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盐霉素通过Na+,K+-ATP酶诱导脂肪干细胞和肝癌干细胞胀亡的作用机制研究

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浙江医学 2024年第18期 1925-1932页

作者：尹学青董哲斌邬恒淼项翰霆陈正威陈桑桑陈天赐黄佳荣梁超宁波大学附属第一医院影像医学科宁波大学附属李惠利医院胃肠外科

目的观察脂肪干细胞（ASCs）和肝癌干细胞（HCCSCs）对盐霉素处理的反应，探讨Na+, K+-ATP酶在盐霉素选择性杀伤ASCs和HCCSCs中的作用。方法采用CCK-8、Transwell实验分析盐霉素对ASCs及HCCSCs的细胞毒性反应，显微镜下观察细胞形态... 详细信息

目的观察脂肪干细胞（ASCs）和肝癌干细胞（HCCSCs）对盐霉素处理的反应，探讨Na+, K+-ATP酶在盐霉素选择性杀伤ASCs和HCCSCs中的作用。方法采用CCK-8、Transwell实验分析盐霉素对ASCs及HCCSCs的细胞毒性反应，显微镜下观察细胞形态变化，采用Na+, K+-ATP酶检测试剂盒测定细胞内Na+和K+离子浓度，通过ATP检测试剂盒测定细胞内ATP浓度。采用Western blot法分析Na+, K+-ATP酶各亚基及细胞上皮间质转化（EMT）相关蛋白的表达水平。通过上述方法验证盐霉素通过调控Na+, K+-ATP酶诱导ASCs和HCCSCs胀亡（细胞肿胀、坏死）的作用机制。结果盐霉素选择性诱导ASCs和HCCSCs胀亡。在胀亡的ASCs和HCCSCs中，细胞内ATP浓度显著下降，伴随Na+, K+-ATP酶活性丧失和细胞内Na+滞留。所有类型的Na+, K+-ATP酶亚基在ASCs中均有表达，而在盐霉素诱导分化的ASCs中仅表达α1和β1亚基。β1亚基的丧失是阿霉素诱导肝癌Huh-7细胞EMT的关键事件，相反β1亚基的过表达可以抑制阿霉素诱导的Huh-7细胞EMT。结论 Na+, K+-ATP酶的活性差异是盐霉素对干细胞产生选择性细胞毒性的原因，且β1亚基是肝癌EMT过程中一个重要因素。Na+, K+-ATP酶亚基对ASCs和HCCSCs的干性及癌症干细胞样的EMT过程起关键作用。

关键词： Na+, K+-ATP酶细胞胀亡肿瘤干细胞脂肪干细胞上皮间质转化

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帕金森病葡萄糖代谢有氧途径研究

帕金森病葡萄糖代谢有氧途径研究

作者：陈桑桑桂林医学院

学位级别：硕士

目的:通过研究帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠模型和临床患者中葡萄糖代谢有氧途径中糖酵解、三羧酸循环与正常对照之间的差异,分析帕金森病对葡萄糖代谢途径有无影响,从而进一步为帕金森病诊治提供新思路。方法:选取20只雄性C5... 详细信息

目的:通过研究帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠模型和临床患者中葡萄糖代谢有氧途径中糖酵解、三羧酸循环与正常对照之间的差异,分析帕金森病对葡萄糖代谢途径有无影响,从而进一步为帕金森病诊治提供新思路。方法:选取20只雄性C57BL/6小鼠随机分为2组,每组10只:A.对照组(生理盐水腹腔注射7天);***模型组(1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶腹腔注射7天)。收集帕金森病患者、正常志愿者血清标本各10例,将小鼠脑组织、临床受试者血清提取RNA反转录后进行聚合酶链式反应实验比较糖代谢有氧途径中关键酶表达差异,行中心碳代谢实验比较糖代谢有氧途径中的中间产物差异,记录数值并进行统计学分析。结果:在小鼠模型中,PD组脑组织中己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、6磷酸果糖激酶1(6-phosphofructokinase1,PFK 1)、α-酮戊二酸脱氢酶复合体(α-ketoglutarate dehydrogenase complex,OGDH)、柠檬酸合酶(citrate synthase,CS)在mRNA水平上较对照组增高且差异有统计学意义(HK2、CS表达差异中P<0.05,PFK1、OGDH表达差异P<0.01),糖酵解过程中的代谢物6-磷酸葡萄糖(Glucose 6-phosphate,G6P)、6-磷酸果糖(Fructose-6-phosphate,F6P)、丙酮酸(Pyruvate)、和TCA循环产物α-酮戊二酸(2-Ketoglutaric acid,2KGA)、琥珀酸(Succinic Acid,Succinate)在PD组小鼠中显著降低,3-磷酸甘油酸(3-phosphoglycerate,G3P)较对照组稍升高,PD模型中葡萄糖代谢糖酵解及三羧酸循环受到抑制;在临床患者中发现,在PD患者血清中葡萄糖代谢有氧途径关键酶中的HK2在mRNA水平上表达较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05),而CS在mRNA水平上表达较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05),G6P、F6P、丙酮酸、2KGA、琥珀酸、富马酸(Fumarate)、苹果酸(Maleic acid,Maleate)较对照组明显升高,中间产物累积,PD患者血清中葡萄糖代谢中糖酵解活跃,三羧酸循环下调。结论:小鼠模型中,我们发现PD脑组织中葡萄糖代谢糖酵解、三羧酸循环产物降低,关键酶的表达升高,整体脑组织中葡萄糖代谢下调,其中代谢变化中关键酶变化为HK2、PFK1、OGDH、CS表达的升高,而在人的样本中发现整体葡萄糖代谢产物累积,葡萄糖关键酶的表达HK2降低,CS表达升高,糖酵解过程活跃,三羧酸循环过程缓慢。总之,帕金森病糖酵解及三羧酸循环中关键酶的变化主要集中在HK2、CS。

关键词：帕金森病葡萄糖糖酵解三羧酸循环代谢组学

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婚生子女否认之诉研究

婚生子女否认之诉研究

作者：陈桑桑湘潭大学

学位级别：硕士

近年来，在我国司法实践中婚生子女否认之诉案件逐渐增多，尽管目前存在一些有关婚生子女否认之诉的法律规范，但是这些规范尚未形成一个体系性的制度。2011年《婚姻法司法解释（三）》对婚生子女的否认之诉做了部分规定，但与其他国家... 详细信息

近年来，在我国司法实践中婚生子女否认之诉案件逐渐增多，尽管目前存在一些有关婚生子女否认之诉的法律规范，但是这些规范尚未形成一个体系性的制度。2011年《婚姻法司法解释（三）》对婚生子女的否认之诉做了部分规定，但与其他国家相比较，仍存在许多不足。本文在梳理婚生子女否认之诉理论的基础上，借鉴域外的有关规定，分析我国婚生子女否认之诉制度存在的缺陷，对完善我国婚生子女否认之诉制度提出自己的意见。希望为婚生子女否认之诉的理论研究注入源头活水。本文主要包括四个部分：第一部分，问题的提出。通过一个婚生子女否认之诉的案例，提出婚生子女否认之诉需要解决的问题，并介绍我国目前的研究现状。第二部分，婚生子女否认之诉的基本理论研究。主要内容有，婚生子女否认之诉的前提、婚生子女否认之诉概念与婚生子女否认之诉的价值取向问题研究。第三部分，婚生子女否认之诉的域外立法例之考察。此部分主要对各个国家关于婚生子女否认之诉的规定进行比较评析。第四部分，介绍我国婚生子女否认之诉的现存制度，分析自新中国成立以来婚生子女否认之诉处理的有关规定。提出我国婚生子女否认之诉制度中存在的缺陷。在借鉴各主要国家和地区立法经验以及前人研究成果的基础上，提出构建我国婚生子女否认之诉程序的建议，此部分是本文的重点部分。

关键词：婚生子女的推定婚生子女的否认立法与实践

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基于信息融合的目标跟踪识别技术研究

基于信息融合的目标跟踪识别技术研究

作者：陈桑桑西安工业大学

学位级别：硕士

运动目标自动跟踪识别技术具有很多突出的优势,如可获得大量的目标信息、抗电子干扰能力强、测量精度高、跟踪视场范围大等,因此被广泛应用于交通管理,银行监控,军事边防等安全敏感领域。本文以行人为跟踪识别对象,在目标图像跟踪技术... 详细信息

运动目标自动跟踪识别技术具有很多突出的优势,如可获得大量的目标信息、抗电子干扰能力强、测量精度高、跟踪视场范围大等,因此被广泛应用于交通管理,银行监控,军事边防等安全敏感领域。本文以行人为跟踪识别对象,在目标图像跟踪技术基础上,通过完善和改进运动目标识别算法,进一步提高监控系统的智能化和自动化水平,有效地实现在重点区域对特定运动物体的自动跟踪。针对目标自动跟踪识别中存在的实时性、准确性以及抗千扰能力的难题,本文提出基于信息融合的目标跟踪识别技术。从目标跟踪方法与设计出发,通过分析目标跟踪原理,研究了与之相宜的目标跟踪平台,并给出了目标自动跟踪识别总体设计方法。目标检测是图像处理的前提,结合目标跟踪测量系统对缓慢变化背景下的目标成像特点,着重研究与之相适宜的目标检测方法,择优采用了混合高斯算法对运动目标进行背景建模,为了改善目标检测算法实时性,提出自适应调整高斯分布个数的优化方案,并对目标区域进行RGB颜色加权直方图和Sobel边缘加权直方图的提取。目标在检测之后,在图像实现对特定目标的自动跟踪之前还存在这一个必要环节:目标识别,为保证目标识别准确性,给出了多特征信息融合目标识别架构与方法,采用BP神经网络进行目标预处理识别,将网络初步识别数据再利用D-S证据理论融合决策输出,最后通过算例分析验证系统的目标融合识别效果。目标跟踪识别系统中图像处理的最后阶段选择了在粒子滤波框架下的目标图像跟踪算法,用于获取目标图像质心像素坐标,分模块推导了粒子滤波跟踪实现过程,分析基于参数固定的图像特征融合方法,给出运动目标图像信息融合跟踪建模与算法。基于目标图像检测、识别与跟踪方法研究,本文通过搭建实验平台对理论部分的设计进行了实验验证,从实验结果可以看出,虽然视频序列存在背景变化、相似物干扰、部分遮挡以及目标部分形变的影响,使得目标中心点像素坐标存在浮动误差,但是,目标跟踪的质心像素坐标基本上处于有效视场内,目标跟踪相对稳定,目标自动跟踪识别系统具有较好的抗干扰能力。

关键词：目标跟踪信息融合目标检测目标识别

p8蛋白在二氢青蒿素诱导肿瘤细胞凋亡中的作用研究

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p8蛋白在二氢青蒿素诱导肿瘤细胞凋亡中的作用研究

作者：陈桑桑浙江大学

学位级别：硕士

目的：二氢青蒿素(DHA)是青蒿素类药物的主要活性代谢产物,是临床上应用多年、安全有效的抗疟药物。近年来很多研究表明DHA在多种肿瘤模型中表现出良好的抑制肿瘤作用,但是临床试验表明单独使用二氢青蒿素不能达到理想的治疗肿瘤效果。... 详细信息

目的：二氢青蒿素(DHA)是青蒿素类药物的主要活性代谢产物,是临床上应用多年、安全有效的抗疟药物。近年来很多研究表明DHA在多种肿瘤模型中表现出良好的抑制肿瘤作用,但是临床试验表明单独使用二氢青蒿素不能达到理想的治疗肿瘤效果。应激相关蛋白p8自发现以来多次被证明与肿瘤发生和耐药相关,并且前期研究我们发现DHA作用后p8的上调降低了肿瘤细胞对DHA的敏感性。因此本文针对p8上调引起肿瘤细胞对DHA耐药的机制进行探究,为提高DHA抗肿瘤治疗提供新思路。方法：选用人宫颈癌HeLa细胞,结肠癌HCT116细胞,探讨p8上调引起肿瘤细胞对DHA耐药的分子机制。(1)运用Western Blot检测p8、ATF4、CHOP、caspase3、 PARP、LC3等蛋白表达水平(2)运用RT-PCR检测p8、ATF4、CHOP的mRNA水平。(3)运用磺基罗丹明B (SRB)染色法检测药物对细胞的抑制率。(4)运用siRNA技术沉默细胞内p8、ATF4、CHOP和Atg5的表达。(5)运用质粒转染技术将细胞内p8过表达。(6)使用吖啶橙和丹酰戊二胺染色法检测细胞自噬水平。(7) Annexin V-FITC/PI 和 Annexin V-PE/7-AAD染色后用流式细胞术检测细胞凋亡率(8)建立人源性裸小鼠移植瘤模型检测体内抗肿瘤效果。结果：(1)DHA上调肿瘤细胞内p8的转录和表达用20μM浓度DHA处理HeLa和HCT116后,发现12h内p8、ATF4、CHOP蛋白表达先后上调,并且p8、ATF4、CHOP的mRNA均显著上升。用siRNA沉默p8后发现ATF4和CHOP的上调均被抑制,而过表达p8后ATF4和CHOP的表达进一步上调,提示DHA诱导的ATF4和CHOP上调受p8介导调控。(2)p8上调降低了DHA抑制肿瘤细胞增殖的作用用SRB法检测DHA对肿瘤细胞抑制率发现,p8沉默后的肿瘤细胞对DHA的敏感性增加,而过表达p8后肿瘤细胞对DHA的敏感性降低。在用Western Blot法检测凋亡蛋白和用流式细胞术检测细胞凋亡率实验中,发现p8沉默后DHA诱导肿瘤细胞凋亡率明显上升(p<0.05),而过表达p8后细胞凋亡率下降(p<0.01)。并且干扰ATF4或CHOP蛋白表达后同样也提高了DHA诱导的细胞凋亡率。(3)p8的上调引起肿瘤细胞发生自噬用AO和MDC染色法观察到DHA作用后细胞内自噬泡数量增加,而干扰p8后细胞的自噬泡数量减少,并且用自噬标志性蛋白LC3检测发现干扰p8后DHA诱导的LC3-Ⅱ的累积水平较对照组明显下降,而过表达p8后LC3-Ⅱ的累积水平进一步上调。干扰ATF4和CHOP后同样也观察到DHA诱导的细胞自噬水平下降,提示DHA作用肿瘤细胞后通过p8-ATF4-CHOP通路诱导细胞自噬。(4) 抑制自噬提高了DHA诱导肿瘤细胞凋亡的作用将肿瘤细胞分别预处理3-MA和氯喹抑制细胞自噬,或者沉默自噬基因Atg5后,发现自噬抑制后DHA诱导肿瘤细胞的凋亡水平明显升高。提示p8可能通过上调ATF4和CH()P,进一步诱导细胞自噬而降低肿瘤细胞对DHA的敏感性。(5)DHA与CQ合用协同抑制肿瘤细胞和小鼠移植瘤的增殖将DHA和氯喹(CQ)合用处理肿瘤细胞,计算得出协同指数表明两种药物在体外发挥协同抑制肿瘤细胞增殖作用。在采用HeLa细胞裸小鼠移植瘤模型评价DHA与CQ合用对移植瘤的体内抑制作用的实验中,我们发现联合用药组肿瘤的抑制效果高于单用组,并具有显著性差异(p<0.05)。结论：本文首次发现肿瘤细胞中应激相关蛋白p8的表达在二氢青蒿素作用后迅速显著上调,并介导内质网应激相关蛋白ATF4和CHOP表达的上调,进一步诱导细胞自噬,从而降低二氢青蒿素诱导肿瘤细胞凋亡水平。此外,我们发现二氢青蒿素与自噬抑制剂氯喹合用在体内外实验中均显示良好的协同抗肿瘤效果。这些结果显示p8有潜力成为抗肿瘤的新靶点,并为肿瘤治疗提供新的联合用药方案及理论基础。

关键词：二氢青蒿素 p8 内质网应激细胞自噬氯喹

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小学数学语言能力的培养策略

数学教学通讯 2021年第16期 22-23页

作者：陈桑桑浙江省台州市玉环市清港中心小学 317606

学生在学习中,需要展示自身对知识的理解和对问题的解答,因而需要借助数学语言,以“说”为载体进行展示和反映,从而确立了学生数学语言能力的重要意义。文章认为,可以从以下方面培养小学生的数学语言能力:构建读、做、说共同体,让学生敢... 详细信息

学生在学习中,需要展示自身对知识的理解和对问题的解答,因而需要借助数学语言,以“说”为载体进行展示和反映,从而确立了学生数学语言能力的重要意义。文章认为,可以从以下方面培养小学生的数学语言能力:构建读、做、说共同体,让学生敢说;设立示范讲堂,让学生会说;鼓励质疑问难,让学生想说;创新训练方式,让学生善说。

关键词：数学语言能力敢说会说想说善说

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双维度探析我国电信业的改革路径

华商 2008年第4期 80-81页

作者：陈桑桑厦门大学公共事务学院福建厦门361005

电信业重组一直是社会关注的热点,在中国电信业发展和改革面临关键阶段之际,需要从整体上把握改革的思路。本文在对电信业改革起因探讨的基础上,通过改革的两个维度、实践中改革的路径选择分析,提出完善法律制度、监管制度和价格形成机... 详细信息

电信业重组一直是社会关注的热点,在中国电信业发展和改革面临关键阶段之际,需要从整体上把握改革的思路。本文在对电信业改革起因探讨的基础上,通过改革的两个维度、实践中改革的路径选择分析,提出完善法律制度、监管制度和价格形成机制以及产权多元化改革和实施特许经营的措施,旨在为我国电信业深化改革的实践提供有益的建议。

关键词：电信业垄断制度变迁企业再造管制

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让语文课堂充满美的气息

教学月刊（小学版）（语文） 2016年第4期 35-37页

作者：陈桑桑浙江省义乌市实验小学教育集团

凡是能陶冶性情、丰富心灵的活动都是审美教育。小学语文教材蕴含着丰富的人性之美、自然之美、科学之美。审美教育的目标是造就丰富的灵魂,使人有丰富的情感体验和内心生活,因此在阅读教学中,培养学生的审美能力是非常必要的。

关键词：小学语文阅读教学审美教育

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绿色建筑施工管理理念及有效实施策略探讨

城市建设理论研究(电子版) 2023年第6期 37-39页

作者：孙漫漫陈桑桑北京城建中南土木工程集团有限公司浙江大丰建筑装饰工程有限公司

近年来，随着建筑行业的发展，加上绿色节能理念逐渐深入人心，绿色建筑施工管理理念逐渐应用到建筑工程建设中，并且在实践当中取得了良好的应用效果。在这样的形势下，建筑施工企业也需要积极转变自身的观念，积极树立绿色建筑施工管... 详细信息

近年来，随着建筑行业的发展，加上绿色节能理念逐渐深入人心，绿色建筑施工管理理念逐渐应用到建筑工程建设中，并且在实践当中取得了良好的应用效果。在这样的形势下，建筑施工企业也需要积极转变自身的观念，积极树立绿色建筑施工管理理念，完善管理制度，将其应用到工程实践当中，从而在实现绿色节能的同时，进一步提升建筑行业的现代化水平。基于此，本文首先研究了绿色建筑施工管理理念的特点和实施的意义，并且结合绿色管理理念实施的原则，提出了一些有效的实施对策。

关键词：绿色建筑施工管理理念实施策略