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中国砂质潮间带底栖纤毛虫的空间分布格局及驱动因素

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中国砂质潮间带底栖纤毛虫的空间分布格局及驱动因素

作者：陈欣怡华东师范大学

学位级别：硕士

了解大空间尺度的生物多样性分布模式是生物地理学的核心目标。在全球变化深刻影响海岸带环境,导致生物多样性急剧丧失、物种时空分布格局改变的大背景下,掌握区域物种分布现状,也是建立生物多样性保护规划的前提。生物地理学的研究在... 详细信息

了解大空间尺度的生物多样性分布模式是生物地理学的核心目标。在全球变化深刻影响海岸带环境,导致生物多样性急剧丧失、物种时空分布格局改变的大背景下,掌握区域物种分布现状,也是建立生物多样性保护规划的前提。生物地理学的研究在大型生物领域已经开展得较为深入,但对微型生物的生物地理分布模式,尤其是环境和空间因素在构建其群落过程中的作用,仍十分匮乏。沙滩作为主要的海岸带生态系统之一,其岸线占有率高,无植被带影响,同时受物理、化学和生物过程的多重控制,成为开展微型生物地理学实验的理想区域。本研究以典型微型生物——纤毛虫为研究对象,在跨越2500 km纬度梯度的中国沿海砂质潮间采集了纤毛虫样品,并测定了相关理化参数,验证其群落结构和多样性是否受到本地环境和区域过程等相关因素的驱动。本文首先使用密度梯度离心结合定量蛋白银染色技术(Ludox-QPS),获取潮间带底栖纤毛虫的本底信息。其次,使用非度量多维尺度分析(NMDS)和置换多元方差分析(PERMANOVA)揭示纤毛虫群落结构是否符合我国沿海基于大型生物的生物地理省划分。随后,使用基于距离的冗余分析(db RDA)确定本地和区域变量在解释群落结构变化中的相对重要性。最后进一步使用广义线性模型(GLM)探寻纤毛虫α-多样性的最重要解释因素。本文主要结果及结论如下:(1)本研究共检获底栖纤毛虫177种,隶属14纲25目56科88属。其中,三个生物地理省共有的底栖纤毛虫物种数为68,省Ⅰ和省Ⅲ特有的物种数量分别为30和10,而省Ⅱ的群落中不存在特有物种。在物种组成方面,PERMANOVA结果表明三个生物地理省的底栖纤毛虫群落组成存在显著差异;但在性状组成上,三省间并未有显著差异。db RDA结果证实,本地环境因素和空间尺度共同驱动了底栖纤毛虫的物种组成变异,但前者起主导作用;而底栖纤毛虫群落的性状组成则受盐度一个本地环境因素的显著影响。(2)在α-多样性的空间分布方面,三种多样性指数(分类多样性、系统发育多样性和功能多样性)均与纬度成正相关。多样性的热点区域主要集中在渤海湾、山东半岛、长江入海口北岸和北部湾沿岸。本地环境因素中,海滩指数在塑造纤毛虫三种α-多样性方面起到至关重要的作用。此外,氨氮和代表生物相互作用的小型底栖动物丰度显著影响纤毛虫的分类学多样性;氨氮也同样显著影响纤毛虫的系统发育多样性;功能多样性则受盐度的显著性影响。(3)由于微型生物通常比大型生物表现出较弱的扩散限制,在驱动其多样性和群落结构方面,本地环境因素比区域过程更重要。底栖纤毛虫群落组成在三个生物地理省间的显著性差异,很有可能是长江冲淡水流出的特殊环境条件所致,而非受扩散限制或历史因素的影响。本研究首次揭示了海洋微型纤毛虫的群落分布符合我国海岸带大型生物的生物地理省划分,为海洋微型生物的分布格局及其驱动机制提供了新的认识,也为未来全球变化背景下,潮间带生物多样性的保护和生态系统管理提供了更微观精细的视角。

关键词：纤毛虫生物地理功能多样性纬度宏生态学性状组成

建筑人类学视角下君子垌客家传统聚落空间形态研究

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建筑人类学视角下君子垌客家传统聚落空间形态研究

作者：陈欣怡广西大学

学位级别：硕士

在工业化、城市化浪潮的推动和乡村人居环境建设的快速发展下,传统聚落的物质空间和精神文化都在面临冲击。客家传统聚落作为汉民族中具有代表性的一支,其特色已经得到社会各个层面的认可,但大量承载着丰富文化遗产的客家传统聚落,其价... 详细信息

在工业化、城市化浪潮的推动和乡村人居环境建设的快速发展下,传统聚落的物质空间和精神文化都在面临冲击。客家传统聚落作为汉民族中具有代表性的一支,其特色已经得到社会各个层面的认可,但大量承载着丰富文化遗产的客家传统聚落,其价值还未得到挖掘。其中广西地区关于客家传统聚落研究现状明显滞后,大部分聚落经历着自组织系统瓦解,在现代化过程中处于“消逝边缘”,广西客家传统聚落正在面临前所未有的挑战。本研究在实地调研、访谈的基础上,结合方志、谱牒等历史文本,以广西贵港君子垌客家传统聚落空间形态为研究对象,通过建筑人类学的相关理论和视角进行研究,对聚落空间形态所承载的内涵意义进行剖析,从而认识君子垌客家传统聚落的演变规律。最后提出“文化态”的软件延续、传承、再利用,“空间态”的硬件修补、锚固、再营造以及多元主体共同参与的三种传统聚落保护更新的路径,研究其有机营造和可持续发展之“道”。全文主要由四部分内容组成:首先是理论部分,主要对建筑人类学、聚落空间形态等相关理论进行研究,并在此基础上对聚落空间形态以及对其产生影响的聚落文化系统进行层次划分,提出建筑人类学视角下的具体研究方法,并进一步分析文化要素和空间形态之间的联系。第二,从建筑人类学视角出发对君子垌客家聚落空间形态进行研究。基于建筑人类学的视角,分别研究了作为表层形态的君子垌客家传统聚落整体空间形态、外部空间形态、内部空间形态,以及作为深层结构的物质文化、制度文化、精神文化和行为文化内容的相互关系,深入分析了客家传统聚落文化要素对客家传统聚落空间形态产生的影响。第三,以动态的视角分析了文化要素与聚落空间形态的时空关联,梳理了当下对君子垌客家传统聚落空间形态产生影响的文化要素,进而深入剖析和对比了不同时代背景下文化要素与聚落空间形态特征的对应关系,作为后文提出保护与更新策略的理论基础。最后为君子垌客家传统聚落保护与更新研究。通过分析聚落当下面临的问题,针对传统聚落当代发展的需求,在尊重和延续当地传统文化的基础上提出保护和更新策略。

关键词：建筑人类学君子垌客家传统聚落空间形态

科技金融生态环境对高新技术企业成长性的影响研究

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科技金融生态环境对高新技术企业成长性的影响研究

作者：陈欣怡武汉理工大学

学位级别：硕士

高新技术企业是国家重点支持的战略性企业,如何促进高新技术成长是完善我国现代化产业体系和实现科技强国需要重点关注的问题。科技金融生态环境作为外部环境因素,不仅可以促进宏观经济的增长和科技创新的进步,也能提升微观实体经济的... 详细信息

高新技术企业是国家重点支持的战略性企业,如何促进高新技术成长是完善我国现代化产业体系和实现科技强国需要重点关注的问题。科技金融生态环境作为外部环境因素,不仅可以促进宏观经济的增长和科技创新的进步,也能提升微观实体经济的竞争实力。而高新技术企业是科技金融生态环境中的重要生态主体,其成长性必然离不开科技金融生态环境的作用。因此研究如何构建良好的科技金融生态环境以促进高新技术企业成长,对实现我国高质量科技创新和高质量经济发展具有重要意义。回顾国内外科技金融生态环境与企业成长性相关文献可以发现,学者们集中研究科技金融投入、科技金融政策和金融环境等对企业成长性的影响,并没有探讨科技金融生态环境与企业成长性的直接关系。现有文献也还未从理论和实证方面证明科技金融生态环境对高新技术企业成长性的影响效果。可能原因是科技金融生态环境的概念提出较晚,学术界在科技金融生态环境方面的理论研究不足,科技金融生态环境衡量方法没有统一。鉴于此,本文用“仿生学”思想构建科技金融生态环境评价指标体系,分析我国30个省份的科技金融生态环境发展状况,补充科技金融生态环境理论研究。然后以2014-2020年在所有A股上市的高新技术企业作为研究样本,理论分析结合实证分析,研究科技金融生态环境对高新技术企业成长性的影响,并探究技术创新和融资约束在科技金融生态环境与高新技术企业成长性二者关系中的中介效应。研究发现:(1)近年来我国科技金融生态环境发展较为平缓,存在增长动力不足的迹象,且我国各地区科技金融生态环境具有较大差异;(2)良好的科技金融生态环境对高新技术企业成长性具有积极影响,且该影响具有滞后效应;(3)科技金融生态环境能通过提升高新技术企业的技术创新能力进而推动企业成长;(4)科技金融生态环境可通过缓解融资约束进而提高高新技术企业成长性;(5)控制其他因素不变,技术创新和融资约束在科技金融生态环境与高新技术企业成长性两者关系中具有不完全中介作用。

关键词：科技金融生态环境高新技术企业企业成长性技术创新融资约束

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柔性机械臂的仿生控制方法研究

柔性机械臂的仿生控制方法研究

作者：陈欣怡浙江大学

学位级别：硕士

具有环境顺服性的柔性机械臂的控制问题是目前人机协作领域中需要的解决的重要问题之一,近年来引起了众多国内外研究学者的关注。本文在此背景下,结合生物中小脑的自适应学习、预测控制的作用,研究了基于小脑模型的柔性机械臂控制方法... 详细信息

具有环境顺服性的柔性机械臂的控制问题是目前人机协作领域中需要的解决的重要问题之一,近年来引起了众多国内外研究学者的关注。本文在此背景下,结合生物中小脑的自适应学习、预测控制的作用,研究了基于小脑模型的柔性机械臂控制方法。围绕多自由度柔性关节机械臂的仿生控制、软驱动器驱动的仿生机械臂系统建模与控制以及基于脉冲特性的仿小脑控制方法这三个方面进行了研究。主要研究内容如下:1.针对多自由度柔性关节机械臂的力矩控制问题,提出了一种基于小脑控制器的末端轨迹跟踪控制方法。由于关节处引入了弹性动力学,柔性关节机械臂具有很强的非线性和耦合性,其控制问题具有一定的示范性和泛化性。本论文通过模拟多脑区配合的运动神经回路,实现了对该复杂模型机械臂系统的精准控制。首先,模拟了联想皮层的功能,对期望末端轨迹进行逆运动学计算得到各个关节的期望轨迹。其次,采用仿小脑控制器与近似逆动力学模型相配合,模拟小脑和运动皮层间的控制补偿功能。仿小脑控制器能够通过基于误差反馈的学习规则在线学习获得系统的逆动力学模型,从而实现柔性关节机械臂系统的前馈控制。最后,搭建了仿真实验平台来验证所提出控制方法的自适应学习效果,即便是在机械臂动力学发生较大改变的情况下,所提出的控制方法依然能起到精准的控制效果。2.鉴于软驱动器在柔顺性能、能量密度方面均优于传统的刚体电机,根据人的肘关节的骨骼-肌肉结构和制动机理,自主设计并实现了一个柔性仿生机械臂平台。该机械臂平台由两块Mc Kibben气动人工肌肉驱动,是多自由度机械臂的基本单元,这个平台可以实现单自由度的类手臂运动,对其展开研究具有一定的代表性。鉴于Mc Kibben肌肉易变形、易受环境干扰和迟滞性等特性,使用机理分析对该机械臂建模十分困难,因此采用知识引导、数据驱动建模的方法,对单片肌肉进行动力学建模,并采用了实验验证了建模的准确性。通过分析整个机械臂的几何、受力关系,建立了整个系统的运动学、动力学模型。最后,设计了基于小脑关节控制器的前馈-反馈控制方法,实现了机械臂点到点的位置控制。3.由于软驱动器的模型不确定性和迟滞性给大形变情况下的控制器设计带来了极大的困难,将脉冲特性引入到小脑模型中,提出了一种新型的小脑模型控制器来实现对所搭建的仿生机械臂的自适应控制。采用脉冲神经网络对小脑内部的各区域神经元特性、区域间的神经回路拓扑结构进行了模拟,并针对材料的迟滞性和通讯中存在的时延,提出了一种基于资格迹的突触可塑性学习规则。除此以外,设计了类似生物传感、运动信号神经回路的控制回路和通讯回路。最后,通过仿真和实验验证了所提出控制方法所具有的独特优势,仿生机械臂表现出了良好的轨迹跟踪效果。与此同时进行了一系列抗干扰实验,实验结果显示,所提出的控制方法能够在动态环境下克服噪声及动力学模型变化,实现鲁棒的、自适应的在线学习控制。

关键词：柔性机械臂小脑模型 McKibben人工肌肉软驱动器自适应学习仿生控制

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内高班少数民族学生定语从句习得研究

内高班少数民族学生定语从句习得研究

作者：陈欣怡华东师范大学

学位级别：硕士

内地新疆高中班,简称内高班,是国家为了促进教育公平,维护民族团结的重大举措。内高班中少数民族学生约占80%,他们作为英语的三语学习者,在英语学习方面困难重重。定语从句是高中英语语法教学的重点和难点,也是内高班少数民族学生在三... 详细信息

内地新疆高中班,简称内高班,是国家为了促进教育公平,维护民族团结的重大举措。内高班中少数民族学生约占80%,他们作为英语的三语学习者,在英语学习方面困难重重。定语从句是高中英语语法教学的重点和难点,也是内高班少数民族学生在三大从句中掌握程度最差的一类。本研究从定语从句的两个假设（名词短语可及性假设和难度感知假设）出发,通过汉译英测试、英译汉测试、句子合并测试、语法改错测试,辅以访谈法,将定量研究与定性研究结合,探讨内高班少数民族学生的英语定语从句习得情况,并且比较内高班少数民族英语学习者和内高班汉族英语学习者在习得英语定语从句时的差异。研究结果发现:1.内高班少数民族学生定语从句习得情况部分吻合名词短语可及性假设。2.内高班少数民族学生定语从句习得情况完全吻合难度感知假设。3.任务类型对被试产出结果影响显著。4.内高班少数民族学生和汉族学生在习得英语定语从句方面,不存在显著的差异,但少数民族学生在产出性测试中的得分远落后于理解性测试。根据研究结果,本文提出了以下针对内高班少数民族学生定语从句教学的建议:1.加强操练名词可及性层级中排序靠后类型的定语从句类型;2.加强操练在主语中插入定语从句的情况,帮助学生适应长难句;3.多鼓励少数民族英语学习者进行读、写,进行定语从句产出性练习;4.在汉语课程中加入基本的语法概念教学。5.客观地看待少数民族学习三语的难度,帮助学生避免负迁移,从汉语中获得更多对英语的正迁移,

关键词：内高班英语定语从句名词短语可及性层级假设难度感知假设

邻苯二甲酸酯及塑料添加剂的复合水生毒性研究

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邻苯二甲酸酯及塑料添加剂的复合水生毒性研究

作者：陈欣怡华北电力大学(北京)

学位级别：硕士

塑料作为一类被广泛应用于工业、农业及日常生活中的产品,极易裂解形成直径小于5mm的碎片或颗粒（微塑料:Microplastics,MPs）,进而成为海洋垃圾的主要成分。此外,塑料中的添加剂也会随其碎片或颗粒的迁移转化释放进入环境介质中。而这... 详细信息

塑料作为一类被广泛应用于工业、农业及日常生活中的产品,极易裂解形成直径小于5mm的碎片或颗粒（微塑料:Microplastics,MPs）,进而成为海洋垃圾的主要成分。此外,塑料中的添加剂也会随其碎片或颗粒的迁移转化释放进入环境介质中。而这些添加剂（如增塑剂、抗氧化剂、稳定剂等）大多是典型的环境内分泌干扰物,严重干扰生物体内源性激素的合成,且具有显著的生物毒性、生物富集性、远距离迁移性及环境持久性。因此,塑料添加剂对水生环境的致毒机制成为近年来国内外学者的研究热点。目前关于塑料添加剂对水生生物毒性的研究多集中于采用实验手段探究其某单一组分在生物体内的暴露途径、毒性特征、损害程度、及其与其它污染物的相互作用影响,尚缺乏将塑料基质与添加剂组分作为整体,从分子水平深入考察其对水生生物毒性作用的研究。因此,本研究以内分泌干扰效应显著的塑料增塑剂—邻苯二甲酸酯（Phthalic acid esters,PAEs）类分子为主,开展水生生态系统食物链中PAEs多受体低毒性综合效应研究;与此同时,以塑料基质及添加剂为研究对象,探究两者对水生生物的复合毒性效应,为塑料添加剂在水环境中的毒性效应研究提供理论支撑。PAEs多受体低毒性联合效应研究方面,主要利用灰色关联度法计算PAEs分子对绿藻、大型溞、虾、鱼4种水生生物的联合毒性效应表征值,并以PAEs联合毒性值为因变量,分子结构为自变量构建其对水生生物联合毒性药效团模型,模型 Configuration 值为 16.834（＜17）,Correlation 值为 0.85（＞0.7）,说明模型具有较强的稳定性和良好的预测能力。特征药效团模型显示疏水性基团是影响PAEs分子联合毒性的主要因素,据此设计22种PAEs衍生物分子,并对其联合毒性、单一毒性、环境特性（生物富集性、远距离迁移性）及功能特性进行评价,最终筛选出2种低毒性且可以在环境中稳定存在的PAEs衍生物分子（DINP-C6H5、DEHP-F）,其功能特性保持不变,生物富集性（降幅:6.56%-22.84%）和远距离迁移性（降幅:8.88%-12.56%）均显著降低。通过对比PAEs分子修饰前后与上述4种生物受体蛋白对接打分值发现,DINP-C6H5、DEHP-F衍生物分子与受体蛋白的结合能力变弱,结合稳定性降低,进一步证实筛选的2种PAEs衍生物分子对水生生物的毒性效应减缓。此外,借助DFT方法推断PAEs及其衍生物分子的初级代谢反应路径,发现DINP-C6H5、DEHP-F衍生物单酯分子毒性活性较PAEs单酯分子显著降低（降幅:112.6%-5070.1%）,且这2种衍生物分子发生初级代谢反应所需要的能量分别降低88.5%和92.4%,说明所设计的PAEs衍生物分子易于在水生生物体内代谢,进而减弱其对生物体的毒性活性。塑料添加剂复合毒性效应研究方面,以苯乙烯单体（C8H8）n与5种添加剂（增塑剂、抗氧化剂、阻燃剂、光稳定剂及热稳定剂）的复合体作为研究对象,基于全因子实验设计64组塑料添加剂组合方案,采用分子动力学模拟计算塑料添加剂与受体蛋白复合体系的结合能,发现塑料添加剂的不同成分组合对水生毒性影响差距显著,并分别筛选（C8H8）n,n=1、（C8H8）n,n=5组中水生毒性效应最低的塑料添加剂组合。此外,基于分子对接和交互作用分析,发现影响塑料添加剂与受体蛋白结合的主要驱动力为疏水作用力、氢键作用力及静电作用力,且增塑剂对塑料添加剂的水生复合毒性效应起主要作用。基于（C8H8）n,n=1、（C8H8）n,n=5组中最优塑料添加剂组合方案,选择已有研究中设计的17种环境友好型PAEs衍生物分子,替换组合中的增塑剂（邻苯二甲酸二异壬酯）,构建一种基于环境友好型PAEs衍生物分子替代思路的低水生毒性塑料添加剂最优水平组合方案。模拟发现,PAEs衍生物分子的替换显著降低塑料添加剂复合体的水生毒性效应（降幅为6.35%-878.29%）,最终筛选出基于PAEs衍生物分子的环境低风险性塑料添加剂组合,通过探究塑料添加剂对水生态的复合毒性效应,为新型增塑剂在水生系统中的环境效应研究提供了理论支撑。

关键词：塑料添加剂邻苯二甲酸酯（PAEs）水生毒性分子动力学分子对接药效团模型

“双碳”背景下践行ESG对乳品企业绩效指标的影响——以伊利集团为例

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乳品与人类 2023年第6期 42-47页

作者：陈欣怡兰州财经大学会计学院兰州730020

随着中国乳制品行业的快速发展,乳制品消费量逐步上升,乳制品行业绿色减排成为重要的环保议题。ESG是衡量企业绿色可持续发展水平的重要标准。文章从环境、社会、治理三个维度分析了伊利集团践行ESG管理的路径举措,研究了践行ESG对企业... 详细信息

随着中国乳制品行业的快速发展,乳制品消费量逐步上升,乳制品行业绿色减排成为重要的环保议题。ESG是衡量企业绿色可持续发展水平的重要标准。文章从环境、社会、治理三个维度分析了伊利集团践行ESG管理的路径举措,研究了践行ESG对企业绩效指标的影响,为其他乳品企业应用ESG管理提供参考,促进乳品企业可持续发展。

关键词： ESG 双碳乳品企业

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《四书》本《大学》修辞艺术微探

今古文创 2024年第2期 116-118页

作者：陈欣怡西华师范大学四川南充637009

宋代朱熹将《大学》《孟子》《中庸》《论语》合注并收为《四书章句》,其中《大学》文章在表达说理时运用了多种辞格进行修饰,文篇语言优美,用词典雅,富有思想内涵。本文参照陈望道的修辞格分类方法,统计出《大学》中使用到的修辞格共... 详细信息

宋代朱熹将《大学》《孟子》《中庸》《论语》合注并收为《四书章句》,其中《大学》文章在表达说理时运用了多种辞格进行修饰,文篇语言优美,用词典雅,富有思想内涵。本文参照陈望道的修辞格分类方法,统计出《大学》中使用到的修辞格共有七种,此外还有辞格套用的情况。根据《大学》文本所涉及的辞格进行分析,对其特征、作用以及使用原因展开深入讨论,发现《大学》中的修辞运用使文章内容更加生动,在说理的同时不使文章失去艺术性。

关键词：《四书章句》《大学》辞格分析修辞效果

十字花科黑腐病菌rnDXcc基因的功能鉴定

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十字花科黑腐病菌rnDXcc基因的功能鉴定

作者：陈欣怡广西大学

学位级别：硕士

核糖核酸酶D(RNase D)是一种广泛存在于细菌中的核糖核酸外切酶。RNase D由rnD基因编码,主要功能是参与tRNA分子3’末端的加工。尽管在几乎所有已经完成基因组测序的细菌中都发现了rnD基因,但是,除了大肠杆菌外,rnD基因在其它细菌中的... 详细信息

核糖核酸酶D(RNase D)是一种广泛存在于细菌中的核糖核酸外切酶。RNase D由rnD基因编码,主要功能是参与tRNA分子3’末端的加工。尽管在几乎所有已经完成基因组测序的细菌中都发现了rnD基因,但是,除了大肠杆菌外,rnD基因在其它细菌中的功能还不清楚。基因组序列测定和基因注释结果显示,十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)8004菌株(以下简称Xcc8004)中存在一个rnD基因(XC1809)(重新命名为rnDXcc)。本研究的目的是通过遗传学、分子生物学和生物化学手段确定rnDXcc的生物学功能及其编码产物RnDXcc的生化功能。尽管本实验室之前已经获得了rnDXcc的转座子和质粒插入突变体,但是,考虑到转座子和质粒插入突变体都会产生极性效应,本研究决定通过构建rnDXcc的缺失突变体(ΔrnDXcc)和过表达株(OErnDXcc),以及缺失突变体的互补菌(CΔrnDXcc)来鉴定rnDXcc的功能。对缺失突变体和互补菌的表型分析结果显示,与野生型菌株相比,rnDXcc缺失突变体对SDS的耐受能力明显下降,而互补菌株对SDS的耐受力与野生型菌株相似。这个结果说明rnDXcc在抵抗SDS胁迫中起重要作用。而rnDXcc缺失突变体在生长、致病力、胞外多糖产生、胞外酶活性等方面与野生型菌株无明显差异。过量表达株的表型分析结果显示,与携带有空载的过表达质粒的野生型菌株(pB/WT)相比,rnDXcc过表达株的生长变慢,其胞外淀粉酶的活性、细胞游动能力和致病力显著下降,说明RnDXcc的过量产生对这些生理过程产生不利的影响。众所周知,RNase D的底物是tRNA。然而,本实验室之前的初步研究结果预示RnDXcc可能具有剪切5S rRNA的功能。为了明确RnDXcc是否具有降解或剪切5S rRNA的功能,本研究首先用Northern杂交方法检测和比较了野生型菌株、rnDXcc缺失突变体、互补菌以及过表达株中5S rRNA的杂交信号带。结果显示,rnDXcc缺失突变体中只检测到一条～120nt的成熟5S rRNA主带;而在野生型菌株和回补菌株中,除了成熟的5S rRNA主带外,还能检测到一条～110 nt的主剪切产物以及若干信号微弱的<100nt的次剪切产物。而在过量表达菌株中,5S rRNA的杂交信号带表现为弥散状态,说明5S rRNA已经被过量剪切。这些结果证明,RnDXcc在体内具有降解或剪切5S rRNA的功能。为了弄清RnDXcc在体外能否剪切5S rRNA,本研究在大肠杆菌中表达和纯化了 C-端带六组氨酸标签的重组RnDXcc蛋白(RnDXcc-His6),同时采用体外转录方法制备了 Xcc8004的5S rRNA,然后在体外检测了 RnDXcc-His6剪切5S rRNA的能力。结果表明,RnDXcc-His6能够在体外剪切5S rRNA。进一步的体外剪切实验还发现,RnDXcc-His6也能够在体外剪切tRNA,但不能剪切 16S rRNA 和 23S rRNA。总之,本研究对Xcc8004的rnDXcc的生物学功能及其编码产物的生化功能进行了鉴定,结果发现:(1)rnDXcc在抵抗SDS胁迫中起重要作用;(2)RnDXcc过量产生会导致生长减慢、胞外淀粉酶的活性、细胞游动能力和致病力显著下降;(3)RnDXcc不仅能剪切tRNA还能剪切5S rRNA。这些结果拓展了人们对RNase D功能的认识。

关键词：十字花科黑腐病菌核糖核酸酶 RNase D 5S rRNA和tRNA剪切