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作者：陈杏晔广州中医药大学

学位级别：硕士

目的：建立高效稳定的大鼠毛囊干细胞(hair follicle stem cells, FSCs)和毛囊成纤维细胞原代取材、分离、培养方法,并对所得细胞进行鉴定。制备七厘散含药血清,将七厘散含药血清加入FSC培养体系中,明确其对FSC增殖的促进作用。选用皮... 详细信息

目的：建立高效稳定的大鼠毛囊干细胞(hair follicle stem cells, FSCs)和毛囊成纤维细胞原代取材、分离、培养方法,并对所得细胞进行鉴定。制备七厘散含药血清,将七厘散含药血清加入FSC培养体系中,明确其对FSC增殖的促进作用。选用皮耐克作为组织工程皮肤支架,将毛囊成纤维细胞与皮耐克支架复合构建人工真皮,再将FSC与人工真皮共培养,构建组织工程皮肤。制作裸鼠全层皮肤缺损模型,将构建的组织工程皮肤移植入皮肤创面,探讨七厘散对FSC组织工程皮肤修复创面的影响。由于七厘散复方药物成分复杂,为了进一步探讨中药有效成分在FSC修复皮肤创面中的作用机理,本研究选用七厘散中君药血竭的主要活性成分——龙血素A单体干预FSC,探讨其对FSC生长及细胞周期的影响,并进一步检测Wnt/β-catenin信号通路中主要蛋白和下游基因表达的变化,初步探讨龙血素A对FSC增殖或定向分化的分子机制。方法：采用“两步酶”消化法获取乳鼠触须部皮肤FSC,毛囊成纤维细胞采用组织块法培养,免疫荧光检测培养的FSC中角蛋白15 (cytokeratin 15, CK15),角蛋白19(cytokeratin 19, CK19)、β1整合素的表达以及毛囊成纤维细胞中纤维连接蛋白(fibronectin, FN)、层粘连蛋白(laminin, LN)、波形蛋白(Vimentin)的表达。严格遵循“通法”制备大鼠七厘散含药血清。噻唑蓝(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide, MTT)法探究不同时间点、不同体积百分比七厘散含药血清作用于FSC后的细胞活性。将毛囊成纤维细胞接种于皮耐克真皮支架构建真皮,表面种植5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU)标记的FSC, Transwell双层培养板进行气-液界面培养,构建FSC组织工程皮肤。制作裸鼠背部皮肤缺损模型后将动物随机分为A、B组,A组用生理盐水预处理创面,B组用七厘散预处理创面,然后各动物创面均移植构建的FSC组织工程皮肤。移植后再将每组动物随机分为5小组,分别对移植处创面进行生理盐水、表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)阳性药物、七厘散内服、七厘散外用、七厘散内服+外用方式处理。每日观察并记录创面大体愈合情况,制订评分标准,统计得分。于移植后3d、5d、7d、14d在原创面处取材,标本作病理学和免疫荧光组织化学检测。MTT法探究不同时间点、不同浓度龙血素A对FSC增殖的影响。流式细胞仪检测龙血素A对FSC细胞周期的影响。Western Blot、实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术对龙血素A干预的FSC胞质内β-catenin、糖原合成激酶(glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β)蛋白以及核内转录因子3 (transcription factor 3,Tcf3)、淋巴增强因子1 (lymphoid enhancer factor, Lefl)、c-myc、cyclin D1基因的表达进行检测。结果：“两步酶”法分离、培养的细胞为圆形或多角形,典型铺路石状,呈CK15、CK19、β1整合素表达阳性;组织块法获得的细胞为纺锤形,FN、LN、Vimentin表达阳性。连续灌胃3d、体积百分比为2.5%的七厘散含药血清作用于FSC 24h的促增殖效果最佳。毛囊成纤维细胞与皮耐克复合,连续培养5d,构建的真皮无污染,细胞生长良好。将FSC与人工真皮复合后继续培养5d,再进行气-液界面培养5d后,得到的人工皮肤复合物质地柔软,有一定的韧性和弹性。FSC组织工程皮肤移植后,各组动物生存状态良好,创面无感染、出血,移植物无脱落,亦无明显的免疫排斥反应。术后3d创面逐渐缩小,血痂形成。术后5d血痂逐渐变硬,变厚。术后7d痂面面积慢慢变小,痂面周缘可见新生皮肤。术后14d大部分裸鼠血痂脱落,其中A、B两组中七厘散外用组和七厘散内服+外用组血痂脱落较其余组早。术后14d,A、B两组中七厘散外用组和七厘散内服+外用组裸鼠创面已上皮化,移植处新生皮肤较厚,质地柔软,呈白色或粉肤色,可与正常皮肤相区别。通过观察创面愈合情况,制订评分标准,半定量统计结果显示术后3d,A、B两组平均得分差异有统计学意义,表明七厘散预处理创面在愈合早期能抑制创面出血、减轻炎症反应、促进创面结痂,对促进创面修复有积极作用;A、B两组各用药组与生理盐水对照组相比,差异有统计学意义,说明在移植后早期,不同的用药方式对伤口的愈合有影响。术后5d,创

关键词：七厘散龙血素A 毛囊干细胞组织工程皮肤 Wnt/β-catenin信号通路

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毛囊细胞高效分离培养方法的建立

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广州中医药大学学报 2014年第5期31卷 807-809,852-854页

作者：陈杏晔李凡刘爱军广州中医药大学基础医学院广东广州510006 广州中医药大学组织学与胚胎学教研室广东广州510006

【目的】建立一种简单易行、高效稳定、细胞活性好的毛囊细胞分离培养方法。【方法】无菌条件下剪下SD乳鼠触须部皮肤,拔出单个毛囊。采用Ⅰ型胶原酶、胰酶两步法消化毛囊,细胞悬液接种于细胞外基质包被的培养板中,以体积分数1%胎牛血清... 详细信息

【目的】建立一种简单易行、高效稳定、细胞活性好的毛囊细胞分离培养方法。【方法】无菌条件下剪下SD乳鼠触须部皮肤,拔出单个毛囊。采用Ⅰ型胶原酶、胰酶两步法消化毛囊,细胞悬液接种于细胞外基质包被的培养板中,以体积分数1%胎牛血清的K-SFM培养液培养,次日换无血清培养液。剩余组织块剪碎铺展于培养瓶中,添加含血清的HG-DMEM培养基常规培养。取以上2种细胞进行免疫荧光鉴定。毛囊上皮细胞进行流式细胞仪检测。【结果】两步酶法分离得到的毛囊上皮细胞贴壁迅速,圆形或多角形,呈典型铺路石状。培养的组织块周围有长梭形细胞爬出,细胞有突起,并连接成网状。毛囊上皮细胞CK15、CK19、β1整合素表达阳性,以G1期细胞为主,占75.6%。毛囊结缔组织鞘细胞的层粘连蛋白、纤维连接蛋白、波形蛋白表达阳性。【结论】分离培养的细胞为毛囊干细胞和成纤维细胞,该方法得到的细胞贴壁快、均一性好、增殖能力强。

关键词：毛囊干细胞/病理学成纤维细胞/病理学分离细胞培养

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七厘散含药血清对乳鼠毛囊成纤维细胞增殖的影响

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陕西中医 2014年第3期35卷 375-377页

作者：刘爱军陈杏晔广州中医药大学组胚教研室广州510006 广州中医药大学 2012级研究生广州510006

目的:七厘散是促进皮肤愈合的经典方药,本文旨在探讨七厘散含药血清对SD乳鼠触须部毛囊真皮成纤维细胞增殖的影响。方法:无菌条件下分离SD乳鼠触须部完整毛囊,植块法培养真皮细胞,并利用免疫荧光技术进行鉴定。SD大鼠行七厘散灌胃,分别... 详细信息

目的:七厘散是促进皮肤愈合的经典方药,本文旨在探讨七厘散含药血清对SD乳鼠触须部毛囊真皮成纤维细胞增殖的影响。方法:无菌条件下分离SD乳鼠触须部完整毛囊,植块法培养真皮细胞,并利用免疫荧光技术进行鉴定。SD大鼠行七厘散灌胃,分别于灌胃后3d、5d、7d行腹主动脉取血,制备含药血清,用不同体积百分比的含药血清检测其对毛囊真皮细胞增殖的影响。结果:分离培养的毛囊真皮细胞呈成纤维状,免疫荧光鉴定为成纤维细胞。3d和5d七厘散含药血清对毛囊真皮成纤维细胞的促增殖作用较7d组强。3d组中以体积百分比为5%的含药血清组促增殖作用最强。结论:3d组体积百分比5%的七厘散含药血清对SD乳鼠触须部毛囊真皮成纤维细胞有较强的促增殖作用,本实验为进一步探讨中药促毛囊真皮成纤维细胞增殖的分子机制提供实验基础。

关键词：七厘散动物,实验大鼠乳鼠

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龙血素A对体外培养的毛囊干细胞增殖分化的影响

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广州中医药大学学报 2016年第2期33卷 210-215页

作者：李凡唐铱陈杏晔刘爱军广州中医药大学基础医学院广东广州510006 广州中医药大学组织学与胚胎学教研室广东广州510006

【目的】探讨龙血素A对体外培养的毛囊干细胞(FSCs)增殖和分化的影响。【方法】分离培养SD乳鼠的FSCs,采用倒置显微镜、扫描电镜观察细胞形态,并进行I型跨膜糖蛋白(CD34)、转铁蛋白受体(CD71)免疫荧光鉴定。将FSCs分为正常对照组、阳性... 详细信息

【目的】探讨龙血素A对体外培养的毛囊干细胞(FSCs)增殖和分化的影响。【方法】分离培养SD乳鼠的FSCs,采用倒置显微镜、扫描电镜观察细胞形态,并进行I型跨膜糖蛋白(CD34)、转铁蛋白受体(CD71)免疫荧光鉴定。将FSCs分为正常对照组、阳性对照组(Li Cl组)、龙血素A组,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测3组细胞的增殖,免疫荧光法检测3组细胞角蛋白15(CK15)、CK19、CK14、CK10、Involucrin的表达率。【结果】倒置显微镜、扫描电镜下观察到培养的FSCs细胞结构完整,生长状况良好,呈CD34、CD71阳性。MTT检测结果提示龙血素A对FSCs促增殖作用最强、Li Cl次之。龙血素A组CK15表达高于正常对照组和Li Cl组。正常对照组CK19表达高于其他2组。CK14 3组表达率相近。龙血素A组Involucrin表达率最高、CK10表达最低,而Li Cl组Involucrin表达最低、CK10表达最高。【结论】龙血素A促FSCs增殖效果明显,氯化锂促FSCs分化效果明显。

关键词：龙血素A/药理学角蛋白增殖分化毛囊干细胞/病理学细胞培养

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皮耐克组织工程皮肤修复皮肤创面的研究

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广州中医药大学学报 2015年第3期32卷 529-532,580-582页

作者：陈杏晔李凡刘爱军广州中医药大学基础医学院研究生广东广州510006 广州中医药大学组织学与胚胎学教研室广东广州510006

【目的】探讨采用皮耐克真皮支架与大鼠表皮干细胞、成纤维细胞构建组织工程皮肤修复皮肤缺损的可行性。【方法】分离培养大鼠表皮干细胞、成纤维细胞并进行免疫荧光鉴定。成纤维细胞接种于皮耐克敷料构建类真皮,表面种植表皮干细胞构... 详细信息

【目的】探讨采用皮耐克真皮支架与大鼠表皮干细胞、成纤维细胞构建组织工程皮肤修复皮肤缺损的可行性。【方法】分离培养大鼠表皮干细胞、成纤维细胞并进行免疫荧光鉴定。成纤维细胞接种于皮耐克敷料构建类真皮,表面种植表皮干细胞构建组织工程皮肤。将BALB/c裸鼠复制背部皮肤缺损模型,随机分为3组,单纯支架组移植皮耐克敷料,成纤维细胞支架组移植皮耐克成纤维细胞复合物,组织工程皮肤组移植皮耐克组织工程皮肤。术后记录创面愈合情况,并分别取5、7 d创面组织进行病理学检查。【结果】表皮干细胞角蛋白15(CK15)、β1整合素表达阳性,成纤维细胞层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)表达阳性。组织工程皮肤组愈合情况最好,移植物处成纤维细胞增生,新生毛细血管明显,表皮细胞分层排列规则。【结论】皮耐克组织工程皮肤促进裸鼠皮肤创面修复效果良好。

关键词：皮耐克组织工程皮肤/病理学细胞培养疾病模型, 动物裸鼠

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从“五四”到“五卅”:中国共产党的领导与近代群众运动的发展

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社会科学研究 2024年第3期 196-202页

作者：李晔晔吉林大学马克思主义学院吉林长春130012

近代以来,群众运动的发展过程中,五四运动主要是群众自生自发的政治参与,缺乏共同的目标和有效的组织。五四运动至五卅运动期间,群众运动日益成为各方政治力量瞩目的焦点,成为政治参与的重要表现形式。中国共产党的出现,为群众运动提供... 详细信息

近代以来,群众运动的发展过程中,五四运动主要是群众自生自发的政治参与,缺乏共同的目标和有效的组织。五四运动至五卅运动期间,群众运动日益成为各方政治力量瞩目的焦点,成为政治参与的重要表现形式。中国共产党的出现,为群众运动提供了理论引领和有效的组织支持,使群众运动逐渐发生深刻变化。五卅运动展现了近代群众运动的另一个高峰,也是群众运动发展的重要里程碑。中国共产党在运动期间的领导与组织支持,使五卅运动与此前的群众运动判然有别。

关键词：群众运动政治参与五四运动五卅运动

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全球治理与国家治理互动的理论要义及现实出路

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国际观察 2024年第4期 84-106页

作者：刘贞晔中国政法大学北京100088

全球治理在很大意义上因应国家治理的外部性而生。全球治理与国家治理在当今时代互动互融，相互贯通，已形成一种“整体性治理”。本文从追溯治理与善治概念的提出开始，考察了国际国内学术界关于全球治理与国家治理互动的研究进展，在... 详细信息

全球治理在很大意义上因应国家治理的外部性而生。全球治理与国家治理在当今时代互动互融，相互贯通，已形成一种“整体性治理”。本文从追溯治理与善治概念的提出开始，考察了国际国内学术界关于全球治理与国家治理互动的研究进展，在此基础上，本文对全球治理与国家治理互动关系的理论要义进行了挖掘和阐述，其理论要义主要体现为：全球治理与国家治理相互推动；全球治理规范变革与国家治理制度变革相互促进；有效的治理制度和法治是治理互动达至善治效果的根基。最后本文分析了全球治理与国家治理良性互动的现实困境、出路和中国的治理变革。其中，主要大国对国家利益的片面追求导致全球“劣治”和“恶治”，大国合作关系的不确定性，国家治理能力弱化和治理能力不对称，文明排斥和极端民族主义以及有效治理制度供给不足等是阻碍全球治理与国家治理良性互动的主要障碍。坚持开放性治理，大国达成合作共识，再造和完善国家治理能力，坚持文明间的多样包容，积极推进全球有效治理制度的供给是克服各种障碍的主要出路。当下中国可以通过加强自身能力建设，为全球治理与国家治理的互动提供新的动力，以自身的治理经验和理念，重塑21世纪的全球治理秩序。

关键词：全球治理国家治理国际规范国内政治国家治理能力

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氟取代有机空穴传输材料在钙钛矿太阳能电池中的应用研究进展

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有机化学 2024年第4期44卷 1197-1209页

作者：刘冬张晓晔李战峰太原理工大学新型传感器与智能控制教育部重点实验室太原030024

钙钛矿太阳能电池(PSCs)因其性能优异、成本低廉和制备工艺简单,在环境、生态和能源结构调整方面具有重要意义.其中空穴传输材料(HTMs)有效调节电池界面势垒、促进空穴传输和收集、降低电荷复合、优化钙钛矿层与电极界面以及改善钙钛矿... 详细信息

钙钛矿太阳能电池(PSCs)因其性能优异、成本低廉和制备工艺简单,在环境、生态和能源结构调整方面具有重要意义.其中空穴传输材料(HTMs)有效调节电池界面势垒、促进空穴传输和收集、降低电荷复合、优化钙钛矿层与电极界面以及改善钙钛矿光吸收层的性质,在PSCs中发挥重要的作用.氟取代材料具有独特的电荷传输特性和光电性能,向有机分子中引入具有诱导效应和共轭效应的氟原子可以降低分子能级,提高HTMs的空穴迁移率,进而提高PSCs的性能.此综述对氟取代有机空穴传输材料对PSCs光电性能的影响及其作用机制进行了梳理和总结.

关键词：钙钛矿太阳能电池空穴传输材料氟取代有机材料

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城市河道生态治理与修复技术研究进展

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人民长江 2024年

作者：张萍萍肖紫慧程昕陈杏华南农业大学

本文旨在探讨城市河道生态治理与修复技术的研究热点及发展趋势，采用文献计量学方法，基于Web of Science (WOS) 数据库进行文献检索，并借助VOSviewer和Microsoft Excel软件，对2010—2023年国内外相关文献进行系统梳理与分析，揭示... 详细信息

本文旨在探讨城市河道生态治理与修复技术的研究热点及发展趋势，采用文献计量学方法，基于Web of Science (WOS) 数据库进行文献检索，并借助VOSviewer和Microsoft Excel软件，对2010—2023年国内外相关文献进行系统梳理与分析，揭示了该领域的研究现状。结果表明，河道生态治理及修复技术的全球关注度持续升温，发文量稳步增长，显示其仍处于快速发展期；中国已成为该领域的核心生产力，但美国的研究成果认可度最高；研究热点从河道治理转向水生态修复，再到城市化及自然条件的影响，展现了多学科交叉合作的趋势。面对气候变化和城市化等全球性挑战，该领域具有广阔的发展前景，未来重点将聚焦于河道生态环境的根本改善。

关键词：河道生态治理河道生态修复文献计量研究热点发展趋势

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企业公益行为模式比较及其形成机理研究

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科研管理 2024年第5期45卷 163-171页

作者：李毅魏培晔重庆大学公共管理学院重庆400044 中国人民大学公共管理学院北京100872

企业公益行为是企业参与三次分配、推进共同富裕的重要内容。“为何”及“如何”做公益是企业公益研究的两个核心问题。本文从组织分析的新制度主义理论着手,沿着“环境因素→作用机制→企业公益模式”的逻辑构建解释框架,借助典型案例... 详细信息

企业公益行为是企业参与三次分配、推进共同富裕的重要内容。“为何”及“如何”做公益是企业公益研究的两个核心问题。本文从组织分析的新制度主义理论着手,沿着“环境因素→作用机制→企业公益模式”的逻辑构建解释框架,借助典型案例对比分析,从公益动机、主导者、活动领域、合作伙伴和参与方式五个维度全面比较了不同企业公益模式的异同,并揭示了其形成机理。研究发现:企业公益模式是技术环境与制度环境共同作用的结果。技术环境及其效率机制是影响企业公益的基础性力量,但它同时也受到制度环境及其规制机制、规范机制与认知机制的调适。主导机制之间的不同搭配格局和互动过程塑造了企业公益模式的多样形态。这一发现不仅在理论上推进了企业公益研究,也为政府更有效地动员企业资源及公益机构进行捐赠方开发和维护提供了实践启示。

关键词：企业公益行为制度环境技术环境三次分配新制度主义

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