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基质细胞衍生因子受体基因修饰骨髓间充质干细胞移植对大鼠损伤颈动脉修复的影响

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中华老年医学杂志 2013年第9期32卷 996-1000页

作者：刘志江石蓓许官学赵然尊沈长银陈攀科贵州遵义医学院第一附属医院心内科 563003

目的探讨基质细胞衍生因子受体（CXCR4）基因修饰的骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对大鼠颈动脉损伤后修复的影响。方法体外培养和扩增BMSCs，用携带CXCR4的慢病毒质粒（Lent-vector）转染BMSCs，获得CXCR4修饰的BMscs（CXCR4BMscs），... 详细信息

目的探讨基质细胞衍生因子受体（CXCR4）基因修饰的骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对大鼠颈动脉损伤后修复的影响。方法体外培养和扩增BMSCs，用携带CXCR4的慢病毒质粒（Lent-vector）转染BMSCs，获得CXCR4修饰的BMscs（CXCR4BMscs），免疫印迹（Westernblot）法检测CXCR4的表达情况。建立大鼠颈动脉球囊损伤模型，随机分成CXCR4转染BMSCs移植组（CXCR4-BMscs，12只），空病毒转染BMSCs组（BMscs组，12只）及磷酸盐缓冲液（PBS）移植对照组（对照组，12只）。细胞移植后2周取血管组织分别行绿色荧光蛋白（GFP）荧光检测BMSCs归巢情况，免疫荧光染色检测血管内膜血小板内皮细胞黏附分子（CD31）的表达，细胞移植后4周免疫组织化学染色检测增殖细胞核抗原（PcNA）的表达及苏木精-伊红（HE）染色检测血管形态学变化。结果BMSCs转染Len@CXCR4后CXCR4蛋白水平与转染Lentbvector和未转染的BMSCs比较呈高表达（P〈0．05）。CXCR4-BMSCs组和BMSCs组血管内膜均有GFP阳性细胞归巢，CXCR4BMSCs组（58．8±4．4）％较BMSCs组（36．2±5．0）％增加（P〈0．05）。CXCR4-BMSCs组CD31表达（58．8±4．3）％高于BMSCs组（28．8±4．2）％（P〈0．05）。PCNA的表达CXCR4BMSCs组（21．0±4．2）％与BMSCs组（36．5±4．9）％较对照组（78．3±3．5）％均降低（P〈0．05），CXCR4-BMSCs较BMSCs组降低（P〈0．05）。CXCR4BMSCs组与BMSCs组新生内膜面积[分别为（o．205±0．018）mm2、（O．323±0．071）mm。]、新生内膜／中膜面积[分别为（1．039±0．123）、（1．660±0．404）]均较对照组减轻[（0．536±0．054）mm2、（2．460±0．328），P〈0．05]；CXCR4-BMSCs较BMSCs组也降低（P〈0．05）。结论基因修饰可提高BMSCs的CXCR4表达，CXCR4-BMSCs较单纯BMSCs移植更能增加BMSCs归巢及促进颈动脉球囊损伤后早期再内皮化并减轻血管再狭窄。

关键词：受体,CXCR4 间质干细胞颈动脉损伤

CGRP修饰大鼠MSCs对血管平滑肌细胞增殖及表型转化的影响

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中国病理生理杂志 2013年第10期29卷 1777-1782页

作者：陈攀科石蓓龙仙萍刘志江王正龙王冬梅遵义医学院附属医院心内科贵州遵义563003

目的:探讨降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)修饰的大鼠间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和表型转化的影响及其机制。方法:分离、培养及鉴定大鼠MSCs和VSMCs。CGRP重组慢病毒(Lv-CGRP-EGFP)转染MSCs后,real-time PCR和ELISA法检测MSCs中CGRP的表达。MSCs-CGRP与VSMCs共培养后MTT、台盼蓝染色及划痕实验评价VSMCs增殖、迁移能力及细胞存活率。Western blotting法检测VSMCs中α-平滑肌肌动蛋白(alphasmooth muscle actin,α-SMA)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达水平。结果:与MSCs组和空载病毒转染组(MSCs-EGFP)比较,CGRP修饰的MSCs(MSCs-CGRP组)中CGRP的mRNA和蛋白表达水平增高(均P<0.01)。MTT法和划痕实验显示,与MSCs组和MSCs-EGFP组比较,MSCs-CGRP组中VSMCs的增殖和迁移能力明显减弱(P<0.05),而且台盼蓝染色显示,各组细胞存活率均大于90%。Western blotting结果显示,与MSCs-CGRP共培养的VSMCs中α-SMA较MSCs组和MSCs-EGFP组表达增加,OPN的表达减少(均P<0.05)。结论:CGRP修饰的MSCs能分泌CGRP蛋白,并且能抑制VSMCs的增殖和迁移,其机制可能通过抑制VSMCs的表型从收缩表型向合成表型转化有关。

关键词：降钙素基因相关肽间充质干细胞血管平滑肌细胞细胞增殖

降钙素基因相关肽调节平滑肌细胞表型改变对动脉损伤后新生内膜增生的作用

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中华高血压杂志 2014年第11期22卷 1036-1042页

作者：赵然尊龙仙萍陈攀科崔璨盛瑾王冬梅石蓓遵义医学院第一附属医院心血管内科贵州遵义563003

目的通过降钙素基因相关肽(CGRP)干预体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)和体内颈动脉损伤大鼠模型,探讨其对VSMC表型改变和动脉损伤后新生内膜增殖的影响。方法取大鼠胸主动脉,以组织块贴壁培养法获得VSMC,给予血小板源生长因子(PDGF,终... 详细信息

目的通过降钙素基因相关肽(CGRP)干预体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)和体内颈动脉损伤大鼠模型,探讨其对VSMC表型改变和动脉损伤后新生内膜增殖的影响。方法取大鼠胸主动脉,以组织块贴壁培养法获得VSMC,给予血小板源生长因子(PDGF,终浓度为2.0×10-8 mol/L)和(或)CGRP(终浓度为3.5×10-7 mol/L)处理,利用Western blot法检测细胞表型改变,噻唑蓝法和流式细胞仪检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移能力;同时建立颈动脉损伤大鼠模型,并分为对照组和CGRP组,通过HE染色观察新生内膜形成情况,Western blot法检测损伤动脉中VSMC表型改变和信号转导通路细胞外信号调节激酶(ERK)激活情况。结果PDGF明显诱导体外培养的VSMC表型改变;而CGRP处理则显著抑制PDGF诱导的细胞表型转换,降低细胞增殖[48h:CGRP组(0.20±0.03)×105比PDGF组(0.67±0.08)×105,P<0.05;72h:CGRP组(0.17±0.04)×105比PDGF组(1.42±0.11)×105比对照组(0.45±0.05)×105,P<0.05]和迁移能力[24h:CGRP组(2.12±0.21)%比PDGF组(5.04±0.52)%比对照组(4.87±0.44)%,P<0.05;48h:CGRP组(2.84±0.43)%比PDGF组(5.78±0.74)%比对照组(5.50±0.37)%,P<0.05];CGRP降低新生内膜形成,伴随着损伤动脉中VSMC合成表型标志蛋白骨桥蛋白表达减少,并抑制细胞外信号激活途径ERK的激活。结论 CGRP可能通过抑制ERK1/2信号途径激活而调节VSMC表型,抑制细胞增殖和迁移,从而降低动脉损伤后新生内膜形成。

关键词：血管平滑肌细胞降钙素基因相关肽表型改变

慢病毒载体介导CGRP基因体外转染及对MSC生物学特性的影响

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重庆医学 2015年第14期44卷 1873-1875,1878页

作者：陈攀科石蓓许官学刘志江龙仙萍张巍马帅遵义医学院附属医院心血管内科贵州遵义563000

目的探讨慢病毒载体介导降钙素基因相关肽(CGRP)基因体外转染间充质干细胞(MSC)及其对MSC生物学特性的影响。方法大鼠MSC进行分离、培养及鉴定。CGRP重组慢病毒转染MSC后,采用荧光显微镜和流式细胞技术测定其转染率。实时定量PCR、免疫... 详细信息

目的探讨慢病毒载体介导降钙素基因相关肽(CGRP)基因体外转染间充质干细胞(MSC)及其对MSC生物学特性的影响。方法大鼠MSC进行分离、培养及鉴定。CGRP重组慢病毒转染MSC后,采用荧光显微镜和流式细胞技术测定其转染率。实时定量PCR、免疫荧光细胞化学及ELISA法检测MSC中CGRP的表达。慢病毒转染后通过MTT、β-半乳糖苷酶染色和诱导分化评价MSC的增殖、衰老及分化能力。结果慢病毒载体介导CGRP基因转染MSC后48h可稳定表达,MOI=30时,转染率达80%以上。与MSC组和空载病毒转染(MSC-EGFP组)比较,CGRP修饰的MSC(MSC-CGRP组)中CGRP的mRNA和蛋白表达水平增高(均P<0.01)。MTT、β-半乳糖苷酶染色和诱导分化结果显示,病毒转染后对MSC增殖、衰老及向内皮分化基本没有影响。结论 MSC是一种理想的基因载体细胞,可作为CGRP基因转染的靶细胞用于基因治疗,为后续体内、体外实验奠定基础。

关键词：降钙素基因相关肽转染间充质干细胞生物学特性

腺病毒介导受体活性修饰蛋白-1对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

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腺病毒介导受体活性修饰蛋白-1对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

骨髓间充质干细胞移植对损伤血管的内皮修复作用

第十三次全国心血管病学术会议

作者：龙仙萍赵然尊石蓓璀璨盛瑾陈攀科贵州省遵义医学院附属医院

目的通过腺病毒介导RAMP1基因转染兔血管平滑肌细胞(VSMCs),观察细胞高表达RAMP1对体外细胞增殖及凋亡的影响。方法培养兔VSMCs及鉴定,第4代细胞(P4)用于实验,实验分为正常对照组、空病毒组、重组腺病毒组,每组又分为24、48、72、96 h ...

目的通过腺病毒介导RAMP1基因转染兔血管平滑肌细胞(VSMCs),观察细胞高表达RAMP1对体外细胞增殖及凋亡的影响。方法培养兔VSMCs及鉴定,第4代细胞(P4)用于实验,实验分为正常对照组、空病毒组、重组腺病毒组,每组又分为24、48、72、96 h 4个亚组,病毒液按最佳感染复数100进行感染VSMCs,分别于不同时间点测出转染率,免疫细胞化学方法检测RAMP1蛋白在VSMCs上的表达,转染后不同时间点应用台盼蓝染色计数细胞数目和噻唑蓝法(MTT)

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国动脉硬化杂志 2011年第9期19卷 716-720页

作者：刘志江石蓓许官学沈长银王正龙龙仙萍陈攀科遵义医学院第一附属医院心内科贵州省遵义市563003

目的探讨兔颈动脉粥样硬化狭窄血管成形术后,骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对损伤血管内皮修复的影响及可能机制。方法制作兔颈动脉粥样硬化狭窄模型48只,随机分成BMSC移植组(n=24)和对照组(n=24)。体外培养兔BMSC,流式细胞仪鉴定BMSC表... 详细信息

目的探讨兔颈动脉粥样硬化狭窄血管成形术后,骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对损伤血管内皮修复的影响及可能机制。方法制作兔颈动脉粥样硬化狭窄模型48只,随机分成BMSC移植组(n=24)和对照组(n=24)。体外培养兔BMSC,流式细胞仪鉴定BMSC表面标志,DAPI标记后备用。球囊损伤颈动脉的即刻,BMSC移植组以107/kg的细胞数经颈外动脉移植到损伤动脉局部,对照组注射等量的PBS液。术前及细胞移植后3、7、14及28天采集外周血用ELISA法测定血管内皮生长因子水平。移植后7天取材观察DAPI标记BMSC的归巢。移植后14天免疫组织化学染色检测损伤血管组织的血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)的表达;移植后28天HE染色后测定损伤血管新生内膜面积、新生内膜面积/中膜面积及再狭窄率。结果 BMSC移植组在移植后各时间点血管内皮生长因子水平均显著高于对照组(P<0.01)。移植后7天BMSC移植组损伤血管的内膜表面见DAPI标记的BMSC。移植后14天血管内膜有CD31的连续性表达,对照组没有表达。与对照组比较,移植后28天BMSC移植组血管新生内膜面积(0.092±0.009比0.189±0.007,P<0.01)、新生内膜面积/中膜面积(0.698±1.570比1.630±0.122,P<0.01)及再狭窄率(41.70%±3.70%比61.28%±1.57%,P<0.01)均显著减轻。结论局部移植BMSC可促进粥样硬化狭窄颈动脉球囊损伤后的内皮修复,从而有助于减轻血管再狭窄。

关键词：骨髓间充质干细胞再狭窄内皮修复

经皮冠脉介入患者冠脉并发症发病特征影响因素及对患者院内死亡的影响

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中国急救医学 2020年第10期40卷 926-932页

作者：王正龙张巍刘志江陈攀科刘汉林赵然尊石蓓遵义医科大学附属心血管病医院心内科贵州遵义563003

目的评价经皮冠脉介入(PCI)患者围术期冠脉并发症的发病特征、影响因素及对患者院内死亡的影响.方法回顾性分析2018年1月至2019年10月在本院PCI治疗的冠心病患者临床资料,根据患者是否发生冠脉并发症,分为并发症组与非并发症组;根据患... 详细信息

目的评价经皮冠脉介入(PCI)患者围术期冠脉并发症的发病特征、影响因素及对患者院内死亡的影响.方法回顾性分析2018年1月至2019年10月在本院PCI治疗的冠心病患者临床资料,根据患者是否发生冠脉并发症,分为并发症组与非并发症组;根据患者是否院内死亡情况,分为存活组与死亡组.比较各组的临床资料,分析冠脉并发症的分布特征.采用多因素Logistic回归分析评价影响患者冠脉并发症发病与院内死亡的相关因素.结果共纳入3481例行PCI的冠心病患者,冠脉并发症发病率为5.4%(188/3481),有37例(1.1%)患者院内死亡.患者常见冠脉并发症为冠脉夹层、血肿或穿孔(2.2%,77/3481)、慢复流/无复流(1.2%,43/3481)及边支丢失/受累(0.9%,33/3481).多因素Logistic回归分析表明,急诊手术(OR=1.983,95%CI1.336~2.881,P<0.001)、生命体征不稳定(OR=4.171,95%CI 2.466~7.056,P<0.001)、复杂冠脉病变(OR=2.959,95%CI1.924~4.552,P<0.001)是患者发生并发症的独立危险因素.急诊手术(OR=3.351,95%CI1.860~6.043,P<0.001)、生命体征不稳定(OR=4.279,95%CI1.191~15.377,P=0.026)、复杂冠脉病变(OR=4.912,95%CI2.211~10.914,P<0.001)是患者院内死亡的独立危险因素.并发症及血运重建与患者院内死亡不相关(OR=1.546,95%CI0.397~6.020,P=0.539;OR=1.302,95%CI0.804~1.913,P=0.364).结论冠脉夹层、血肿或穿孔及慢复流/无复流为PCI常见冠脉并发症,急诊手术、生命体征不稳、复杂冠脉病变是患者发生并发症和院内死亡的独立危险因素,冠脉并发症与患者院内死亡不相关.

关键词：经皮冠脉介入治疗并发症分布特征预后因素院内死亡

腺病毒介导的受体活性修饰蛋白-1基因对兔心肌梗死后炎症因子及心肌纤维化的影响

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中华老年医学杂志 2012年第7期31卷 610-614页

作者：龙仙萍赵然尊许官学刘志江石蓓陈攀科王冬梅遵义医学院第一附属医院心血管内科 563003

目的观察腺病毒介导的受体活性修饰蛋白-1（RAMP1）基因对心肌梗死后心肌纤维化的影响及其作用机制。方法建立兔心肌梗死模型，随机分为RAMP1转染组、空载病毒载体组（空载病毒组）和PBS组；模型建立后40rain经局部注射带绿色荧光蛋白... 详细信息

目的观察腺病毒介导的受体活性修饰蛋白-1（RAMP1）基因对心肌梗死后心肌纤维化的影响及其作用机制。方法建立兔心肌梗死模型，随机分为RAMP1转染组、空载病毒载体组（空载病毒组）和PBS组；模型建立后40rain经局部注射带绿色荧光蛋白报告基因的RAMP1重组腺病毒载体（pAd2-EGFP—RAMP1）和空病毒载体及PBS到心肌梗死交界区，病毒注射后7d、14d和28d处死动物取心脏标本，应用Westernblot检测心肌组织局部NF-kB表达，Masson染色检测心肌梗死边缘区胶原含量。应用ELISA法测定心肌梗死模型建立前及病毒注射后血清TNF-a浓度，心脏超声心动图检测病毒注射后28d心功能。结果病毒注射后7d，RAMPl转染组局部心肌组织RAMP1表达量为（67．33±3．97）％，较空载病毒组（20．59±3．26）％和PBS组（23．80±5．08）％明显增加（P〈O．05）。病毒注射后7d，与空载病毒组（62．60±6．18）％和PBS组（62．95±5．17）％比较，RAMP1转染组心肌局部NF—kB表达下降（26．54±5．13）％（P〈0．05）。与空载病毒组和PBS组比较，RAMPl转染组不同时间点血清TNF-a表达减少[7d：（136．74±5．42）μg／L比（196．97±14．17）μg／L，（203．67±13．90）μg／L；14d：（154．51±13．61）μg／L比（112．22±6．74）μg／L，（160．46±14．27）μg／L；28d：（51．10±5．62）μg／L比（95．55±9．94）μg／L，（98．96±12．68）μg／L，均P〈0．053。梗死边缘交界区心肌胶原纤维含量，与空载病毒组和PBS组比较，RAMPl转染组14d和28d心肌胶原纤维含量降低[14d：（7．10±0．98）％比（19．52±2．32）％，（17．91±0．96）%；28d：（17．04±2．44）比（34．10±5．59）％，（33．98±4．33）％，均P〈0．01]。梗死后28dRAMP1转染组梗死面积（26．54±5．13）％较EGFP组（32．20±3．73）％和C组（35．58±2．65）%缩小（P〈0．01），心功能改善也优于空载病毒组和PBS组（P〈0．01）。结论外源性RAMPl基因转染可能通过抑制局部NF-xB活性，下调炎性细胞因子TNF—a等表达，部分阻断了梗死后促纤维化发生的环节，从而在一定程度上减轻梗死交界区胶原纤维过度沉积，改善梗死后心功能。

关键词：腺病毒科心肌梗死细胞因子纤维化

受体活性修饰蛋白-1转染间充质干细胞对兔颈动脉球囊成形术后血管平滑肌增殖和凋亡的影响

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受体活性修饰蛋白-1转染间充质干细胞对兔颈动脉球囊成形术后血管...