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宋内志贺菌毒力基因检测与脉冲场凝胶电泳分型研究

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中国卫生检验杂志 2013年第18期23卷 3518-3520页

作者：丁水军孙永祥傅丹青陈棋炯杭州市萧山区疾病预防控制中心浙江杭州311201

目的了解萧山区宋内志贺菌毒力基因分布和PFGE分子分型情况。方法采用PCR方法检测宋内志贺菌毒力基因并用脉冲场凝胶电泳（pulse—fieldgelelectrophoresis，PFGE）进行分子分型和聚类分析。结果130株宋内志贺菌中毒力基因setlA、setlB... 详细信息

目的了解萧山区宋内志贺菌毒力基因分布和PFGE分子分型情况。方法采用PCR方法检测宋内志贺菌毒力基因并用脉冲场凝胶电泳（pulse—fieldgelelectrophoresis，PFGE）进行分子分型和聚类分析。结果130株宋内志贺菌中毒力基因setlA、setlB、sen、ipaH和捌的携带率分别为0％、0％、76．2％、100％和75．4％。用PFGE分型方法将130株菌株分成80个型别，相似性72．4％～97．9％，菌株数较多的有A、B、c3个克隆群。结论本区宋内志贺菌毒力基因携带率高，具有较强致病性。PFGE分型结果说明2007年-2010年之间萧山的宋内志贺菌来源具有多样性，A、B、C 3个克隆群的菌株占据流行主导地位，应引起重视。

关键词：宋内志贺菌毒力基因脉冲场凝胶电泳分型

萧山区2007年-2010年宋内志贺菌的病原分子生物学特征

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中国卫生检验杂志 2013年第3期23卷 551-553页

作者：丁水军陈棋炯汪皓秋孙永祥傅丹青杭州市萧山区疾病预防控制中心杭州311201 杭州市疾病预防控制中心杭州310021

目的:了解2007年-2010年萧山区分离的宋内志贺菌的病原分子生物学特征,并分析其流行规律。方法:对130株宋内志贺菌进行生化反应和血清分型鉴定,利用PCR方法检测侵袭性质粒抗原H(ipaH)基因。使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源性分型分析... 详细信息

目的:了解2007年-2010年萧山区分离的宋内志贺菌的病原分子生物学特征,并分析其流行规律。方法:对130株宋内志贺菌进行生化反应和血清分型鉴定,利用PCR方法检测侵袭性质粒抗原H(ipaH)基因。使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源性分型分析,并使用BioNumerics进行聚类分析以确定菌株间的亲缘关系。结果:130株菌株均为宋内志贺菌,均具有ipaH基因。PFGE分型将菌株分成90个型别,相似性72.4%～97.9%,主要分为A、B、C三个克隆群。结论:PFGE分型结果表明2007年-2010年萧山区的宋内志贺菌来源具有多样性,A、B、C三个克隆群的菌株占据主导地位,应引起重视。

关键词：宋内志贺菌 ipaH基因脉冲场凝胶电泳分型

金黄色葡萄球菌食物中毒菌株肠毒素检测及基因分析

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中国卫生检验杂志 2012年第5期22卷 1063-1064,1068页

作者：张金芳陈棋炯丁水军孙永祥傅丹青浙江省杭州市萧山区疾病预防控制中心杭州311201

目的:了解一起食物中毒中分离到的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)的生物学特性及其肠毒素基因检测。方法:采用VITEK-32全自动微生物鉴定/药敏分析系统对分离到的金黄色葡萄球菌菌株进行生化鉴定和药敏试验,并采用mini-VIDAS... 详细信息

目的:了解一起食物中毒中分离到的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)的生物学特性及其肠毒素基因检测。方法:采用VITEK-32全自动微生物鉴定/药敏分析系统对分离到的金黄色葡萄球菌菌株进行生化鉴定和药敏试验,并采用mini-VIDAS全自动荧光酶标免疫仪对菌株进行肠毒素检测,再采用PCR技术对产肠毒素的菌株进行基因分型。结果:总共分离到的19株金黄色葡萄球菌,所有分离株均对青霉素G耐药,均分泌β-内酰胺酶,肠毒素基因分型检测均为SEA与SEE。结论:19株分离株均携带肠毒素,经鉴定均为SEA与SEE肠毒素混合型,由此对食物中毒的原因有一个较圆满的解释。

关键词：食物中毒金黄色葡萄球菌肠毒素肠毒素基因分型

德兴铜矿酸性矿坑水水样与底泥中微生物群落多样性及其群落结构变化

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生态学报 2008年第10期28卷 4841-4848页

作者：郑璐尹华群曹琳辉晁婧陈棋炯刘学端生物冶金教育部重点实验室中南大学资源加工与生物工程学院长沙410083

江西铜业集团德兴铜矿是中国最大的露天开采铜矿,已有1000多年的开采历史,因此它为极端环境下微生物群落结构研究提供了一个优良素材。应用16SrRNA基因的PCR克隆技术检测了来源于该铜矿3个不同样地的水样与底泥中的微生物多样性。通过R... 详细信息

江西铜业集团德兴铜矿是中国最大的露天开采铜矿,已有1000多年的开采历史,因此它为极端环境下微生物群落结构研究提供了一个优良素材。应用16SrRNA基因的PCR克隆技术检测了来源于该铜矿3个不同样地的水样与底泥中的微生物多样性。通过RFLP分析获得40个OTUs,测序和系统发育分析表明它们属于7个不同的系统发育分区,即Acidobacteria,Acti-nobacteria,Nitrospira,α-Proteobacteria和γ-Proteobacteria,Firmicutes,δ-Proteobacteria。这些克隆中的大部分属于γ-Proteobacteria,α-Proteobacteria和Nitrospira。进一步的分析结果表明在各样点水样中的嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)所占比例大于其在底泥中的比例,而底泥的嗜酸菌属(Acidiphilium)所占比例明显高于水样,这可能与底泥的缺氧环境和Acidiphi-lium菌能够将三价铁还原成二价铁的特性有关。

关键词：酸性矿坑水(AMD) 底泥微生物多样性 16S rRNA RFLP

金黄色葡萄球菌食物中毒菌株的肠毒素基因分型与脉冲场凝胶电泳分型研究

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中国卫生检验杂志 2013年第13期23卷 2755-2757页

作者：戴城钢孙永祥傅丹青陈棋炯丁水军张金芳杭州市萧山区疾病预防控制中心浙江杭州311201

目的对一起食物中毒中分离到金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,***)进行肠毒素基因分型和脉冲场凝胶电泳法(PFGE)分型。方法采用mini-VIDAS全自动荧光免疫分析仪对菌株进行肠毒素检测,对产肠毒素的菌株进行PCR基因分型与PFGE同源... 详细信息

目的对一起食物中毒中分离到金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,***)进行肠毒素基因分型和脉冲场凝胶电泳法(PFGE)分型。方法采用mini-VIDAS全自动荧光免疫分析仪对菌株进行肠毒素检测,对产肠毒素的菌株进行PCR基因分型与PFGE同源性分析。结果从被检样品中共分离到22株金黄色葡萄球菌,肠毒素初筛均为阳性,基因分型检测均为SEA。PFGE分型结果显示22株可分为3个型,P1型为19株,P2型2株,P3型1株。结论根据实验室检测结果分析这是一起产肠毒素SEA的金黄色葡萄球菌引起的食物中毒。PFGE分型结果显示有3个型,P1型占主导。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素脉冲场凝胶电泳基因分型

应用实时荧光PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因

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中国卫生检验杂志 2012年第9期22卷 2099-2101页

作者：葛小萍陈棋炯孙永祥傅丹青丁水军戴城钢浙江省杭州市萧山区疾病预防控制中心杭州311201

目的:建立一种简便、特异的荧光PCR检测方法,用于金黄色葡萄球菌肠毒素的检测。方法:按金黄色葡萄球菌SEA～SEE型肠毒素基因序列设计引物,在普通PCR检测体系中,加入SYBR Green I荧光染料,建立荧光PCR检测体系。结果:46株金黄色葡萄球菌... 详细信息

目的:建立一种简便、特异的荧光PCR检测方法,用于金黄色葡萄球菌肠毒素的检测。方法:按金黄色葡萄球菌SEA～SEE型肠毒素基因序列设计引物,在普通PCR检测体系中,加入SYBR Green I荧光染料,建立荧光PCR检测体系。结果:46株金黄色葡萄球菌中检出22株携带肠毒素基因,阳性率为47.83%。以SEA、SEB检出率较高,分别为31.82%和27.27%;不同来源的分离株携带肠毒素基因的比例不同,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占27.27%。结论:荧光PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法具有快速、敏感、特异性高的特点,适用于肠毒素基因的分型与分布的研究,适合基层疾控部门使用。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素荧光PCR 分型

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萧山区宋内氏志贺菌脉冲场凝胶电泳分型分析

中国卫生检验杂志 2014年第6期24卷 829-830,837页

作者：戚雅萍傅丹青陈棋炯孙永祥丁水军张金芳杭州市萧山区疾病预防控制中心浙江杭州311201

目的对萧山区2010年分离的54株宋内氏志贺菌进行脉冲场凝胶电泳分型(Pulsed-field Gel Electrophoresis,PFGE),分析菌株之间的分子分型特征和遗传相关性。方法 54株宋内氏志贺菌菌株按WS 287-2008标准以生化反应和血清分型进行鉴定分型... 详细信息

目的对萧山区2010年分离的54株宋内氏志贺菌进行脉冲场凝胶电泳分型(Pulsed-field Gel Electrophoresis,PFGE),分析菌株之间的分子分型特征和遗传相关性。方法 54株宋内氏志贺菌菌株按WS 287-2008标准以生化反应和血清分型进行鉴定分型,并参照美国疾病预防控制中心的PulseNet方法使用脉冲场凝胶电泳进行同源性分型分析,所得结果使用BioNumerics软件进行聚类分析以确定菌株间的亲缘关系。结果 54株宋内氏志贺菌经XbaⅠ酶切分为13个带型,主要带型聚类相似性为92.1%,大部分属于来源高度相似的克隆系。结论建立宋内氏志贺菌PFGE分析方法和初步带型数据库,获得了宋内氏志贺菌的主要克隆系。分离株相似性较高,有可能存在单一感染源,还需要进一步分析比对。

关键词：宋内氏志贺菌脉冲肠凝胶电泳分子分型

基层疾病预防控制中心标准物质的期间核查方法探讨

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中国卫生检验杂志 2015年第2期25卷 298-299页

作者：徐陆妹洪萍陈棋炯杭州市萧山区疾病预防控制中心浙江杭州311201

标准物质是一种或多种足够均匀、很好的被确定了特性值的物质,在基层实验室常作为参照物用于检测样品、质量控制和方法的确认,具有量值溯源的功能,分为有证和非有证两类。《实验室资质认定评审准则》规定：当需要利用期间核查以保持设... 详细信息

标准物质是一种或多种足够均匀、很好的被确定了特性值的物质,在基层实验室常作为参照物用于检测样品、质量控制和方法的确认,具有量值溯源的功能,分为有证和非有证两类。《实验室资质认定评审准则》规定：当需要利用期间核查以保持设备校准状态的可信度时,应按照规定的程序进行。实验室应1次或多次使用适当的技术和方法检查在用的标准物质。主要的核查方法有购买标准物质（或标准质控样品）或采用质控图核查标准物质。

关键词：标准物质期间核查保留样品

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金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测与分型

中国卫生检验杂志 2011年第5期21卷 1167-1169页

作者：傅丹青陈棋炯丁水军戴城钢浙江省杭州市萧山区疾病预防控制中心杭州311201

目的:了解不同来源的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)分离株产肠毒素的情况,以及主要肠毒素SEA、SEB、SEC、SED、SEE基因携带状况。方法:采用小型VIDAS全自动荧光酶标免疫法对46株分别从医院消毒监测样品、公共场所监测样品... 详细信息

目的:了解不同来源的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)分离株产肠毒素的情况,以及主要肠毒素SEA、SEB、SEC、SED、SEE基因携带状况。方法:采用小型VIDAS全自动荧光酶标免疫法对46株分别从医院消毒监测样品、公共场所监测样品、食品监测样品以及食物中毒病人粪便和呕吐物中分离到的SA菌株进行肠毒素检测,再采用PCR技术对产肠毒素的菌株进行基因分型。结果:46株SA菌株中,携带肠毒素的为22株,检出率为47.83%。其中以SEA、SEB检出率较高,分别为31.82%和27.27%。不同来源SA分离株携带肠毒素基因的比例不同,24株来自医院消毒监测样品分离株中检出率为41.67%(10/24);4株来自公共场所监测样品分离株中检出率为50.00%(2/4);12株来自食品监测样品分离株中检出率为33.33%(4/12);6株食物中毒样本分离株中检出率为100%(6/6)。结论:46株SA分离株中产肠毒素为22株,比例较高,而且携带肠毒素基因的类型较多。试验表明,VIDAS与PCR技术应用于检测SA分离株中肠毒素基因简单、快速,适合基层疾控部门应用。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素基因分型 PCR