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秦岭森林土壤芽孢杆菌的分离筛选、鉴定及抑菌作用研究

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秦岭森林土壤芽孢杆菌的分离筛选、鉴定及抑菌作用研究

作者：陈太春西北农林科技大学

学位级别：硕士

秦岭作为我国重要的南北地理分界线更是黄河与长江流域的分水岭，其森林茂密、植被种类丰富、土壤中富含有机质、微生物资源特别是优势细菌丰富而独特，有着巨大的研究价值和潜力。芽孢杆菌具有内生芽孢、抗逆性强、繁殖速度快、营养要... 详细信息

秦岭作为我国重要的南北地理分界线更是黄河与长江流域的分水岭，其森林茂密、植被种类丰富、土壤中富含有机质、微生物资源特别是优势细菌丰富而独特，有着巨大的研究价值和潜力。芽孢杆菌具有内生芽孢、抗逆性强、繁殖速度快、营养要求简单和易于在植物根围定殖的特点，使其在植物病害生物防治中被广泛地研究和利用。本研究旨在从秦岭太白山区采集的森林土壤样品中分离出对多种植物病原真菌具有较强生防作用的芽孢杆菌，对其经行鉴定、发酵优化，对其抑菌机理经行研究，以期得到用于植物病害防治的微生物农药新资源。本试验采用传统微生物分离培养方法，从采集的23份土壤样品中分离到芽孢杆菌467株。采用皿内平板对峙法，以稻瘟病菌、番茄灰霉病菌、苹果腐烂病菌、梨黑星病菌、小麦赤霉病菌、玉米大斑病菌、苹果轮纹病菌等10种真菌为供试植物病原真菌，对所分离的541株细菌进行拮抗初筛，得到抗真菌活性较强的细菌9株。进一步对这9株菌进行发酵滤液复筛和单孢拮抗性筛选，最终确定了一株具有较强拮抗性的最优菌株An‐ctc‐y‐1，对稻瘟病菌和番茄灰霉病菌抑制效果最好，抑制率分别达到93.50％和92.60％。依据An‐ctc‐y‐1菌株的培养特征、形态学特征、生理生化特征及16S rRNA测定及分析比对，参考相关文献，初步确定An-ctc-y-1为芽孢杆菌属中的甲基营养型芽孢杆菌（Bacillusmethylotrophicus）。运用单因素试验和正交试验对An-ctc-y-1菌株进行了发酵优化，筛选到菌株基础培养基为LB培养基;摇瓶最佳培养条件为：初始最佳pH值7.5，最佳发酵时间48h，最佳温度32℃，摇瓶转速150r/min。菌株An-ctc-y-1的抑菌谱较广，对多种病原菌均有很高的拮抗活性，对稻瘟病菌、番茄灰霉病菌、梨黑星病菌、辣椒疫霉病菌及苹果轮纹病菌的抑制效果均达90%以上。代谢产物抑菌机理研究表明：被抑制的植物病原真菌菌丝生长缓慢，大部分扭曲，肿大，畸形，有的顶部出现膨大的泡囊，菌丝的分支增多，原生质浓缩，分布不均匀，有的原生质体出现破碎外露;An-ctc-y-1代谢产物不仅能够抑制病原菌孢子的萌发而且致使孢子畸形。通过对An‐ctc‐y‐1菌株代谢产物对温室病害的预防和治疗作用的测定，发现其对番茄灰霉病、番茄疫霉根腐病有很好的治疗作用;An‐ctc‐y‐1菌株发酵液能明显提高番茄、黄瓜等种子发芽率，有一定的促进生长的作用，具体作用机理还有待进一步研究。

关键词：分离筛选芽孢杆菌抑制率防治效果菌丝

委内瑞拉链霉菌秦岭变种属间接合转移系统的构建及透明颤菌血红蛋白的表达

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微生物学报 2010年第3期50卷 406-410页

作者：高峰王斌陈太春汪志军安德荣西北农林科技大学植物保护学院陕西省农业分子生物学重点实验室杨凌712100 上海交通大学生命科学技术学院上海200030

【目的】构建委内瑞拉链霉菌秦岭变种属间接合转移系统及透明颤菌血红蛋白的表达。【方法】以链霉菌广泛使用的整合型质粒pSET152和复制型pHZ1358为出发质粒,通过供体大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)进行属间接合转移委内... 详细信息

【目的】构建委内瑞拉链霉菌秦岭变种属间接合转移系统及透明颤菌血红蛋白的表达。【方法】以链霉菌广泛使用的整合型质粒pSET152和复制型pHZ1358为出发质粒,通过供体大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)进行属间接合转移委内瑞拉链霉菌秦岭变种。【结果】确定了该变种的最佳接合转移条件;通过SOE-PCR(Splicing by overlap extension PCR)技术构建含PermE和vhb结构基因融合片段的整合型表达载体pJD100,转化ET12567(pUZ8002)后属间接合转移委内瑞拉链霉菌秦岭变种。通过PCR和CO结合差光谱验证了vhb基因在委内瑞拉链霉菌秦岭变种中的整合表达。【结论】本文首次探索了委内瑞拉链霉菌秦岭变种接合转移系统,确定了委内瑞拉链霉菌秦岭变种的最佳接合转移条件,并采用基因工程手段使vhb基因在委内瑞拉链霉菌秦岭变种中获得表达。

关键词：委内瑞拉链霉菌秦岭变种接合转移 vhb基因 CO结合差光谱

透明颤菌血红蛋白基因(vgb)表达对委内瑞拉链霉菌秦岭变种生长代谢及瑞拉菌素效价的影响

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农业生物技术学报 2010年第6期18卷 1182-1188页

作者：高峰陈太春苟丽霞安德荣西北农林科技大学植物保护学院陕西省农业分子生物学重点实验室

委内瑞拉链霉菌秦岭变种(Streptomyces venezuelae ***)是瑞拉菌素(Zuelacmycin)的产生菌,为进一步探讨透明颤菌血红蛋白基因(vgb)表达对秦岭变种以及瑞拉菌素产率的影响,利用红霉素抗性基因启动子在委内瑞拉链霉菌秦岭变种中表达vgb基... 详细信息

委内瑞拉链霉菌秦岭变种(Streptomyces venezuelae ***)是瑞拉菌素(Zuelacmycin)的产生菌,为进一步探讨透明颤菌血红蛋白基因(vgb)表达对秦岭变种以及瑞拉菌素产率的影响,利用红霉素抗性基因启动子在委内瑞拉链霉菌秦岭变种中表达vgb基因,并在5L发酵罐中研究了工程菌株与原始菌株的生长代谢特性及瑞拉菌素的效价。结果表明:在高溶氧条件下vgb基因表达并未对菌丝体生长和氨基氮的消耗产生明显的影响,但提高了对还原糖的消耗,工程菌株发酵瑞拉菌素的效价比原始菌株降低8%;在低溶氧条件下,vgb基因的表达可促进菌丝体的生长和次级代谢,并提高了还原糖的消耗,工程菌株发酵瑞拉菌素的效价比原始菌株提高45%。本研究首次利用VHb蛋白基因表达提高了委内瑞拉链霉菌秦岭变种对氧的利用率和瑞拉菌素的效价,为进一步推动瑞拉菌素工业化生产提供基础资料。

关键词：透明颤菌血红蛋白基因委内瑞拉链霉菌秦岭变种溶氧浓度瑞拉菌素

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营销新模式：一对一市场营销

当代经济 2004年第6期21卷 19-20页

作者：汪洋陈太春西南财经大学

21世纪,众多企业的经营行为,都将背靠经济全球化,面临持续的高新技术的冲击和顾客消费理性程度提高的挑战,其经营环境将发生巨大的变化:市场的饱和、商品同质化及生命周期缩短、价格竞争的加剧、流通渠道的重组、IT技术的迅速发展、顾... 详细信息

21世纪,众多企业的经营行为,都将背靠经济全球化,面临持续的高新技术的冲击和顾客消费理性程度提高的挑战,其经营环境将发生巨大的变化:市场的饱和、商品同质化及生命周期缩短、价格竞争的加剧、流通渠道的重组、IT技术的迅速发展、顾客日益增强的个性化需求等,这些新的变化使得企业生存将更加困难.

关键词：企业营销一对一市场营销个性化需求价格竞争经营环境

烟草黑胫病拮抗根际芽胞杆菌FB-16的筛选鉴定及其抑菌活性

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植物保护学报 2012年第3期39卷 224-230页

作者：冯志珍陈太春段军娜陈德鑫成巨龙安德荣西北农林科技大学植物保护学院旱区作物逆境生物学国家重点实验室陕西杨凌712100 中国烟草总公司青州烟草研究所青岛266001 中国烟草总公司陕西省烟草研究所西安710061

为获得对烟草黑胫病有较强生防效果的拮抗细菌,从健康烟草根际采集30份土壤样品,分离纯化得到347株细菌,经病原真菌定向筛选后得到1株对烟草黑胫病菌等病原真菌拮抗活性较好的细菌FB-16,其对烟草黑胫病菌的抑菌带宽为23mm。采用菌丝生... 详细信息

为获得对烟草黑胫病有较强生防效果的拮抗细菌,从健康烟草根际采集30份土壤样品,分离纯化得到347株细菌,经病原真菌定向筛选后得到1株对烟草黑胫病菌等病原真菌拮抗活性较好的细菌FB-16,其对烟草黑胫病菌的抑菌带宽为23mm。采用菌丝生长速率法、作用机制试验、温室防病试验测定FB-16的抑菌作用,并通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定。结果显示,菌株FB-16发酵液对烟草黑胫病菌菌丝生长抑制率为95.96%;其代谢产物对烟草黑胫病菌菌丝有致畸作用;菌株FB-16为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliauefaciens(Gen-Bank登录号为JN245982);饱和度25%硫酸铵获得的抑菌物质对烟草黑胫病菌的抑菌活性较高,抑菌圈直径达42.00 mm;FB-16活性产物处理的烟草植株在接种烟草黑胫病菌7天后的防治效果为69.96%。表明菌株FB-16在烟草黑胫病生物防治中具有潜在的利用价值。

关键词：烟草黑胫病菌根际细菌抑菌活性防治效果

瘤胃保护胆碱和莫能菌素对围产期奶牛生产性能和代谢影响的研究

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饲料广角 2015年第12期 37-39页

作者：李璐李莎陈太春西安市临潼区动物疫病预防控制中心西安市临潼区栎阳畜牧兽医站西安市临潼区穆寨畜牧兽医站

围产期奶牛日粮中添加胆碱和莫能菌素的作用分别在于促进代谢和能量平衡,最终达到促进围产期奶牛健康,提高生产性能以及繁殖性能的目的。本文系统综述了过瘤胃保护胆碱和莫能菌素对围产期奶牛生产性能和代谢的影响。

关键词：围产期保护胆碱莫能菌素生产性能代谢

番茄疫霉根腐病拮抗细菌FC12-05的筛选、鉴定及其抑菌活性初探

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2012年第4期40卷 107-114页

作者：冯志珍李金岭陈太春马志远段军娜安德荣西北农林科技大学植物保护学院旱区作物逆境生物学国家重点实验室陕西杨凌712100

【目的】从多年耕作的番茄大棚土壤中筛选对番茄疫霉根腐病有较强生防效果的拮抗细菌。【方法】随机采集多年耕作的番茄大棚土壤样品30份,采用平板稀释法从中分离细菌,以辣椒疫霉病菌、番茄灰霉病菌、烟草黑胫病菌、小麦根腐病菌、棉花... 详细信息

【目的】从多年耕作的番茄大棚土壤中筛选对番茄疫霉根腐病有较强生防效果的拮抗细菌。【方法】随机采集多年耕作的番茄大棚土壤样品30份,采用平板稀释法从中分离细菌,以辣椒疫霉病菌、番茄灰霉病菌、烟草黑胫病菌、小麦根腐病菌、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌为靶标菌筛选拮抗菌;通过形态学特征、生理生化特征及16SrDNA序列分析对筛选出的拮抗菌株进行鉴定。检测拮抗菌株无菌发酵液对供试病原真菌菌丝生长、孢子萌发、菌丝形态的影响及对番茄疫霉根腐病的盆栽防效。用饱和度分别为10%,20%,25%,30%,35%,40%,50%,60%,70%,80%,90%和100%硫酸铵对拮抗菌株无菌发酵液进行沉淀,测定不同饱和度硫酸铵沉淀物的抑菌活性。【结果】从采集的30份土壤样品中分离得到253株细菌,经病原真菌定向筛选后,得到1株对辣椒疫霉病菌、番茄灰霉病菌、烟草黑胫病菌、小麦根腐病菌、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌有较强生防效果的细菌FC12-05,经鉴定FC12-05为西姆芽孢杆菌(Bacillus siamensis)。FC12-05菌株无菌发酵液对辣椒疫霉病菌和番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制效果较好,菌丝生长抑制率分别为95.02%和92.43%,EC50分别为10.14和10.78mL/L;对抑制辣椒疫霉病菌和番茄灰霉病菌的孢子萌发抑制率分别为94.60%和92.45%,EC50分别为2.09和2.53mL/L;对番茄疫霉根腐病的盆栽防治效果高达93.50%。在硫酸铵饱和度为10%～25%时,获得的抑菌物质对辣椒疫霉病菌均有抑菌活性,其中硫酸铵饱和度为20%时获得的抑菌物质对辣椒疫霉病的抑菌活性较高,抑菌圈直径达19.33mm;硫酸铵饱和度≥30%时,无沉淀析出,对辣椒疫霉病菌无抑菌活性。【结论】筛选到的拮抗细菌FC12-05对番茄疫霉根腐病有较强的生防效果,能显著抑制番茄疫霉根腐病菌的生长。

关键词：番茄疫霉根腐病辣椒疫霉病菌抑菌活性

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核桃种植中常见病虫害及防治措施

北京农业 2015年第28期 109-110页

作者：王梦怡陈太春陕西省西安市临潼区农林局

核桃作为一种坚果食物,被称为"万岁子"或"长寿果",具有较高的营养价值和药用价值。但在我国核桃受到人们青睐的同时,常见病虫害对核桃产量与质量的影响是目前核桃种植中遇到的一大困难。基于此,分析与研究核桃种植中常见的病虫害,对此... 详细信息

核桃作为一种坚果食物,被称为"万岁子"或"长寿果",具有较高的营养价值和药用价值。但在我国核桃受到人们青睐的同时,常见病虫害对核桃产量与质量的影响是目前核桃种植中遇到的一大困难。基于此,分析与研究核桃种植中常见的病虫害,对此提出有效防治措施。

关键词：核桃种植病虫害病虫草害防治措施核桃胡桃细菌性黑斑病

一株源于醇化烟叶表面高效降解TSNA菌株AS97的分离筛选、鉴定及应用

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微生物学报 2011年第10期51卷 1326-1333页

作者：单宏英陈德鑫李晶陈太春胡怀喜郭志刚安德荣西北农林科技大学植物保护学院陕西省农业分子生物学重点实验室杨凌712100 中国烟草总公司青州烟草研究所青岛266001 陕西中烟工业有限责任公司西安710000

【目的】烟草特有亚硝胺(Tobacco-specific nitrosamines,简称TSNA)是烟叶中的主要致癌物质。本研究从筛选建立的特有菌库中发现了1株可有效降解TSNA的菌株AS97,并对其进行了鉴定及初步应用研究。【方法】采用富集驯化及选择培养基筛选... 详细信息

【目的】烟草特有亚硝胺(Tobacco-specific nitrosamines,简称TSNA)是烟叶中的主要致癌物质。本研究从筛选建立的特有菌库中发现了1株可有效降解TSNA的菌株AS97,并对其进行了鉴定及初步应用研究。【方法】采用富集驯化及选择培养基筛选得到硝酸盐与亚硝酸盐转化能力最强的菌株AS97;根据菌株的形态特征、生理生化特性及16S rRNA基因序列分析对其进行鉴定;并将AS97自制发酵液喷施于烟丝表面,确定适宜接种量和发酵条件,采用LC-MS/MS(液相色谱串联质谱)方法检测TSNA中四种主要成分的含量。【结果】菌株AS97源于云南玉溪烤烟样品表面,经分析确定其为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens,GenBank登录号:JF449445)。将AS97自制发酵液以5%的接种量喷施于烟丝,30℃(相对湿度是60%)条件下发酵10 d检测烟叶中硝酸盐、亚硝酸盐、TSNA、4-(N-甲基-亚硝基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)、N-亚硝基去甲基烟碱(NNN)、N-亚硝基新烟草碱(NAT)及N-亚硝基假木贼碱(NAB)的转化率分别达到68.77%、45.57%、45.47%、59.08%、38.79%、21.41%及11.76%。相关性分析结果表明烤烟中硝酸盐、亚硝酸盐与TSNA的含量均呈极显著相关(P>0.01),进一步证实硝酸盐与亚硝酸盐是TSNA的主要前体物质。【结论】醇化烟叶表面的荧光假单胞菌AS97能够显著降低TSNA的含量。本文首次报道了源于醇化烤烟表面对TSNA有良好转化能力的Pseudomonas fluorescens。可将其开发成新型微生物制剂,应用于低害卷烟制品的生产实践中。

关键词：醇化烟叶烟草特有亚硝胺(Tobacco-specific nitrosamines,简称TSNA) 菌株AS97 荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens) 筛选鉴定