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经输血传播疾病的实验室检测及其进展

中华检验医学杂志 2001年第3期24卷 180-182页

作者：陈汝光黄呈辉赵文明深圳市宝安区中心血站 518101 西安交通大学化工学院生物工程系

目前，已知的输血传播疾病有十几种，其中主要有乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病（AIDS）、梅毒、人类T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ/Ⅱ型（HTLV-Ⅰ/Ⅱ）感染和巨细胞病毒感染（CMV）等。目前，大多数国家已规定必须对献血者及血液筛查这6种病原体... 详细信息

目前，已知的输血传播疾病有十几种，其中主要有乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病（AIDS）、梅毒、人类T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ/Ⅱ型（HTLV-Ⅰ/Ⅱ）感染和巨细胞病毒感染（CMV）等。目前，大多数国家已规定必须对献血者及血液筛查这6种病原体。现就目前这几种主要输血传播疾病的实验室检测及其新进展情况作一概述。一、血清免疫学检测 1.乙型肝炎病毒(HBV)感染检测［1］: 对献血者HBV感染的检测，大多数国家通常只检测HBV表面抗原(HBsAg)。检测HBsAg方法有间接免疫凝集试验，如间接血凝试验（IHO）、乳胶凝集试验等，敏感性为10～100 μg/L，不适合对献血者的筛查。随着敏感性可达0.1～1.0 μg/L的酶联免疫吸附试验（ELISA）和放射免疫试验（RIA）的建立，尤其是ELISA具备试剂稳定、无危险无污染、可自动化等优点，现已经成为各国规定的用于献血者检测的标准方法。由于单克隆抗体技术的发明、基因工程表达抗原、人工合成多肽和新的标记技术的应用，以及自动化检测设备的发展，ELISA检测的敏感性和特异性得到极大提高。

关键词：输血疾病传播实验室诊断

PCR检测宫颈良恶性病变组织中HPV与HSV核酸

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临床检验杂志 1996年第6期14卷 304-305页

作者：朱美玲陈汝光邹红艳深圳宝安西乡人民医院检验科深圳宝安西乡人民医院妇产科

ＰＣＲ检测宫颈良恶性病变组织中ＨＰＶ与ＨＳＶ核酸朱美玲陈汝光（深圳宝安西乡人民医院检验科，深圳５１８１０２）邹红艳（深圳宝安西乡人民医院妇产科）关键词宫颈病变人乳头瘤病毒人疱疹病毒聚合酶链反应近年来，国内外学者利用Ｐ... 详细信息

ＰＣＲ检测宫颈良恶性病变组织中ＨＰＶ与ＨＳＶ核酸朱美玲陈汝光（深圳宝安西乡人民医院检验科，深圳５１８１０２）邹红艳（深圳宝安西乡人民医院妇产科）关键词宫颈病变人乳头瘤病毒人疱疹病毒聚合酶链反应近年来，国内外学者利用ＰＣＲ技术研究发现宫颈良、恶性病变组...

关键词：子宫颈病变病毒聚合酶链反应核酸

不同冻存保护剂对脐血造血细胞生物学特性的影响

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中华血液学杂志 2000年第8期21卷 412-413页

作者：陈汝光朱美玲黄玲惠刘永梅奚永志深圳市宝安区中心血站深圳宝安脐血库518101 深圳宝安区西乡人民医院军事医学科学院附属医院免疫学研究室

目的　探索有效低温保存脐血造血细胞的冻存保护剂。方法　对比 4种不同的联合低温保护剂对脐血有核细胞 (TNC)的保护作用 ,并在冻存后 1,2 ,3及 4个月分别检测其复苏后脐血CD3 4+ 细胞及集落形成细胞 (CFC)数。结果　 4种不同联合的低... 详细信息

目的　探索有效低温保存脐血造血细胞的冻存保护剂。方法　对比 4种不同的联合低温保护剂对脐血有核细胞 (TNC)的保护作用 ,并在冻存后 1,2 ,3及 4个月分别检测其复苏后脐血CD3 4+ 细胞及集落形成细胞 (CFC)数。结果　 4种不同联合的低温保护剂对脐血TNC、CD3 4+ 细胞及CFC的保护作用差别显著 ,依次为右旋糖酐 40 (Dextran 40 ) +二甲基亚砜 (DMSO) >生理盐水 +DMSO >DMSO +自体血清 >DMSO +体积分数为 6 %AB血清 +5 0g/L羟乙基淀粉 (DMSO的体积分数均为10 % ) ;Dextran 40 +DMSO的保护效果最佳 ,能使复苏后脐血的TNC、CD3 4+ 细胞和CFC分别达 77.8%、78.5 %和 87.2 %。结论　Dextran 40 +DMSO是一种理想的脐血造血细胞低温保存剂。

关键词：脐血造血细胞生物学特性血液保存冻存保护剂

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冻存时间对脐血造血细胞体外增殖潜能的影响

中国应用生理学杂志 2002年第2期18卷 183-185页

作者：朱美玲陈汝光奚永志刘永梅彭丽珍深圳市宝安血站及脐血库深圳518101 军事医学科学院附属医院免疫室北京100039

目的 :研究冻存时间对脐血造血细胞增殖潜能的影响。方法 :在所分离的脐血有核细胞中加入联合低温保护剂Dextran 4 0 +10 %DMSO ,经梯度降温后置液氮深低温保存。采用无血清造血细胞扩增液对冻存不同时间的脐血造血细胞进行体外扩增 ,... 详细信息

目的 :研究冻存时间对脐血造血细胞增殖潜能的影响。方法 :在所分离的脐血有核细胞中加入联合低温保护剂Dextran 4 0 +10 %DMSO ,经梯度降温后置液氮深低温保存。采用无血清造血细胞扩增液对冻存不同时间的脐血造血细胞进行体外扩增 ,动态监测扩增潜能。结果 :将冻存 1个月、4个月脐血造血细胞体外扩增 5周 ,其总有核细胞分别被扩增了 (14 99.0± 115 .6 )倍和 (15 13.0± 110 .4 )倍 ,CFCs均于体外扩增的第 3周达到高峰 ,分别扩增了(5 3.8± 6 .3)倍和 (5 4 .8± 6 .7)倍 ,CD34+ 造血细胞于体外扩增的第 2周均达到高峰 ,分别扩增了 (6 3.8± 6 .1)倍和(6 2 .4± 5 .7)倍 ;统计分析冻存 1个月与 4个月后造血细胞扩增结果 ,不存在显著性差异 ,P >0 .0 5。结论 :在适宜深低温条件下冻存脐血造血细胞 ,在一定时间内 ,冻存时间的长短不会导致其增殖潜能下降。

关键词：冻存时间脐血造血细胞体外增殖潜能脐带血

无偿献血人群人类免疫缺陷病毒抗体和核酸检测分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2000年第3期14卷 236-239页

作者：欧阳玲黄呈辉陈汝光黄建国深圳市宝安区血站 518101

目的　了解深圳地区无偿献血人群人类免疫缺陷病毒 (HIV)感染流行情况。方法　采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)对无偿献血者进行抗 -HIV - 1/2筛查 ,对初查阳性标本用聚合酶链反应 (PCR)方法进一步检测外周血单个核细胞 (PMBCs)中HIVDNA... 详细信息

目的　了解深圳地区无偿献血人群人类免疫缺陷病毒 (HIV)感染流行情况。方法　采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)对无偿献血者进行抗 -HIV - 1/2筛查 ,对初查阳性标本用聚合酶链反应 (PCR)方法进一步检测外周血单个核细胞 (PMBCs)中HIVDNA和血浆中HIVRNA ,并对 2例无偿献血者PCR扩增阳性片段进行序列测定。结果　在 46 0 95例无偿献血者中 ,发现抗 -HIV1阳性 7例 ,阳性率为 0 .0 15 % ;在 7例抗 -HIV - 1阳性献血者的PBMCs中均检出HIVDNA阳性 ,5例血浆中检测出HIVRNA阳性 ;2例献血者HIVDNA测序分析显示 ,感染的是HIV - 1E亚型毒株。结论　深圳地区无偿献血者人群存在HIVE亚型毒株感染。

关键词：供血者 HIV 聚合酶链反应序列分析

献血员中TT病毒DNA检测及部分基因序列分析

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中华实验和临床病毒学杂志 1998年第3期12卷 237-240页

作者：黄呈辉周育森陈汝光王海涛深圳市宝安血站军事医学科学院微生物流行病学研究所

目的探讨献血员中一种与输血后肝炎有关的病毒—ＴＴＶ的感染情况。方法采用ＴＴＶ基因组ＯＲＦ１区的套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法检测２６２份献血员血清标本。结果在血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）异常、ＨＢｓＡｇ及... 详细信息

目的探讨献血员中一种与输血后肝炎有关的病毒—ＴＴＶ的感染情况。方法采用ＴＴＶ基因组ＯＲＦ１区的套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法检测２６２份献血员血清标本。结果在血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）异常、ＨＢｓＡｇ及抗－ＨＣＶ阴性的５８份献血员血清标本中，１８份ＴＴＶＤＮＡ阳性，ＴＴＶＤＮＡ的阳性检出率为３１０％；在２０４份正常献血员血清标本中检出３０份（１４７％）ＴＴＶＤＮＡ阳性，ＴＴＶＤＮＡ的阳性检出率明显低于ＡＬＴ异常献血员人群（χ２＝３８１，Ｐ＜００５）。序列分析结果显示，其序列与日本株和中国株相应位置核苷酸序列的同源性大于９７％，可能属同一基因型。结论提示我国献血员中存在ＴＴＶ感染，ＴＴＶ存在“健康携带状态”。

关键词： TT病毒献血员聚合酶链反应核苷酸序列

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抗-Le^a引起溶血性输血反应1例

中国输血杂志 1999年第3期12卷 181-182页

作者：薛萍董克菲徐毅陈汝光大连市红十字血液中心 116001 深圳市宝安区中心血站

１　病例摘要患者，女，２９岁，孕４产４，因胆道损伤性闭锁入院治疗，半个月后行胆总管十二指肠吻合术，因术中失血过多，拟输用２Ｕ红细胞悬液。临床在交叉配血时与ＡＢＯ血型相同的献血者血样在室温盐水介质中主侧凝集，在３７℃条... 详细信息

１　病例摘要患者，女，２９岁，孕４产４，因胆道损伤性闭锁入院治疗，半个月后行胆总管十二指肠吻合术，因术中失血过多，拟输用２Ｕ红细胞悬液。临床在交叉配血时与ＡＢＯ血型相同的献血者血样在室温盐水介质中主侧凝集，在３７℃条件下主侧凝集消失，随即输注１Ｕ红细胞悬液，输后患者立即出现全身不适，皮肤黄染，腰痛等症状，并伴有血红蛋白尿。实验室检查：Ｈｂ１０８ｇ／Ｌ、ＲＢＣ３７３×１０１２／Ｌ、ＷＢＣ１２３×１０９／Ｌ、尿潜血（３＋）、尿蛋白（３＋）、直接胆红素８３μｍｏｌ／Ｌ、间接胆红素１４７μｍｏｌ／Ｌ，激素和抗凝血药物治疗症状逐渐缓解，其血样遂送本站检查。２　血型血清学检查２１　红细胞血型　患者为Ａ、Ｒｈ（Ｄ）阳性、Ｌｅ（ａ－ｂ－），供者为Ａ、Ｒｈ（Ｄ）阳性、Ｌｅ（ａ＋ｂ－）。２２　直接抗球蛋白试验　患者红细胞和广谱抗人球蛋白试剂（广州血液中心生产）、抗ＩｇＧ和Ｃ３试剂（上海血液中心生产）均不凝集。２３　抗体筛选　患者血清分别与３、５、１１号谱细胞在４℃放置１ｈ、室温立即离心和抗球蛋白介质中凝集，与其它谱细胞在盐水、菠萝酶、抗球蛋白试验中不凝集。２４　抗体鉴定结果　见附表，通过排除概率可以确定患者血清中...

关键词：抗-Le^a 溶血输血反应

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人B7-1和B7-2cDNA的克隆及鉴定

中国应用生理学杂志 2001年第2期17卷 117-120页

作者：张惠丽奚永志孔繁华陈汝光屠敏刘楠军事医学科学院附属医院免疫学研究室北京100039 深圳市宝安中心血站广东深圳518101

目的 :为探索性构建全新型重组人B7 PE40绿脓杆菌外毒素融合蛋白以长期诱导免疫耐受 ,本研究从急性B淋巴细胞白血病细胞株Raji中克隆N 末端分别缺失 34和 1 6个氨基酸的人B7 l和B7 2基因胞外区 ,并构建含此基因的重组质粒。方法 :根据B... 详细信息

目的 :为探索性构建全新型重组人B7 PE40绿脓杆菌外毒素融合蛋白以长期诱导免疫耐受 ,本研究从急性B淋巴细胞白血病细胞株Raji中克隆N 末端分别缺失 34和 1 6个氨基酸的人B7 l和B7 2基因胞外区 ,并构建含此基因的重组质粒。方法 :根据B7 1和B7 2基因序列设计合成可扩增B7 1和B7 2cDNA的特异性引物 ,用RT PCR的方法从Raji细胞总RNA中扩增B7 1和B7 2cDNA ,并克隆至 pGEM T载体中 ,经酶切鉴定后再进行序列分析。结果和结论 :从Raji细胞中扩增出预期的 6 2 4和 6 75bp的B7 1和B7 2cDNA ,将其克隆至 pGEM T载体中 ,分别经EcoRI/HindⅢ和BamHI/Sphl双酶切电泳和序列分析确证 ,为进一步构建人B7

关键词： B7-1 B7-2 基因淋巴瘤 cDNA 克隆急性B淋巴细胞白血病细胞样

深圳市SEN病毒D和H亚型感染的检测与分析

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中华流行病学杂志 2003年第9期24卷 806-809页

作者：欧阳玲黄呈辉陈汝光刘永梅黄建国深圳市宝安区中心血站 518101

目的　了解深圳市一种新的单链DNA病毒 (SENV)的感染流行状况。方法　以SENV读码框架 1区 (ORF1)核苷酸序列设计引物建立巢式聚合酶链反应 (nPCR)方法。采用多重nPCR对6 0 1份来自不同人群血标本进行SENV DNA(D和H亚型 )检测 ,并对所分... 详细信息

目的　了解深圳市一种新的单链DNA病毒 (SENV)的感染流行状况。方法　以SENV读码框架 1区 (ORF1)核苷酸序列设计引物建立巢式聚合酶链反应 (nPCR)方法。采用多重nPCR对6 0 1份来自不同人群血标本进行SENV DNA(D和H亚型 )检测 ,并对所分离的病毒部分基因进行克隆后测序分析。结果　在乙型肝炎患者、丙型肝炎患者、血液透析患者和吸毒人群SENVDNA阳性率分别为 2 7.8%、2 2 .2 %、2 6 .9%和 39.3% ;在献血人群中 ,体检不合格献血者和丙氨酸转氨酶 (ALT)异常升高献血者SENV阳性率分别为 2 8.1%和 31.3% ,均明显高于体检合格的献血者人群 (15 .1% )的感染率(χ2 =8.2 9,P <0 .0 1和χ2 =6 .0 3,P <0 .0 1)。 6例来自不同人群的SENV D亚型分离株部分核苷酸序列与标准株变异 <6 .8% ;4例来自不同人群SENV H亚型分离株部分核苷酸序列与标准株核苷酸最大变异为 13.5 %。结论　在深圳市高危人群 (献血和吸毒人群及肝炎患者等 )

关键词：深圳市 SEN病毒D H亚型感染检测分析巢式聚合酶链反应