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肠炎沙门菌非编码小RNA RyhB调控毒力相关靶基因的筛选、鉴定和功能研究

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肠炎沙门菌非编码小RNA RyhB调控毒力相关靶基因的筛选、鉴定和功...

作者：陈斌杰扬州大学

学位级别：硕士

沙门菌是一种重要的食源性病原菌,绝大部分血清型对人和动物具有致病性,可引起多种不同临床表现的沙门菌病。研究沙门菌感染宿主的致病机制对预防和控制沙门菌病具有重要现实意义。细菌非编码小RNA（Small non-coding RNA,sRNA）是一类... 详细信息

沙门菌是一种重要的食源性病原菌,绝大部分血清型对人和动物具有致病性,可引起多种不同临床表现的沙门菌病。研究沙门菌感染宿主的致病机制对预防和控制沙门菌病具有重要现实意义。细菌非编码小RNA（Small non-coding RNA,sRNA）是一类基因组中被转录但不编码蛋白质的RNA分子,通过感应外界环境变化,在转录后水平快速调节基因表达。RyhB是存在于沙门菌、大肠杆菌等多种细菌中的一种sRNA。沙门菌编码两种RyhB同源物:RyhB-1和RyhB-2,二者可参与铁代谢、能量代谢、硝酸盐代谢、氧化应激、耐酸性、耐药性等多种生命代谢过程的调控,但RyhB对毒力相关靶标基因的调控研究较少。本研究通过构建体外模拟肠道环境（Simulated Intestinal Environmentin vitro,SIE）模型,探究肠炎沙门菌在模拟肠道环境时RyhB的转录情况,筛选该条件下RyhB调控的毒力相关靶标基因,并对其调控机制及对宿主致病性作用进行深入研究。具体研究内容如下:1.低铁、无氧和模拟肠道环境对RyhB-1和RyhB-2转录的影响缺氧和铁匮乏是肠炎沙门菌及其它肠道菌感染宿主时必须面对的环境压力。为研究低铁、无氧和模拟肠道环境对RyhB转录的影响以及两种RyhB同源物之间的转录关系,本研究检测了肠炎沙门菌SE50336野生株、ryhB-1缺失株、ryhB-2缺失株、ryhB-1/ryhB-2双缺失株在低铁、无氧、模拟肠道环境下的生长情况,以及RyhB-1和RyhB-2的表达量。结果发现,与LB培养基中有氧培养条件下相比,低铁、无氧条件和模拟肠道环境培养条件下,所有沙门菌菌株生长缓慢;相同培养条件下,ryhB单缺失或双缺失均影响细菌生长。低铁、无氧和模拟肠道环境均可诱导RyhB-1和RyhB-2的高转录,尤其是模拟肠道环境下,二者表达量与常规培养条件相比分别升高70、60倍,表明RyhB-1和RyhB-2在沙门菌适应以上不良环境中发挥重要作用;单一ryhB缺失可导致另一RyhB 同源物表达量增加,推测两种RyhB同源物之间存在表达互补作用。2.模拟肠道环境下RyhB调控靶标基因的筛选为研究肠炎沙门菌自然感染宿主时RyhB的调控作用,通过转录组测序技术分析比较了模拟肠道环境条件下肠炎沙门菌野生株、ryhB-1缺失株、ryhB-2缺失株、ryhB-1/ryhB-2双缺失株的转录组变化,以筛选模拟肠道环境条件下RyhB调控的靶标基因。转录组测序结果显示,与野生株相比,ryhB-1、ryhB-2单缺失和双缺失株中分别有496、250、553个差异表达基因（Different Expression Genes,DEGs）,其中受RyhB-1和RyhB-2共同调控的靶基因有363个,受RyhB-1单独调控的靶基因有188个,受RyhB-2单独调控的靶基因有110个。挑选了 14个差异表达基因,利用荧光定量PCR技术验证转录组测序结果的正确性。结果发现,荧光定量PCR检测基因的表达量与转录组测序结果趋势一致,表明转录分析数据可信度高,可继续下一步分析。GO分析结果显示,差异表达基因的分子功能主要富集到辅因子转运活性、亚铁血红素转运和ATP酶活性上,而生物过程和细胞组成主要富集到辅因子转运、亚铁血红素转运、蛋白质复合物生物合成与组装等功能上。KEGG分析结果显示,DEGs富集较多的通路包括硝酸盐代谢通路、双组份系统、信号转导和细菌侵袭上皮细胞等毒力相关基因。***-1和RyhB-2对毒力相关靶基因的调控作用机制研究转录组测序结果发现,模拟肠道环境条件下,RyhB-1和RyhB-2可上调编码Ⅲ型分泌系统效应蛋白sipA和sopE基因的表达,抑制参与沙门菌在巨噬细胞内存活和复制的ssaI和sseA基因的表达。为进一步研究RyhB-1和RyhB-2对以上靶基因的调控机制,本研究通过生物信息学预测RyhB与上述靶基因的结合位点,利用双质粒荧光报告系统证明调控机制（激活或抑制）。结果显示,RyhB-1和RyhB-2可直接与sipA mRNA的5’ UTR相互作用,使位于sipA mRNA 5’ UTR上原本闭合的核糖体结合位点（Ribosome Bind Site,RBS）暴露出来,促进翻译进程;RyhB-1和RyhB-2亦可直接与ssaI mRNA形成不完全互补配对,抑制ssaI翻译。而RyhB-1和RyhB-2对sopE和sseA基因起间接调控作用。***-1和RyhB-2调控沙门菌侵袭和胞内存活与复制为进一步探究模拟肠道环境下RyhB对宿主致病性调控作用,通过MEAT（Murine Ex vivo Anaerobic Tissue,MEAT model）模型证明ryhB缺失后,肠炎沙门菌对小鼠肠道上皮细胞侵袭能力减弱,推测在自然感染宿主后

关键词：肠炎沙门菌体外模拟肠道环境 RNA-seq 双质粒荧光报告系统细菌侵袭存活和复制

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温州市瓯海区公共法律服务优化分析

温州市瓯海区公共法律服务优化分析

作者：陈斌杰福建农林大学

学位级别：硕士

随着社会经济的不断发展,人们的公共法律服务需求越来越强烈,尤其是与群众生产和生活密切相关的基本法律服务需求逐步被纳入地方政府的公共服务发展战略中,地方政府日益重视并致力于构建满足公众基本公共法律服务需求的公共产品供给体... 详细信息

随着社会经济的不断发展,人们的公共法律服务需求越来越强烈,尤其是与群众生产和生活密切相关的基本法律服务需求逐步被纳入地方政府的公共服务发展战略中,地方政府日益重视并致力于构建满足公众基本公共法律服务需求的公共产品供给体系。公共法律服务体系建设是一项利国利民的基础性工程,经过近些年的不断探索和实践,温州市瓯海区因地制宜地开展公共法律服务工作,至今已然取得了长足的进步,在各领域中积累了一定的成功经验,但与国内的经济相对发达的地区相比而言,还存在一定的差距,有待进一步完善。所以,在公共法律服务需求分析的基础上,优化建立高效的公共法律服务体系任重而道远。本文主要探讨温州市瓯海区公共法律服务的优化策略,基于公共法律服务相关理论、概念的基础上,对瓯海区公共法律服务供给现状进行实践调研,并进一步归纳分析其存在的问题和成因,据此,进一步从完善宣传机制、合理分配资源、研发法律产品、增加服务方式、强化体系建设等方面进行有针对性的对策分析。进而更好地维护公民基本权利、促进社会公平正义、强化法治政府建设等具有重要的现实意义。

关键词：公共法律服务供给需求温州市瓯海区

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基于双麦克风的室内语音分离与声源定位研究

基于双麦克风的室内语音分离与声源定位研究

作者：陈斌杰宁波大学

学位级别：硕士

随着麦克风阵列信号处理技术的不断发展和完善,各种新的理论和新的方法不断被提出。现在,麦克风阵列技术已经广泛应用于电话会议、室内外语音通信、人机语音交互等系统中。基于双麦克风的室内多声源信息感知系统,相比基于麦克风阵列或... 详细信息

随着麦克风阵列信号处理技术的不断发展和完善,各种新的理论和新的方法不断被提出。现在,麦克风阵列技术已经广泛应用于电话会议、室内外语音通信、人机语音交互等系统中。基于双麦克风的室内多声源信息感知系统,相比基于麦克风阵列或麦克风网络的系统,具有体积小、功耗少、成本低等特性,更适合智能产品小型化的发展趋势。然而,基于双麦克风的系统采集的信号样本维度比声源数量少(欠定问题),空间信息相对较少,可利用的其他信息也相对较少,如何在欠定情况下融合有限的信息,成为了研究的重点。因此,本文探讨双麦克风条件下的欠定混合信号的语音分离和声源定位问题,基于语音信号的时频特征和双麦克风的空间位置信息,提出了基于双麦克风的室内语音分离与声源定位系统。本文的主要工作为:1、针对传统的DUET(Degenerate Unmixing Estimation Technique)算法,为了进一步提高源信号的分离质量,对其进行了改进。首先,针对混合参数估计不精确的问题,利用MCFT(Multiresolution Common Fate Transform)变换代替STFT(Short-Time Fourier Transform)变换进行时频表示来构建二维直方图。其次,针对理想二进制时频掩码在分离时所产生的部分时频点丢失的问题,利用Gammatone滤波器将二进制时频掩码进行平滑处理,从而更好的重建源。本文采用SDR(Source to Distortion Ratio)、SAR(Source to Artifacts Ratio)和SIR(Source to Interferences Ratio)为评价指标,实验结果表明改进后的DUET算法与目前已有的算法相比,分离性能显著提升。2、为了探究利用两个麦克风进行多声源分离和二维平面定位的可能性,提出了一种基于双麦克风的室内语音分离与声源定位系统。系统根据麦克风采集的信号,建立了双麦克风时延-衰减模型,然后利用DUET算法估计了模型的时延-衰减参数,并绘制了参数直方图。在语音分离阶段,建立了二进制时频掩膜(Binary Time-Frequency Masking,BTFM),根据参数直方图,结合二值掩蔽的方法对混合语音进行了分离。在声源定位阶段,通过推导模型衰减参数与信号能量比之间的关系,得到了确定声源位置的数学方程组。利用Roomsimove工具箱模拟室内声学环境,通过MATLAB仿真和几何坐标计算,在对多个声源目标分离的同时完成了二维平面中的定位。实验结果表明,该系统对多个声源信号的定位误差均在2%以下。

关键词：双麦克风语音分离声源定位 DUET算法参数估计

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基于FPGA的扩频信号发生器的研究与设计

基于FPGA的扩频信号发生器的研究与设计

作者：陈斌杰哈尔滨理工大学

学位级别：硕士

扩频信号源对于扩频技术的研究有着至关重要的作用,目前,我国在扩频信号发生器领域还处于空白状态,主要是利用国外一些公司的专用扩频集成芯片来产生扩频信号。但是,这些芯片大部分功能都已固化,限制了开发设计的灵活性,同时在国防等领... 详细信息

扩频信号源对于扩频技术的研究有着至关重要的作用,目前,我国在扩频信号发生器领域还处于空白状态,主要是利用国外一些公司的专用扩频集成芯片来产生扩频信号。但是,这些芯片大部分功能都已固化,限制了开发设计的灵活性,同时在国防等领域也存在着安全隐患。因此,本课题提出一种新的扩频信号产生的方法,用以替代国外专用扩频集成芯片,给设计工作者开发扩频产品提供灵活、可靠的扩频信号源。本课题以FPGA为核心开发工具,对伪随机码的产生、直接数字频率合成正弦波进行了重点的研究与设计,利用硬件描述语言来实现并进行仿真验证;同时,利用单片机设计一个控制系统,它将上位计算机产生的信息码传递给FPGA,并对扩频调制进行管理;此外,为了满足扩频信号发生器的指标,本课题还对数模转换器的选取、模拟射频滤波器的设计进行了详细的分析与验证。扩频信号发生器的设计指标为:直接序列扩展频谱方式,扩频码为13级的m序列,其码速率为200KHz;信息码速率为20KHz;射频调制方式为二进制移相键控,载波中心频率为4M±0.01Hz,频率分辨率为0.01Hz;相位截断杂散抑制比≥40dB,幅度量化杂散抑制比≥60dB。经仿真和实际测试可知,该扩频信号发生器达到设计指标,并且根据需要可进行软件升级,有很强的实用性和广阔的市场前景。

关键词：扩频信号发生器 FPGA DDS 伪随机码

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养螃蟹

海峡儿童（读写）（3-6年级） 2009年第6期 52-53页

作者：陈斌杰周宁县狮城第一中心小学六年一班

趁着假日，我们一家人来到高罗海滨度假村游玩。我从未见过大海，今日终于大开眼界了。大海波涛汹涌，阵阵海风扑面而来。我在海边漫步，奇怪地发现沙滩上有一个个小圆洞。舅舅告诉我，这儿是螃蟹们在海边的住所。

关键词：《养螃蟹》小学作文语文教学

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晶体三极管倒置接法的分析

中等职业教育 2007年第11Z期 38-39页

作者：陈斌杰浙江省宁波市鄞州职教中心

三极管倒置时发射极与集电极对调使用,倒置时的三极管也同样具有三种工作状态,但是等效集电极电流(I_E)与基极电流的比值即β值要比正接时小得多,所以要使倒置的三极管进入饱和区,所需的基极驱动电流要比正接时大得多,但是倒置时的管压... 详细信息

三极管倒置时发射极与集电极对调使用,倒置时的三极管也同样具有三种工作状态,但是等效集电极电流(I_E)与基极电流的比值即β值要比正接时小得多,所以要使倒置的三极管进入饱和区,所需的基极驱动电流要比正接时大得多,但是倒置时的管压降要比正接时的小。

关键词：三极管集电极发射极倒置

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一端连接市场另一端连接大学

瞭望 2022年第16期 45-47页

作者：陈斌杰《瞭望》新闻周刊

瑞士人口仅860万,却孕育了世界一流水平的机床、钟表、生物医药等行业。瑞士相关产业能够保持全球领先的创新能力的关键是,其成熟的双元制教育体系为企业培养了大量高素质的员工和熟悉一线生产工艺的研究人员。

关键词：世界一流水平生物医药双元制教育创新能力生产工艺瑞士高素质

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瑞士教育:一端连接市场另一端连接大学

党员文摘 2022年第15期 47-48页

作者：陈斌杰不详

瑞士人口仅860万,却孕育了世界一流水平的机床、钟表、生物医药等行业。瑞士相关产业能够保持全球领先的创新能力的关键是,其成熟的双元制教育体系为企业培养了大量高素质的员工和熟悉一线生产工艺的研究人员。瑞士教育的底色瑞士是联... 详细信息

瑞士人口仅860万,却孕育了世界一流水平的机床、钟表、生物医药等行业。瑞士相关产业能够保持全球领先的创新能力的关键是,其成熟的双元制教育体系为企业培养了大量高素质的员工和熟悉一线生产工艺的研究人员。瑞士教育的底色瑞士是联邦制国家,由26个州组成,大部分州实行从小学到初中的9年义务教育。值得一提的是,在义务教育阶段。

关键词：义务教育阶段双元制教育联邦制国家世界一流水平生物医药创新能力瑞士生产工艺

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总体平稳韧性依旧——中国经济“一季报”

企业观察家 2022年第5期 44-45页

作者：徐超陈斌杰新华网

1.全球波动风险叠加中国经济之稳难能可贵中国国家统计局4月18日发布的数据显示,一季度中国经济同比增长4.8%。这一增速高于海外媒体和经济学家普遍预期,不少细分领域数据也显现在多重风险扰动下的中国经济之“稳”。全球通胀压力下,中... 详细信息

1.全球波动风险叠加中国经济之稳难能可贵中国国家统计局4月18日发布的数据显示,一季度中国经济同比增长4.8%。这一增速高于海外媒体和经济学家普遍预期,不少细分领域数据也显现在多重风险扰动下的中国经济之“稳”。全球通胀压力下,中国物价继续保持相对平稳。数据显示,一季度全国居民消费价格指数(CPI)比上年同期上涨1.1%。《华尔街日报》报道,受全球大宗商品价格飙升及疫情影响,中国3月物价水平有所上升,但总体通胀情况远温和于美国、欧盟等主要发达经济体。

关键词：发达经济体大宗商品价格国家统计局物价水平数据显示风险叠加总体平稳季报