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基于代谢组学研究原花青素B_(1)的肠道微生物代谢

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中国食品学报 2022年第9期22卷 13-23页

作者：刘若男陈婉冰朱晓玲杨宏宋哲刘睿华中农业大学食品科学与技术学院环境食品学教育部重点实验室武汉430070 武汉市蜂产品质量控制工程技术研究中心武汉430070 农业农村部华中都市农业重点实验室武汉430070 湖北省食品质量安全监督检验研究院武汉430073

目的:利用猪盲肠微生物通过体外静态培养的方式探究原花青素B_(1)的肠道微生物代谢。方法:在厌氧操作条件下,从新鲜屠宰的猪盲肠肠腔中获得孵育模型所需肠道微生物,配制培养基,孵育原花青素B_(1)。采集0,2,4,6,10,18 h的孵育液,用超高... 详细信息

目的:利用猪盲肠微生物通过体外静态培养的方式探究原花青素B_(1)的肠道微生物代谢。方法:在厌氧操作条件下,从新鲜屠宰的猪盲肠肠腔中获得孵育模型所需肠道微生物,配制培养基,孵育原花青素B_(1)。采集0,2,4,6,10,18 h的孵育液,用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用仪(UHPLC-TOF-MS/MS)检测不同时间点的代谢产物,借助非靶向代谢组学分析方法,确定原花青素B_(1)代谢过程中的差异性代谢产物,并以此解析原花青素B_(1)的代谢。结果:共筛选和鉴定到21种代谢产物,其中原花青素B_(1)经肠道菌群的代谢快速,在6 h时消耗殆尽;代谢产物儿茶素和5-(3',4'-二羟基苯基)-γ-戊内酯在2~4 h间大量产生;苯丙酸和苯甲酸等为主要的代谢产物,在6 h达到峰值,在4~18 h间持续产生。通过以上结果分析原花青素B_(1)的代谢路径,原花青素B_(1)可能通过3种路径代谢,分别是:经历黄烷键断裂,下部结构形成儿茶素,儿茶素进一步发生C环开环,形成儿茶素开环产物(DHP-OL);原花青素B_(1)下部结构单元经历A环裂解,形成苯基-γ-戊内酯;原花青素B_(1)上部结构单元裂解直接形成酚酸类化合物。

关键词：原花青素B_(1) 猪盲肠微生物代谢路径代谢组学

尿路感染细胞实验中庆大霉素对尿路致病大肠杆菌的杀伤作用及细胞毒性研究

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西安交通大学学报(医学版) 2023年

作者：张婷王家兴陈婉冰韩锦李可西安交通大学第二附属医院肾内科西安交通大学第二附属医院科研中心实验室西北大学医学院血液学研究所

目的在尿路感染体外细胞实验中，比较不同浓度庆大霉素(0、10、20、50、100、200μg/mL)对尿路致病大肠杆菌的杀伤作用，对尿路上皮细胞及炎性细胞如巨噬细胞的毒性作用。方法比较不同浓度庆大霉素对不同量尿路致病大肠杆菌J96菌株(10... 详细信息

目的在尿路感染体外细胞实验中，比较不同浓度庆大霉素(0、10、20、50、100、200μg/mL)对尿路致病大肠杆菌的杀伤作用，对尿路上皮细胞及炎性细胞如巨噬细胞的毒性作用。方法比较不同浓度庆大霉素对不同量尿路致病大肠杆菌J96菌株(108、107、106)的杀伤情况；CCK-8实验检测不同浓度庆大霉素在不同时间内(2h或24h)对原代培养的C57BL/6雄鼠肾小管上皮细胞、腹腔巨噬细胞，人膀胱上皮细胞系J82的毒性作用；根据实验选择合适的庆大霉素浓度和作用时间检测：J96对小鼠肾小管上皮细胞的黏附、入侵；小鼠巨噬细胞对J96的吞噬、清除。结果庆大霉素(≥10μg/mL)对J96的杀伤作用均强于1%的青霉素/链霉素双抗(P<0.0001)，高浓度庆大霉素(≥100μg/mL)可在30min内完全杀伤高达108的J96。50μg/mL庆大霉素作用2h可对人膀胱上皮细胞系J82产生毒性作用(P<0.05)。结论本文明确了不同细胞体外实验时适宜的庆大霉素处理浓度及时间。人膀胱上皮细胞系J82对庆大霉素更为敏感。

关键词：尿路感染庆大霉素尿路致病大肠杆菌细胞毒性

基于代谢组学研究原花青素B的肠道微生物代谢

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中国食品学报 2022年

作者：刘若男陈婉冰朱晓玲杨宏宋哲刘睿湖北省食品质量安全监督检验研究院武汉市蜂产品质量控制工程技术研究中心华中农业大学食品科学与技术学院环境食品学教育部重点实验室农业农村部华中都市农业重点实验室

目的：利用猪盲肠微生物通过体外静态培养的方式探究原花青素B的肠道微生物代谢。方法：在厌氧操作条件下，从新鲜屠宰的猪盲肠肠腔中获得孵育模型所需肠道微生物，配制培养基，孵育原花青素B。采集0，2，4，6，10，18 h的孵育液，用超...

目的：利用猪盲肠微生物通过体外静态培养的方式探究原花青素B的肠道微生物代谢。方法：在厌氧操作条件下，从新鲜屠宰的猪盲肠肠腔中获得孵育模型所需肠道微生物，配制培养基，孵育原花青素B。采集0，2，4，6，10，18 h的孵育液，用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用仪(UHPLC-TOF-MS/MS)检测不同时间点的代谢产物，借助非靶向代谢组学分析方法，确定原花青素B代谢过程中的差异性代谢产物，并以此解析原花青素B的代谢。结果：共筛选和鉴定到21种代谢产物，其中原花青素B经肠道菌群的代谢快速，在6 h时消耗殆尽；代谢产物儿茶素和5-(3’，4’-二羟基苯基)-γ-戊内酯在2～4 h间大量产生；苯丙酸和苯甲酸等为主要的代谢产物，在6 h达到峰值，在4～18 h间持续产生。通过以上结果分析原花青素B的代谢路径，原花青素B可能通过3种路径代谢，分别是：经历黄烷键断裂，下部结构形成儿茶素，儿茶素进一步发生C环开环，形成儿茶素开环产物(DHP-OL)；原花青素B下部结构单元经历A环裂解，形成苯基-γ-戊内酯；原花青素B上部结构单元裂解直接形成酚酸类化合物。

关键词：

通过SRC3敲低改善糖尿病肾病肾功能紊乱的实验研究

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中国生物工程杂志 2023年第7期43卷 23-35页

作者：周鑫帝甘淳陈婉冰李秋重庆医科大学附属儿童医院、国家儿童健康与疾病临床医学研究中心、儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆400014

目的:研究类固醇受体共激活因子3(steroid receptor coactivator 3,SRC3)参与糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)肾功能紊乱及足细胞损伤的分子机制。方法:分析临床DKD肾活检样本SRC3的表达与足细胞损伤的相关性,并通过对C57BL/6... 详细信息

目的:研究类固醇受体共激活因子3(steroid receptor coactivator 3,SRC3)参与糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)肾功能紊乱及足细胞损伤的分子机制。方法:分析临床DKD肾活检样本SRC3的表达与足细胞损伤的相关性,并通过对C57BL/6及SRC3-/-小鼠注射链脲霉素(streptozotocin, STZ)诱导DKD疾病模型,检测空腹血糖、血清肌酐、血清尿素氮、24 h尿量、尿白蛋白肌酐比以评估肾功能,苏木精-伊红染色法、糖原染色法观察肾小球病理改变,透射电镜观察肾小球超微结构变化;免疫荧光染色及Western blot分析SRC3、足细胞标志物WT1、Podocin、Nephrin、凋亡相关蛋白Caspase3在DKD肾脏中的表达;酶联免疫吸附测定检测足细胞和系膜细胞上清液炎症因子TNF-α、IL-1β的水平。结果:STZ成功诱导了DKD小鼠模型,可以模拟DKD患者肾小球损伤;SRC3在DKD患者及小鼠肾脏中高表达,伴随足细胞标志物表达降低,提示SRC3蛋白表达水平与肾小球损伤程度呈正相关;小鼠敲除SRC3基因能够改善STZ诱导的小鼠肾功能紊乱,缓解足细胞损伤;体外实验也证实了沉默SRC3可缓解高糖环境刺激下足细胞的损伤;同时,敲降SRC3能够减少高糖环境下足细胞与系膜细胞炎症因子的产生。结论:SRC3蛋白在DKD患者、小鼠肾脏以及高糖环境的足细胞中高表达,证实了SRC3与DKD肾小球损伤呈正相关,进一步研究证实,在高糖刺激下SRC3蛋白高表达可促进足细胞与系膜细胞炎症因子产生。

关键词：类固醇受体共激活因子3 糖尿病肾病肾功能紊乱炎症足细胞损伤

黄烷-3-醇类化合物及其代谢产物的靶向定量方法研究

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质谱学报 2022年第1期43卷 67-77,I0003页

作者：刘若男陈婉冰杨宏胡亦清鲁群董军刘睿华中农业大学食品科学与技术学院环境食品学教育部重点实验室湖北武汉430070 武汉市蜂产品质量控制工程技术研究中心湖北武汉430070 武汉市农业科学院环境与安全研究所湖北武汉430070 农业农村部华中都市农业重点实验室湖北武汉430070

黄烷-3-醇类化合物作为重要的膳食多酚,其生物利用度不仅局限于母体化合物,更重要的是其经过体内肠道微生物代谢后的产物。为了明确体内代谢情况及代谢产物对生物利用度的贡献,本研究探究了黄烷-3-醇类化合物及其代谢产物的靶向定量分... 详细信息

黄烷-3-醇类化合物作为重要的膳食多酚,其生物利用度不仅局限于母体化合物,更重要的是其经过体内肠道微生物代谢后的产物。为了明确体内代谢情况及代谢产物对生物利用度的贡献,本研究探究了黄烷-3-醇类化合物及其代谢产物的靶向定量分析方法。根据各化合物子离子响应值的差异,确定其在混合标准溶液中适合的浓度,并建立了超高效液相色谱-三重四极杆-串联质谱(UHPLC-QQQ-MS)定量分析方法,在15 min分析时间内所有化合物的分离度良好,并有适宜的响应值。方法学验证结果表明,定量化合物具有良好的线性关系;并以尿液、粪便和血浆为研究材料考察方法的稳定性,日内和日间精密度RSD值均在15%以下,基质效应介于±20%之间,回收率在70%~120%之间。该方法快速、灵敏、准确、稳定,可用于黄烷-3-醇类化合物在体内的靶向定量研究。

关键词：超高效液相色谱-三重四极杆-串联质谱(UHPLC-QQQ-MS) 黄烷-3-醇类化合物代谢产物

补体C3a受体在尿路感染小鼠膀胱和肾脏中的表达及意义分析

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中国病理生理杂志 2023年第8期39卷 1383-1389页

作者：邵静陈婉冰曹博赵淑娟韩锦李可武坤毅西安交通大学第二附属医院科研中心实验室陕西西安710004 西安交通大学第二附属医院肾病科陕西西安710004

目的:研究补体C3a受体(C3aR)在尿路感染模型小鼠膀胱和肾脏的表达与分布。方法:将雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组,以及3、6、24和48 h感染组,每组8~10只。采用逆行推注人型大肠杆菌J96建立小鼠尿路感染模型。平板涂布计数法检测小... 详细信息

目的:研究补体C3a受体(C3aR)在尿路感染模型小鼠膀胱和肾脏的表达与分布。方法:将雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组,以及3、6、24和48 h感染组,每组8~10只。采用逆行推注人型大肠杆菌J96建立小鼠尿路感染模型。平板涂布计数法检测小鼠膀胱和肾脏细菌负荷量;HE染色评估膀胱和肾脏病理损伤程度;ELISA检测肾组织肾脏损伤分子1(KIM-1)和尿液中C3a水平;蛋白印迹和免疫荧光检测C3aR在膀胱和肾脏的表达与分布。结果:感染24 h时小鼠膀胱细菌负荷量达到峰值,48 h时细菌量下降;感染6 h时小鼠肾脏中细菌负荷量最高,随着感染时间延长逐渐减少。感染后,膀胱病理表现为移行上皮细胞脱落,黏膜和固有层炎症细胞浸润;肾脏病理表现为肾小球萎缩,肾小管上皮细胞损伤,肾小管间质炎症细胞浸润及肾盂处组织脱落。感染后肾脏KIM-1显著增加,尿液中C3a水平升高。蛋白印迹结果显示,感染后膀胱和肾脏C3aR蛋白水平升高。免疫荧光分析显示,C3aR在正常膀胱上皮细胞有少量表达,感染后在上皮细胞大量表达,在深层肌肉组织有少量表达;C3aR在正常肾皮质的肾小球和髓质的实质细胞有少量表达,感染后在肾小球、肾小管间质以及髓质的炎症浸润细胞中大量表达。结论:小鼠尿路感染过程中C3a-C3aR信号激活,C3a在尿液中表达升高,C3aR在膀胱和肾脏中表达上调,炎症细胞表达的C3aR参与小鼠尿路感染进程并发挥作用。

关键词：尿路感染过敏毒素 C3a受体炎症

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SPL调控因子在植物生长调控的研究进展

分子植物育种 2020年第5期18卷 1505-1512页

作者：陈婉冰周波东北林业大学生命科学学院哈尔滨150036

SPL(SQUAMOSA promoter-binding protein-like)是植物特有的转录因子,它参与了植物叶、花、果实的发育、发育阶段转变、花青素的合成以及胁迫应答等调控过程。SPL转录因子家族成员均含有高度保守的SBP结构域,可以特异性结合所调控基因... 详细信息

SPL(SQUAMOSA promoter-binding protein-like)是植物特有的转录因子,它参与了植物叶、花、果实的发育、发育阶段转变、花青素的合成以及胁迫应答等调控过程。SPL转录因子家族成员均含有高度保守的SBP结构域,可以特异性结合所调控基因启动子的顺式作用元件,还可与其它调控蛋白相互作用,共同调控相关基因的表达。另外,SPL在转录后水平还受miRNA156/miRNA157的负调控。本研究从SPL调控因子在植物形态建成、次生代谢、生理胁迫中的表达调控研究进展方面进行综述。

关键词： SPL 植物发育次生代谢生理胁迫表达调控

2014年重庆地区星状病毒、札如病毒、腺病毒所致儿童急性腹泻的流行特点

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2014年重庆地区星状病毒、札如病毒、腺病毒所致儿童急性腹泻的流...

作者：陈婉冰重庆医科大学

学位级别：硕士

目的了解2014年全年重庆地区,腺病毒、星状病毒及札如病毒,所导致的儿童急性腹泻在不同月份、性别、年龄组儿童中的流行情况及其特点。并通过检测获得病毒核酸序列,了解病毒变异情况,为指导儿童腹泻的预防提供数据基础。方法于重庆医科... 详细信息

目的了解2014年全年重庆地区,腺病毒、星状病毒及札如病毒,所导致的儿童急性腹泻在不同月份、性别、年龄组儿童中的流行情况及其特点。并通过检测获得病毒核酸序列,了解病毒变异情况,为指导儿童腹泻的预防提供数据基础。方法于重庆医科大学附属儿童医院门诊部,共搜集2014年1月到12月儿童急性腹泻(≤2周)的大便标本,同时采集患儿部分临床信息。将标本于医学实验室进行核酸检测,其中星状病毒和札如病毒通过逆转录PCR,腺病毒通过PCR进行检测。将所测得结果按照月份、性别、年龄进行对照。同时将所测得的阳性标本进一步进行序列测定及基因分型,按多元统计分析方法计算其遗传距离,同时构建进化树。结果于2014年1月份至12月份,共采集511份大便标本,来自男女儿童标本比例为290：221(1.3：1)。本文所研究的3种病毒检出阳性标本数总和为53例,占采集标本总例数10.4%(53/511),未检测出混合感染。2014年1月-12月总例数中,札如病毒阳性检出例数为24例,占总例数4.7%(24/511);人腺病毒阳性检出例数为15例,占总例数2.9%(15/511);人星状病毒阳性检出例数为14例,占总例数2.7%(14/511)。经过卡方检验可知,3种病毒男、女患儿阳性率比较无统计学差异。3种病毒不同月份检出率有明显差异,其中札如病毒1-4月份及10-12月份均有阳性检出,以11月份阳性率最高。而人星状病毒感染主要分布在1月份、11-12月份以及4月份,阳性率最高为1月份,其余月份未检测出人星状病毒阳性标本。人腺病毒感染除1、7月份及11月份外,其余月份均有检测出阳性标本,其中以3月份阳性率最高。将患儿按照月龄分为不同组别,进行比较分析,发现SLV检测阳性者主要分布在13-24月龄组(7.6%),其次为25-36月龄(6.5%)及0-12月龄(3.0%),而37-48月龄组、49-60月龄组及>60月龄组未检测到SLV阳性标本。在星状病毒阳性例数中,阳性率最高的月龄组为25-36月龄组,阳性率为4.3%,其次为13-24月龄组2.9%以及0-12月龄组2.7%。而在人腺病毒阳性者主要分布在13-24月龄组,其阳性率为3.5%,其次先后为0-12月龄组(3.0%)以及25-36月龄组(2.2%)。此次研究HAstrV主要流行株为HAstrV-1,其次为HAstrV-20 HAdV主要基因型别为HAdV-40和41型,而SLV主要基因型别为GI.1和GI.2。结论星状病毒、腺病毒以及札如病毒,是除轮状病毒和诺如病毒外,引起重庆地区儿童急性腹泻的重要病原体。星状病毒及札如病毒流行以寒冷季节为主。腺病毒感染无明显的月份差异。3种病毒感染对象均主要为3岁以下儿童。星状病毒优势株为HAstrV-1和2型,腺病毒为HAdV-40和41型,札如病毒以GI.1和GI.2为主。此次研究发现HAdV5、7、31型可能也可引起儿童急性腹泻,需要长期监测进行验证。

关键词：儿童病毒性腹泻核酸检测基因分型进化树

黄烷-3-醇类化合物在体内的吸收、代谢特征与机制研究进展

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食品科学 2021年第21期42卷 213-222页

作者：刘若男陈婉冰晏芳芳刘敏鲁群杨宏刘睿华中农业大学食品科学与技术学院环境食品学教育部重点实验室湖北武汉430070 武汉市蜂产品质量控制工程技术研究中心湖北武汉430000 农业农村部华中都市农业重点实验室湖北武汉430000

黄烷-3-醇类化合物是人类饮食中含量最丰富的膳食多酚之一,近年来,黄烷-3-醇类化合物备受关注,这主要是因为许多研究发现其与很多慢性疾病风险的降低和代谢综合征的缓解密切相关,但黄烷-3-醇类化合物在体内发挥的作用一定程度上取决于... 详细信息

黄烷-3-醇类化合物是人类饮食中含量最丰富的膳食多酚之一,近年来,黄烷-3-醇类化合物备受关注,这主要是因为许多研究发现其与很多慢性疾病风险的降低和代谢综合征的缓解密切相关,但黄烷-3-醇类化合物在体内发挥的作用一定程度上取决于其被摄入后的吸收和代谢,尤其是肠道微生物的分解代谢。因此,本文将重点探讨黄烷-3-醇类化合物的吸收、代谢及其生物转化的途径,有助于揭示其在体内的生物学作用。

关键词：黄烷-3-醇类化合物吸收肠道微生物代谢机制