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脓毒症大鼠BALF内AEC-exosomes在肺损伤中作用的实验研究

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脓毒症大鼠BALF内AEC-exosomes在肺损伤中作用的实验研究

作者：陈家泉南昌大学

学位级别：硕士

目的:观察脓毒症大鼠BALF内AEC-exosomes对肺组织的致炎作用,初步探讨AEC-exosomes导致肺损伤的作用机制。方法:1.将SD大鼠随机分为三组:sham组,单纯开腹;CLP组,实施盲肠结扎穿刺处理;CLP+GW4869组,在实施盲肠结扎穿刺处理前1h,经气道... 详细信息

目的:观察脓毒症大鼠BALF内AEC-exosomes对肺组织的致炎作用,初步探讨AEC-exosomes导致肺损伤的作用机制。方法:1.将SD大鼠随机分为三组:sham组,单纯开腹;CLP组,实施盲肠结扎穿刺处理;CLP+GW4869组,在实施盲肠结扎穿刺处理前1h,经气道内滴入GW4869,剂量2.5μg/g。于术后24h收集各组大鼠血液、BALF、肺组织。2.将SD大鼠随机分为两组:control组,麻醉后经气道内滴入生理盐水100μl;AEC-exosomes组,麻醉后经气道内滴入LPS诱导的AEC-exosomes,剂量2mg/kg,容量为100μl。于术后24h收集各组大鼠BALF、肺组织。3.采用透射电镜及BCA法检测BALF内外泌体的分泌状况,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,采用“鼠脓毒症评分”标准对各组大鼠CLP术后症状进行综合评估,采用HE染色检测肺组织病理及损伤评分,计算肺组织W/D比、肺血管通透性,采用ELISA检测BALF和血浆中IL-1β、TNF-α表达水平,采用Western Blot检测BALF内AEC-exosomes特异性标志物蛋白,采用免疫组化及共聚焦显微镜观察AEC-exosomes与AM的共定位,采用RT-qPCR检测BALF内miR-92a的表达水平。结果:1.BALF内外泌体提取物:透射电镜可见囊泡状结构,且直径<200nm;与sham组比较,CLP组蛋白浓度升高;与CLP组比较,CLP+GW4869组蛋白浓度降低。2.与sham组比较,CLP组7天存活率为50.00%,脓毒症评分升高,肺组织病理评分、肺组织水肿程度及IL-1β、TNF-α表达水平均明显增加;与CLP组比较,CLP+GW4869组7天存活率为85.00%,脓毒症评分降低,肺组织病理评分、肺组织水肿程度及IL-1β、TNF-α表达水平均明显降低。3.BALF内AEC-exosomes特异性标志物SP-B和cytokertin蛋白:与sham组比较,CLP组表达水平均增加;与CLP组比较,CLP+GW4869组表达水平均降低。4.与control组比较,AEC-exosomes组肺组织病理评分及IL-1β、TNF-α表达水平均明显增加。5.LPS诱导的AEC-exosomes促进肺组织内AM聚集,并且与AM发生共定位。6.BALF内外泌体miR-92a表达水平:与sham组比较,CLP组表达水平增加;与CLP组比较,CLP+GW4869组表达水平降低。结论:脓毒症大鼠BALF内AEC-exosomes分泌增加,并且导致肺损伤,其机制可能是AEC-exosomes通过携带miR-92a刺激AM失控性炎症反应。

关键词： AEC-exosomes 脓毒症肺损伤大鼠

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金融风险传染与货币政策应对抉择

金融风险传染与货币政策应对抉择

作者：陈家泉暨南大学

学位级别：硕士

国际金融危机后,系统性金融风险的监管被逐渐提上日程,守住不发生系统性金融风险的底线成为中国金融风险监管的重要前提。鉴于此,本文首先运用Acharya et al.提出的系统性金融风险指数SRISK对中国银行、证券以及保险行业的43家上市金融... 详细信息

国际金融危机后,系统性金融风险的监管被逐渐提上日程,守住不发生系统性金融风险的底线成为中国金融风险监管的重要前提。鉴于此,本文首先运用Acharya et al.提出的系统性金融风险指数SRISK对中国银行、证券以及保险行业的43家上市金融机构的系统性金融风险进行金融风险水平的刻画。紧接着,基于面板Granger因果检验和面板VAR模型,验证了中国金融部门之间的金融风险传染存在交叉传染,其传染力度受到各个金融部门资产规模大小的影响。银行和证券部门是两大风险源头,而保险部门则是银行和证券部门金融风险释放的接受者。在上述研究基础上,采用面板门限回归模型考察货币政策在抑制系统性金融风险的作用效果。结果表明:第一,在不同流动性水平下,不同货币政策对系统性金融风险的抑制作用存在门限效应。第二,在当前中国实际流动性水平下,价格型或者数量型货币政策的单独实施对风险水平的影响并不显著,收紧宏观审慎政策,加强宏观审慎监管才起效。第三,价格型或者货币政策与宏观审慎监管的搭配前提是降低流动性水平到有效范围,若降低流动性到45.66%-46.16%的范围内,应采用紧缩的价格型货币政策和宽松的宏观审慎监管或者采用紧缩的数量型货币政策和宽松的宏观审慎监管搭配使用;若降低流动性水平到不超过45.66%,应采用宽松的数量型货币政策和宽松的宏观审慎监管搭配使用才有效。最后,结合系统重要性、金融风险传染以及流动性门限效应为中国系统性金融风险防控提出具有实证能力支撑的政策建议。本文创新之处主要有一下两点:第一,将金融风险的传染力度作为重点对象引入到风险传染的分析框架中,探讨不同金融部门之间风险的释放能力;第二,引入流动性水平,探究中国不同货币政策对系统性金融风险影响的门限效应,进一步总结分析不同流动性水平下不同货币政策实施的松紧以及与宏观审慎监管的搭配抉择。

关键词：金融风险传染 SRISK 宏观审慎货币政策

人诱导多能间充质干细胞来源外泌体对肺泡巨噬细胞焦亡的抑制作用

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中华危重病急救医学 2021年第1期33卷 43-48页

作者：彭巍江榕李勇陈家泉邵强钱克俭刘芬南昌大学第一附属医院重症医学科江西南昌330006 南昌大学第一附属医院肿瘤科江西南昌330006

目的探讨人诱导多能间充质干细胞来源外泌体(iMSC-Exos)对肺泡巨噬细胞(AM)焦亡的作用及机制。方法通过旋转超滤法提取人诱导多能间充质干细胞(iMSC)培养上清液中的外泌体,并利用透射电镜、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)、高分... 详细信息

目的探讨人诱导多能间充质干细胞来源外泌体(iMSC-Exos)对肺泡巨噬细胞(AM)焦亡的作用及机制。方法通过旋转超滤法提取人诱导多能间充质干细胞(iMSC)培养上清液中的外泌体,并利用透射电镜、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)、高分辨率可调电阻脉冲对提取的外泌体进行鉴定。体外培养大鼠AM细胞株NR8383,取对数生长期细胞分为3组:对照组在AM上清液中加入等量磷酸盐缓冲液(PBS);脂多糖/三磷酸腺苷(LPS/ATP)组AM经500μg/L的LPS刺激23 h后再加入5 mmol/L的ATP刺激1 h诱导细胞焦亡;iMSC-Exos组将100 mg/L iMSC-Exos与NR8383细胞共孵育3 h后再给予LPS和ATP刺激。采用细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)和乳酸脱氢酶(LDH)分析检测细胞毒活性;采用免疫荧光法观察细胞凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测AM释放炎性因子白细胞介素(IL-1β、IL-18)水平;采用Western blotting法检测NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体途径及焦亡相关蛋白消皮素D(GSDMD)表达。结果提取的外泌体经透射电镜观察为圆形囊泡,Western blotting显示外泌体标志物CD63、CD9呈阳性表达,高分辨率可调电阻脉冲检测显示粒子平均直径130 nm,提示外泌体提取成功,能被AM吞噬。与对照组相比,LPS和ATP刺激后,细胞活性下降〔(0.56±0.05)%比(1.06±0.07)%,P<0.01〕,坏死物质LDH释放增加(U/L:1218.86±22.73比188.30±1.61,P<0.01),炎性因子分泌增加〔IL-1β(ng/L):958.91±32.78比194.63±5.14,IL-18(ng/L):870.89±21.86比288.85±24.48,均P<0.01〕,细胞凋亡率〔(55.35±6.19)%比(12.01±1.32)%,P<0.01〕及caspase-1表达均升高(荧光强度:41.06±3.65比2.80±0.54,P<0.01),提示LPS联合ATP可成功诱导细胞焦亡。与LPS/ATP组相比,给予iMSC-Exos预处理后,AM活性增加〔(0.81±0.05)%比(0.56±0.05)%,P<0.01〕,LDH释放减少(U/L:535.05±42.55比1218.86±22.73,P<0.01),炎性因子分泌减少〔IL-1β(ng/L):381.82±19.50比958.91±32.78,IL-18(ng/L):533.77±31.54比870.89±21.86,均P<0.01〕,细胞凋亡率〔(19.74±2.96)%比(55.35±6.19)%,P<0.01〕和caspase-1表达均下降(荧光强度:12.16±1.31比41.06±3.65,P<0.01),同时NLRP3炎症小体途径及焦亡相关蛋白GSDMD表达水平受到显著抑制〔NLRP3蛋白(NLRP3/β-actin):0.62±0.06比1.89±0.11,活化的caspase-1蛋白(cleaved caspase-1/β-actin):0.42±0.07比1.22±0.17,GSDMD蛋白(GSDMD/β-actin):0.57±0.05比1.22±0.05,均P<0.01〕。结论iMSC-Exos抑制了LPS/ATP诱导的AM焦亡和炎性因子表达,可能与靶向抑制NLRP3炎症小体途径有关,提示iMSC-Exos能抑制AM焦亡,发挥抗炎效应。

关键词：外泌体细胞焦亡肺泡巨噬细胞炎症反应人诱导多能间充质干细胞

线粒体自噬对肺泡巨噬细胞焦亡的调控作用及其机制

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中华重症医学电子杂志 2023年第1期9卷 69-77页

作者：阳莹崔亚梅邵强赵宁陶文强陈家泉徐泽尧钱克俭刘芬南昌大学附属第一医院重症医学科南昌330000

目的初步探讨线粒体自噬对肺泡巨噬细胞(AM)焦亡的调控作用及其机制。方法选取大鼠肺泡巨噬细胞NR8383作为研究对象,使用1μg/ml的脂多糖(LPS)刺激18 h构建脓毒症肺损伤体外模型,使用低浓度溴化乙锭(EtBr)处理大鼠AM构建胞质无线粒体DNA... 详细信息

目的初步探讨线粒体自噬对肺泡巨噬细胞(AM)焦亡的调控作用及其机制。方法选取大鼠肺泡巨噬细胞NR8383作为研究对象,使用1μg/ml的脂多糖(LPS)刺激18 h构建脓毒症肺损伤体外模型,使用低浓度溴化乙锭(EtBr)处理大鼠AM构建胞质无线粒体DNA(mtDNA)的ρ0细胞,使用羟基氰氯苯腙(CCCP)增强线粒体自噬,通过转染上调胞质mtDNA水平。设立CON组、LPS组、LPS+ρ0组、LPS+CCCP组、LPS+CCCP+mtDNA组;采用qRT-PCR检测mtDNA拷贝数、胞质mtDNA水平;通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养上清液中白介素(IL)-18、IL-1β等炎症因子的分泌水平;采用Western Blot检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1前体(pro-caspase-1)、胱天蛋白酶1剪切体(P20)、消皮素D(GSDMD)和消皮素D剪切体(cle-GSDMD)等焦亡相关蛋白的表达水平;采用免疫荧光观察细胞内caspase活性及细胞膜通透性;采用透射电镜观察细胞内线粒体自噬水平;采用Western Blot检测微管相关蛋白轻链B(LC3B)Ⅱ型、LC3BⅠ型等自噬相关蛋白表达水平。结果LPS刺激可诱导mtDNA释放至胞质,并促进炎症因子水平、焦亡相关蛋白表达水平、细胞内caspase活性及细胞膜通透性显著升高。通过CCCP增强线粒体自噬可抑制LPS诱导的IL-18(P<0.01)、IL-1β(P<0.01)等炎症因子及NLRP3(P<0.001)、P20(P<0.05)、cle-GSDMD(P<0.01)等焦亡相关蛋白表达水平的上调,并抑制caspase活化及细胞膜透化。而转染外源性mtDNA可逆转CCCP的作用,诱导IL-18(P<0.05)、IL-1β(P<0.01)等炎症因子及NLRP3(P<0.001)、P20(P<0.05)、cle-GSDMD(P<0.05)等焦亡相关蛋白表达水平升高,并活化caspase,增加细胞膜通透性。结论增强线粒体自噬可通过降低胞质mtDNA水平抑制LPS诱导的大鼠AM焦亡,减轻炎症反应。

关键词：脓毒症肺损伤肺泡巨噬细胞线粒体自噬焦亡

温经通脉壮骨汤联合提拉推按复位法对神经根型颈椎病的疗效分析

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中医临床研究 2022年第33期14卷 120-123页

作者：邓寿华谭智伟陈家泉张与平邓梓键陈静东莞市虎门中医院广东东莞519600

目的:探析神经根型颈椎病患者采用温经通脉壮骨汤联合提拉推按复位法治疗的效果。方法:样本选取年限为2019年10月-2021年10月,样本为120例神经根型颈椎病患者,以数字表法分为对照组(60例)与观察组(60例),对照组采用提拉推按复位法治疗,... 详细信息

目的:探析神经根型颈椎病患者采用温经通脉壮骨汤联合提拉推按复位法治疗的效果。方法:样本选取年限为2019年10月-2021年10月,样本为120例神经根型颈椎病患者,以数字表法分为对照组(60例)与观察组(60例),对照组采用提拉推按复位法治疗,观察组采用温经通脉壮骨汤联合提拉推按复位法治疗,比较两组临床疗效、治疗前后颈椎功能情况[颈部功能障碍指数(Neck Disability Index,NDI)]、疼痛程度[视觉模拟评分法(Visual Analogue Scale,VAS)]、血清疼痛因子水平[前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)、P物质(Substance P,SP)、基质金属蛋白酶3(Matrix Metalloproteinases 3,MMP3)],以及生活质量水平[日常生活能力评定量表(Activity of Daily Living Scale,ADL)]。结果:与对照组比较,观察组治疗总有效率明显更高(P0.05),治疗2周后,与对照组患者比较,观察组患者NDI评分、VAS评分更低,ADL评分更高(P0.05),治疗2周后,与对照组患者比较,观察组患者PGE2、SP、MMP3等指标水平更低(P<0.05)。结论:对神经根颈椎病患者采用温经通脉壮骨汤联合提拉推按复位法治疗可获得较好的效果,能够有效改善患者的颈椎功能,缓解疼痛感,提高生活质量,具有较高的临床推广价值。

关键词：神经根型颈椎病温经通脉壮骨汤提拉推按复位法疼痛程度生活质量

线粒体DNA介导细胞焦亡放大肺泡巨噬细胞炎症反应

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中华危重病急救医学 2018年第2期30卷 97-100页

作者：赵宁李勇刘芬江榕邵强胡世林陈家泉钱克俭南昌大学第一附属医院重症医学科江西南昌330006 南昌大学第一附属医院肿瘤科江西南昌330006

目的观察线粒体DNA（mtDNA）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的放大作用，并初步探讨其可能机制。方法提取SD大鼠肝脏组织mtDNA，采用超微量分光光度计及1％琼脂糖凝胶电泳检测其浓度及质量。分离和培养SD大鼠肺泡巨噬... 详细信息

目的观察线粒体DNA（mtDNA）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的放大作用，并初步探讨其可能机制。方法提取SD大鼠肝脏组织mtDNA，采用超微量分光光度计及1％琼脂糖凝胶电泳检测其浓度及质量。分离和培养SD大鼠肺泡巨噬细胞，取处于对数生长期的细胞，并将其分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、LPS组、mtDNA组和LPS＋mtDNA组4组，前3组分别在肺泡巨噬细胞培养基中加入等体积的PBS、LPS1mg／L或mtDNA10mg／L刺激6h和12h；LPS＋mtDNA组在肺泡巨噬细胞培养基中加入1mg／LPS刺激6h后再加入10mg／LmtDNA共同刺激6h。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量；采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测细胞焦亡关键蛋白Gasdermin D（GSDMD）的表达。结果①所提取的大鼠肝脏组织mtDNA在波长260nm和280nm处的吸光度比值（A260/280）介于1．8-2．0，琼脂糖凝胶电泳可见大小约16kb的单一条带。②LPS、mtDNA分别刺激肺泡巨噬细胞6h和12h后IL-1β、TNF-α含量均较PBS组明显升高。LPS刺激6h后再加入mtDNA共同刺激6h组IL-1β含量较LPS12h组进一步升高（ng／L：366．27±23．35比154．70±23．32，P〈0．01），而TNF-α含量与LPS12h组相比差异无统计学意义（ng/L：836．13±25．01比802．67±30．48，P〉0．05）。⑧LPS组、mtDNA组、LPS＋mtDNA组GSDMD蛋白表达均较PBS组明显升高（GSDMD／β-actin：1．77±0．05、1．65±0．04、2A0±0．05比1．00±0．02，均P〈0．01），且LPS＋mtDNA组GSDMD蛋白表达较LPS组进一步升高（P〈0．01）。结论mtDNA对LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应具有放大作用，其机制可能与mtDNA增加细胞焦亡有关。

关键词：线粒体DNA 细胞焦亡肺泡巨噬细胞炎症反应

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农业特产税政策怎样更具可操作性

广东财政 2002年第1期 30-31页

作者：陈家泉

农业特产税的征收管理工作，政策性强，涉及面广，工作量大。为了做好各地方农业特产税的征管工作，使得征管工作中有法可依，从1994年起中央和广东省先后制定了一系列的法律法规，对纳税义务，征收范围，税率、计征办法、纳税环节、减... 详细信息

农业特产税的征收管理工作，政策性强，涉及面广，工作量大。为了做好各地方农业特产税的征管工作，使得征管工作中有法可依，从1994年起中央和广东省先后制定了一系列的法律法规，对纳税义务，征收范围，税率、计征办法、纳税环节、减免税范围及审批程序等作了明确的规定，但操作起来往往比较困难。

关键词：农业特产税税收征管税收政策

脂多糖刺激肺泡上皮细胞分泌的外泌体对肺泡巨噬细胞的致炎效应

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中华急诊医学杂志 2018年第10期27卷 1126-1131页

作者：丁成志彭巍李勇杨云邵强赵宁陈家泉钱克俭刘芬南昌大学第一附属医院重症医学科南昌330006 南昌大学第一附属医院肿瘤科南昌330006

目的探讨脂多糖（LPS）刺激肺泡上皮细胞（RLE-6TN）分泌的外泌体对肺泡巨噬细胞（NR8383）的致炎效应。方法运用Transwell共培养体系，将经过不同处理的RLE-6TN细胞（正常组、LPS刺激组、外泌体抑制剂组、外泌体抑制剂预处理＋LPS刺激... 详细信息

目的探讨脂多糖（LPS）刺激肺泡上皮细胞（RLE-6TN）分泌的外泌体对肺泡巨噬细胞（NR8383）的致炎效应。方法运用Transwell共培养体系，将经过不同处理的RLE-6TN细胞（正常组、LPS刺激组、外泌体抑制剂组、外泌体抑制剂预处理＋LPS刺激组）分别与NR8383细胞共培养，NR8383细胞单培养作为空白对照组，共培养12h后利用荧光定量PCR（qPCR）法检测各组NR8383细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的mRNA相对表达量。为进一步探讨肺泡上皮细胞分泌的外泌体对NR8383炎症反应的影响，采用差速超速离心法分别提取实验组外泌体（LPS刺激RLE-6TN细胞分泌的外泌体）和对照组外泌体（正常RLE-6TN细胞分泌的外泌体），运用透射电镜、蛋白免疫印迹鉴定外泌体，用qNano粒子直径分析仪检测外泌体粒子直径。将NR8383细胞分为实验组，对照组，PBS组，分别加入外泌体悬液（10μg／mL，实验组和对照组）和等体积的PBS，培养12h后，用激光共聚焦显微镜观察NR8383细胞对外泌体的吞噬，用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞上清液中炎症因子的IL-1β、TNF-α、IL-6的表达水平。结果①Transwell共培养实验中，与空白对照组相比，LPS组的炎症因子mRNA相对表达量显著升高（P〈0．01），而与LPS组相比，外泌体抑制剂预处理＋LPS组的炎症因子mRNA相对表达量却明显降低（P〈0．01）；②提取的外泌体经过透射电镜观察为圆形或椭圆形囊泡，直径为40-100nm，表达外泌体标志物CD63和CD9；③两组外泌体与NR8383细胞共培养5h后，激光共聚焦显微镜下见胞内散在分布被吞噬的红色荧光外泌体。实验组、对照组外泌体分别作用于NR8383细胞后，与PBS组相比，实验组外泌体引起NR8383细胞炎症因子表达的显著升高（P〈0．01），对照组外泌体则差异无统计学意义（P〉0．05）。结论LPS刺激肺泡上皮细胞分泌的外泌体能够激活肺泡巨噬细胞产生致炎作用。

关键词：脂多糖外泌体肺泡上皮细胞肺泡巨噬细胞炎症

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工艺品模型的特征添加与重构

设计 2015年第13期28卷 45-46页

作者：胡笑奇陈家泉金逸林丽水学院工程与设计学院龙泉市金宏瓷业有限公司

将逆向工程引入到工艺品的设计制造中,可有效地提高工艺品的设计效率,降低设计周期,还可以方便地对数字模型进行特性添加,使得作品更符合顾客"胃口"。本文以人猿泰山为例,基于逆向工程方法获取工艺品原件的数字化模型,通过点云预处理、... 详细信息

将逆向工程引入到工艺品的设计制造中,可有效地提高工艺品的设计效率,降低设计周期,还可以方便地对数字模型进行特性添加,使得作品更符合顾客"胃口"。本文以人猿泰山为例,基于逆向工程方法获取工艺品原件的数字化模型,通过点云预处理、构建多边形、网格划分、曲面重构等方法还原一个更自由、造型语言更生动的数字模型。在三维软件Geomagic/Unigraphics NX进行曲面重构和创新,通过特征添加,将原型进行再设计,从而提高工艺品的设计质量。本文将为青瓷、石雕等工艺品的快速建模提供了一种新的方法和途径。

关键词：工艺品逆向工程 Geomagic