号(次黄嘌呤)。综上所述,表明7号(尿苷)、10号(鸟苷)、9号(肌苷)这3个核苷类成分可能是鹿骨中的主要的免疫调节成分。结论:鹿骨免疫调节作用可能是多种核苷类成分协同作用的结果,尿苷、鸟苷和肌苷可能是鹿骨发挥免疫作用的主要活性成分。

关键词：鹿骨谱效关系免疫调节灰色关联度核苷