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作者：陈杨葭南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是指因各种致病因素(外伤、炎症、肿瘤等)引起脊髓损害,造成损害平面以下的脊髓神经功能(运动、感觉、括约肌及自主神经功能)障碍的一类疾病,致残率高。脊髓损伤严重影响了患者的生存质... 详细信息

研究背景及目的脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是指因各种致病因素(外伤、炎症、肿瘤等)引起脊髓损害,造成损害平面以下的脊髓神经功能(运动、感觉、括约肌及自主神经功能)障碍的一类疾病,致残率高。脊髓损伤严重影响了患者的生存质量,有超过50%的患者存在不同程度的下肢运动功能障碍。针对运动功能障碍,目前尚无有效的方法可以完全治愈,步行训练作为临床上常规的康复治疗措施,被认为能够在一定程度上促进脊髓损伤患者下肢运动功能的恢复。在众多实验研究当中,人们发现,步行训练可以通过改善脊髓损伤部位血供、减轻炎症反应、提高局部神经营养因子表达、刺激脊髓内部神经网络结构激活重塑等途径促进实验动物后肢运动功能改善。步行中枢模式发生器(central pattern generator, CPG)是存在于脊髓低位胸段(T11-T13)及所有腰段(L1-L6)内的一种脊髓内固有的中间神经元网络结构,由相互支配联系的兴奋性中间神经元和抑制性中间神经元构成。CPG接受来自中脑运动区(mesencephalic locomotor region,MLR)的运动指令,执行步行动作的启动和发生。步行CPG具有训练依赖可塑性,即使完全失去上位中枢的控制,如果接受了特定参数的持续刺激,CPG内的兴奋性和抑制性中间神经元能够自激生成电活动,产生稳健的相位依赖性振荡信号,另外,CPG整合来自皮肤和肌肉的感觉传入信息,最终输出协调的节律活动步行模式。CPG中兴奋性中间神经元合成的神经递质主要包括谷氨酸、去甲肾上腺素、多巴胺等,这些兴奋性中间神经元在CPG自激启动、维持和协调节律的过程中均扮演重要角色,但目前尚没有对上述三类兴奋性中间神经元进行同期的比较观察,故无法确定究竟何种兴奋性中间神经元的激活在步行CPG中处于核心地位。小动物PET/CT(micro-PET/CT)是将正电子发射型电子计算机断层显像技术(PET)和X射线计算机断层成像技术(CT)结合的影像学检查手段,在基础研究中主要用于观察实验动物肿瘤、心血管系统等高代谢组织的变化。脊髓作为中枢神经系统的一部分,其主要的能量来源也是葡萄糖,目前已有实验研究利用micro-PET/CT观察到了在不同干预条件下小动物脊髓的局部代谢变化。故本研究拟结合18F-FDG-micro-PET/CT观察SCI大鼠腰段脊髓的代谢程度从而推断CPG在脊髓受损及步行训练刺激的条件下能否激活。本课题取T10节段不完全脊髓损伤大鼠模型,对其进行6周的跑台步行训练干预。通过定期评价三组大鼠BBB行为学评分,观察大鼠腓肠肌运动终板的数量及形态学变化,采用18F-FDG-Micro PET/CT、尼式染色及免疫荧光染色观察大鼠脊髓腰段CPG的代谢水平和谷氨酸能、去甲肾上腺素能、多巴胺能兴奋性神经元功能状态,分别从行为学、组织学、免疫化学、代谢等方面系统观察步行训练对SCI大鼠腰段步行CPG的影响,并探索CPG内优势中间神经元成份,为寻找新的有效的脊髓损伤康复策略提供新的思路。方法1.研究对象：SD大鼠45只,随机分为步行训练组(n=15)、损伤对照组(n=15)、假手术组(只打开椎板,不造成脊髓损伤)(n=15);脊髓损伤组采用NYU法建立中度T10不完全脊髓损伤模型。2.研究方法造模分组后,对步行训练组按预设方案进行干预,对照组和假手术组常规饲养,不进行任何干预;定期观察各组大鼠BBB评分,术后7周利用micro-PET/CT扫描观察各组大鼠CPG代谢水平,取材后行免疫荧光染色、尼式染色观察步行CPG中间神经元数量和表达,利用乙酰胆碱酯酶染色观察腓肠肌运动终板的表达。(1)干预方法：步行训练组大鼠在伤后1周开始进行为期6周的跑台步行训练,训练方法为每天30分钟,分2次进行,每次15分钟,每周训练5天,休息2天,初始速度设置为5m/min。随后,根据大鼠恢复情况,逐渐提高跑台速度至15m/min。训练期间每天观察大鼠精神状态、进食进水量。(2)取材：腓肠肌新鲜取材及切片：在术后7周,完整取下大鼠右侧小腿三头肌,置于-80℃冰箱快速冷冻。1h后取出标本,进行常规冰冻序列切片,每5片取一片组织切片,标本厚度为10mm;大鼠灌注、脊髓取材及切片：在术后7周经大鼠左心室利用生理盐水及4%多聚甲醛灌注大鼠,直至大鼠躯干及四肢发白僵硬。定位大鼠脊髓的腰1-2节段并完整取出。按常规进行组织标本固定、脱水及包埋。沿脊髓冠状位进行常规冰冻序列切片,每5片取一片组织切片,切片厚度分为10μm及20μm。所有组织切片放置在密闭片盒中,-80℃冰箱保存。(3)观察指标与方法：1)行为学评定：采用双人双盲法评价三组大鼠术前及术后第7、14、21、28、35、42天的Basso, Beattie and Bresnahan(BBB)评分。2)CPG代谢

关键词：脊髓损伤步行中枢模式发生器兴奋性中间神经元运动终板可塑性代谢

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减重步行训练对不完全脊髓损伤大鼠脚桥核可塑性影响的研究

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中国康复医学杂志 2017年第6期32卷 624-630页

作者：冯杰扬陈杨葭郭磊钟剑锋张桂通刘佳叶超群南方医科大学第二临床医学院广东510515 陆军总医院骨科研究所解放军医学院空军总医院康复科

目的:探索减重步行训练对不完全脊髓损伤大鼠脚桥核可塑性的影响。方法:将雌性SD大鼠24只分为减重步行训练组、未训练组和假手术组,每组8只,用美国NYU脊髓冲击损伤仪制作大鼠T10脊髓不完全损伤模型。采用PET-CT、免疫荧光染色及BBB评分... 详细信息

目的:探索减重步行训练对不完全脊髓损伤大鼠脚桥核可塑性的影响。方法:将雌性SD大鼠24只分为减重步行训练组、未训练组和假手术组,每组8只,用美国NYU脊髓冲击损伤仪制作大鼠T10脊髓不完全损伤模型。采用PET-CT、免疫荧光染色及BBB评分观察减重步行训练对不完全脊髓损伤(iSCI)大鼠中脑运动区(MLR)脚桥核可塑性变化和后肢运动功能的改善。结果:减重步行训练组大鼠的后肢运动功能BBB评分在造模后4周、7周两个时间点的分值均较未训练组高(P0.05)。神经元特异性核抗原(NeuN)免疫荧光染色检测显示训练组、未训练组、假手术组三组间大鼠脚桥核的神经元数量差异无显著性意义(P>0.05),而脚桥核2型囊泡谷氨酸转运体(VGLUT2)的积分光密度值(IOD)比较,假手术组IOD表达最高,训练组较未训练组明显增强(P<0.01)。结论:减重步行训练能够明显提高iSCI大鼠后肢运动功能及其脚桥核中谷氨酸能信号传递,而且iSCI后大鼠中脑脚桥核的整体代谢及神经元数量无明显改变。因此认为脚桥核的谷氨酸表达增强是减重步行训练使iSCI大鼠后肢步行功能改善的原因之一。减重步行训练能使脚桥核发生神经递质表达层面的可塑性变化。

关键词：不完全性脊髓损伤减重步行训练脚桥核 2型囊泡谷氨酸转运体

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早期综合康复治疗对颅脑损伤患者的临床治疗价值分析

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中国卫生标准管理 2021年第22期12卷 81-84页

作者：陈杨葭陈建敏福建医科大学附属第一医院康复科福建福州350000

目的探究与分析早期综合康复治疗对颅脑损伤患者的临床治疗效果。方法选取本院2018年4月—2020年4月收治的颅脑损伤患者120例,采取随机数字表法分为对照组与观察组,每组60例。对照组实施常规康复治疗,观察组在对照组基础上实施早期综合... 详细信息

目的探究与分析早期综合康复治疗对颅脑损伤患者的临床治疗效果。方法选取本院2018年4月—2020年4月收治的颅脑损伤患者120例,采取随机数字表法分为对照组与观察组,每组60例。对照组实施常规康复治疗,观察组在对照组基础上实施早期综合康复治疗,对比两组患者的神经功能缺损评分(National Institutes of health stroke scale,NIHSS)、洼田饮水试验评级、电视X线透视吞咽功能检查(video fluoroscopy swallowing study,VFSS)结果评分。结果两组治疗后NIHSS评分与治疗前相比较低,观察组治疗后NIHSS评分与对照组相比较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后洼田饮水试验评级与治疗前相比降低,观察组治疗后洼田饮水试验评级与对照组治疗后相比更低,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后口腔期通过时间、咽期延迟时间及咽期通过时间与治疗前相比均缩短,观察组短于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论早期综合康复应用于颅脑损伤患者中可改善神经功能缺损的情况,有效促进吞咽功能的恢复。

关键词：早期综合康复颅脑损伤神经功能缺损吞咽障碍常规干预饮水试验

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神经肌肉电刺激对脑卒中后患者吞咽功能及生活能力的影响

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深圳中西医结合杂志 2021年第16期31卷 35-37页

作者：陈杨葭王志勇福建医科大学附属第一医院福建福州350000

目的:探究神经肌肉电刺激(NMES)对脑卒中后患者吞咽功能及生活能力的影响。方法:选取2018年1月至2021年1月福建医科大学附属第一医院收治的脑卒中后吞咽功能障碍患者100例,随机分为观察组和对照组,每组50例。两组均给予常规治疗,对照组... 详细信息

目的:探究神经肌肉电刺激(NMES)对脑卒中后患者吞咽功能及生活能力的影响。方法:选取2018年1月至2021年1月福建医科大学附属第一医院收治的脑卒中后吞咽功能障碍患者100例,随机分为观察组和对照组,每组50例。两组均给予常规治疗,对照组加以康复训练治疗,观察组在对照组基础上加以NMES治疗,比较两组患者的营养指标、日常生活能力、吞咽功能治疗效果及并发症情况。结果:观察组患者治疗后的血清白蛋白(ALB)、血红蛋白(Hb)、血清总蛋白(TP)水平均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组日常生活能力量表(ADL)评分明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组患者吞咽功能评级相较对照组有明显改善,差异具有统计学意义(χ^(2)=2.236,P<0.05)。观察组患者并发症发生率明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:NMES对脑卒中患者吞咽功能的改善有显著疗效,并能显著提升营养水平,改善生活能力,减少并发症,具有较高的临床参考价值。

关键词：脑卒中吞咽功能障碍神经肌肉电刺激康复训练

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左肾副动脉贯穿左卵巢静脉变异1例

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中国临床解剖学杂志 2021年第3期39卷 251-251页

作者：华文熙陈杨葭福建医科大学基础医学院病理学系福州350122 福建医科大学附属第一医院康复科福州350122

在解剖1具中年女性尸体(身长156 cm)时,发现左肾有肾副动脉从左肾下极进入肾,并且左肾副动脉在入肾的走行中贯穿左卵巢静脉(图1)。为积累国人解剖学资料,现报道如下:左肾副动脉:平第3腰椎上缘高度,距左、右髂总动脉分叉下极5.0 cm处,发... 详细信息

在解剖1具中年女性尸体(身长156 cm)时,发现左肾有肾副动脉从左肾下极进入肾,并且左肾副动脉在入肾的走行中贯穿左卵巢静脉(图1)。为积累国人解剖学资料,现报道如下:左肾副动脉:平第3腰椎上缘高度,距左、右髂总动脉分叉下极5.0 cm处,发出1支左肾副动脉(长4.5 cm,外径0.55cm),行向距肾门下缘2.3 cm处入肾。左肾副动脉走行距起始端2.0 cm处,于腰大肌的前方,左输尿管的前内侧以90°角贯穿左卵巢静脉后,跨过输尿管的前方入肾。

关键词：肾副动脉左输尿管左肾下极腰大肌解剖学中年女性起始端

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骨髓间充质干细胞对髋部骨折诱导的老年大鼠急性肺损伤的保护机制

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中国临床解剖学杂志 2015年第6期33卷 672-676页

作者：陈杨葭张艳金刘佳孙天胜华文熙钟剑峰冯杰扬叶超群南方医科大学广州510515 北京军区总医院北京100700

目的：探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMSCs）对老年单侧髋部骨折大鼠急性肺损伤（acute lung injury, ALI）的保护作用。方法将15月龄雌性WISTAR大鼠分为对照组（不做任何处理）、模型组（右髋... 详细信息

目的：探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMSCs）对老年单侧髋部骨折大鼠急性肺损伤（acute lung injury, ALI）的保护作用。方法将15月龄雌性WISTAR大鼠分为对照组（不做任何处理）、模型组（右髋部骨折＋生理盐水）、治疗组（右髋部骨折＋BMSCs）。治疗组于造模后经尾静脉注射1 ml BMSCs（2.5×106/ml），模型组给予等体积生理盐水。创伤后24 h进行肺组织病理评分，ELISA法检测检测肺组织MPO含量、肺及血液炎症因子（TNF-α、IL-6、IL-10）水平。结果与对照组相比，模型组肺部病理学评分、肺组织MPO水平、肺及血液炎症反应相关指标均明显升高（P〈0.01）。BMSCs处理可明显降低肺组织病理学评分，肺组织MPO水平、肺及血液炎症反应相关指标下调，同时IL-10水平有更明显的增高（P〈0.01）。结论髋部骨折可诱发老年大鼠急性肺损伤，BMSCs移植对老年髋部骨折大鼠肺损伤具有保护作用，其机制与缓解全身及肺部炎症反应有关。

关键词：老年大鼠髋部骨折骨髓间充质干细胞急性肺损伤

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微生物培养结果对THA术后慢性假体周围感染二期翻修术疗效的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2015年第9期35卷 1262-1267页

作者：钟剑峰李干陈晓斌孙天胜张建政卢雨欣侯景明包先国焦佼刘佳相子民陈杨葭郭磊南方医科大学研究生院广东广州510515 中国人民解放军北京军区总医院骨科北京100700

目的：探讨全髋关节置换（total hip arthroplasty,THA）术后慢性假体周围感染（periprosthetic joint infection,PJI）患者的微生物培养结果对二期翻修术疗效的影响。方法：回顾性分析中国人民解放军北京军区总医院收治的48例行二期... 详细信息

目的：探讨全髋关节置换（total hip arthroplasty,THA）术后慢性假体周围感染（periprosthetic joint infection,PJI）患者的微生物培养结果对二期翻修术疗效的影响。方法：回顾性分析中国人民解放军北京军区总医院收治的48例行二期翻修术治疗的THA术后慢性PJI（共48髋）患者的临床资料。所有患者一期清创手术时取出假体并置入万古霉素骨水泥占位器;待感染控制后应用骨水泥型假体进行二期翻修,术后应用敏感抗生素治疗。疗效评估指标为控制感染耗时、感染复发率、疼痛评分（visual analog scale,VAS）、Harris髋关节评分以及常规X线检查结果。结果：细菌培养阳性（culture positive,CP）35例,培养性阴性（culture negative,CN）13例。一期清创术后所有患者的感染均得到控制,CN组控制感染耗时较CP组长[（119.3±30.1）d vs.（98.4±25.9）d,P=0.03];二期翻修术后门诊随访9-49个月（平均29.6个月）,末次随访时所有患者的髋关节功能和疼痛较术前均有明显改善。但CN组疼痛VAS评分显著高于CP组[（2.8±1.6）分vs.（1.8±1.2）分,P=0.03]。髋关节Harris评分显著低于CP组[（79.1±9.1）分vs.（85.6±7.1）分,P=0.01],术后优良率也明显较CP组低（53.8%vs.85.7%,P=0.04）。CN组和CP组各有2例复发,但两组感染复发率差异无统计学意义（15.4%vs.5.7%,P=0.62）。结论：采用二期翻修术可有效控制THA术后的慢性PJI,但CN患者的翻修术疗效明显较CP患者差。推测提高病原微生物的检出率并针对性应用敏感抗生素可能对改善PJI翻修术疗效有重要意义。

关键词：全髋关节置换术假体周围感染微生物二期翻修术培养阴性

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槲皮素对大鼠脊髓损伤的保护作用及机制探讨

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解放军医学院学报 2016年第2期37卷 159-163页

作者：郭磊孙天胜江武钟剑峰侯景明刘佳陈杨葭张桂通解放军医学院北京100853 北京军区总医院全军创伤骨科研究所北京100700

目的探讨槲皮素对大鼠急性脊髓损伤的保护作用及其可能机制。方法将72只雌性SD大鼠随机分为模型组(SCI组)、槲皮素组(Que组)和假手术组(Sham组),每组各24只。采用改良Allen's打击法建立脊髓损伤模型,术后评估大鼠后肢运动功能(BBB评分)... 详细信息

目的探讨槲皮素对大鼠急性脊髓损伤的保护作用及其可能机制。方法将72只雌性SD大鼠随机分为模型组(SCI组)、槲皮素组(Que组)和假手术组(Sham组),每组各24只。采用改良Allen's打击法建立脊髓损伤模型,术后评估大鼠后肢运动功能(BBB评分),酶联免疫吸附试验(Elisa)检测脊髓组织匀浆髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性、脂质过氧化产物(malonydialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,取血清检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素10(IL-10)含量。HE染色观察脊髓组织的病理变化,全血细胞分析检测血液白细胞水平变化。结果与模型组相比,槲皮素组大鼠脊髓损伤后6 h脊髓组织MPO含量由(65.5±12.3)nmol/mg降至(42.2±10.3)nmol/mg,MDA含量由(62.9±2.7)U/g降至(50.3±1.8)U/g,SOD水平由(212.4±10.3)U/mg升至(310.6±11.3)U/mg,血清TNF-α水平由(398.1±7.4)pg/ml降至(284.4±7.6)pg/ml,血清IL-6水平由(359.1±20.9)pg/ml降至(242.9±5.2)pg/ml,血清IL-10水平由(288.3±4.8)pg/ml升至(347.9±5.9)pg/ml,全血白细胞计数由(6.6±1.2)/视野降至(3.4±0.8)/视野,脊髓损伤后14 d时BBB评分由6.7±0.4升至9.1±0.7,差异均有统计学意义(P<0.05)。光镜下脊髓组织损伤程度降低。结论槲皮素对大鼠急性脊髓损伤具有保护作用,其机制可能是通过抑制炎性因子从而调节炎症反应及自由基而实现的。

关键词：脊髓损伤槲皮素炎症反应氧化应激反应大鼠

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大鼠脊髓损伤后β淀粉样蛋白的表达及γ分泌酶抑制剂对其作用机制的影响

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解放军医学院学报 2016年第4期37卷 371-376页

作者：郭磊侯景明钟剑峰刘佳孟繁星陈杨葭冯杰扬焦皎孙天胜解放军医学院北京100853 北京军区总医院全军创伤骨科研究所北京100700 第三军医大学附属西南医院重庆400038

目的探讨β淀粉样蛋白(amyloidβ,Aβ)在大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后的表达变化及γ分泌酶抑制剂DAPT对其作用机制的影响。方法选用雌性SD大鼠117只,随机分成3组:假手术组(Sham组,31只)、脊髓损伤组(SCI组,43只)、干预组(D... 详细信息

目的探讨β淀粉样蛋白(amyloidβ,Aβ)在大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后的表达变化及γ分泌酶抑制剂DAPT对其作用机制的影响。方法选用雌性SD大鼠117只,随机分成3组:假手术组(Sham组,31只)、脊髓损伤组(SCI组,43只)、干预组(DAPT组,43只),采用Allen’s打击法制作大鼠脊髓损伤模型,DAPT组于造模前及术后给予DAPT药物溶液胃管灌注,并于术后6 h、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d取血液、脑脊液及损伤段脊髓组织,分别行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和脑脊液Aβ水平,免疫印迹法(Western blot)检测脊髓组织淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)、β淀粉样蛋白、轴突生长抑制因子受体(neurite growth inhibitor receptor 1,Ng R1)、Rho相关激酶2(Rho related kinase 2,Rock2)蛋白水平,免疫组化分析观察Aβ表达并计数阳性细胞,采用BBB评分评估大鼠后肢运动功能恢复情况。结果 SCI组大鼠Aβ水平明显高于Sham组(P<0.05),血清和脑脊液中Aβ水平在SCI后6 h开始升高,3 d时达到高峰,7 d时降至正常水平,应用DAPT能够明显降低SCI后Aβ水平(P<0.05);脊髓损伤后3 d SCI组Aβ、Ng R1、Rock2蛋白水平较Sham组明显升高(P<0.05),DAPT组Aβ、Ng R1、Rock2蛋白水平较SCI组明显降低(P<0.05);免疫组化分析可见损伤区脊髓Aβ阳性细胞明显增多,DAPT组Aβ阳性细胞数明显少于SCI组(P<0.05);DAPT组大鼠BBB评分明显高于SCI组(P<0.05);SCI大鼠血清和脑脊液Aβ水平与运动功能BBB评分呈负相关(P<0.05)。结论大鼠SCI后Aβ表达上调,通过应用γ分泌酶抑制剂DAPT减少Aβ表达能够促进运动功能恢复,其机制可能是通过下调Ng R1蛋白表达、抑制Rho/Rock通路激活,从而减少白质区髓鞘结构损伤。

关键词：脊髓损伤 β淀粉样蛋白轴突生长抑制因子受体 Rho相关激酶大鼠

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