检索结果-南通市图书馆

副猪嗜血杆菌OMP5基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国农业科学 2011年第14期44卷 3036-3044页

作者：陈善真李春玲贾爱卿王贵平广东省农业科学院兽医研究所广东现代农业集团研究院华南农业大学兽医学院

【目的】利用表达纯化的副猪嗜血杆菌(Haemophilus Parasuis,HPS)外膜蛋白P5(outer-membrane protein P5,OMP5),建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA检测方法。【方法】克隆扩增HPS OMP5基因,并将OMP5基因与原核表达载体pET-32a(+)连接... 详细信息

【目的】利用表达纯化的副猪嗜血杆菌(Haemophilus Parasuis,HPS)外膜蛋白P5(outer-membrane protein P5,OMP5),建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA检测方法。【方法】克隆扩增HPS OMP5基因,并将OMP5基因与原核表达载体pET-32a(+)连接,通过PCR、双酶切及测序鉴定后,将阳性重组质粒转化入受体菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。亲和层析法纯化蛋白,尿素梯度透析复性,Western blot鉴定表达产物。将超声破碎抗原和复性蛋白分别按不同浓度包被酶标板,通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其它条件进行优化,最终建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。【结果】利用克隆表达的HPS OMP5蛋白做抗原,通过方阵滴定法确定蛋白最佳包被浓度为1:400,血清的最佳稀释度为1:160。用建立的间接ELISA方法检测317份未进行HPS免疫的健康猪血清,结果检出72份阳性,检出率为22.71%,与广东地区发病猪中的HPS分离率24%接近。同时,用该方法与用超声破碎抗原建立的ELISA方法同时检测了78份血清样品,结果,该法检出27份阳性,检出率为34.62%,后者则检出31份阳性,检出率为39.74%,二者符合率为71.79%。【结论】本研究利用重组表达的OMP5蛋白作为抗原建立的检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法,特异性好、重复性好,检出率与HPS临床分离率接近,可用于副猪嗜血杆菌的临床检测、流行病学调查和免疫监控。

关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5 克隆表达间接ELISA

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中草药在养禽生产中的应用

兽医导刊 2008年第6期 41-43页

作者：陈善真刘祥国华南农业大学兽医学院兽医药理研究室广东广州510642

中国加入WTO后，畜禽产品的国际市场化步伐进一步加快，我国畜禽产品面临的国际市场的冲击和竞争也日趋严峻。发展绿色畜牧业，生产绿色、无公害食品已成为我国畜牧业生产面临的关键问题。因此，中兽药的作用愈加明显。其中一个主要应... 详细信息

中国加入WTO后，畜禽产品的国际市场化步伐进一步加快，我国畜禽产品面临的国际市场的冲击和竞争也日趋严峻。发展绿色畜牧业，生产绿色、无公害食品已成为我国畜牧业生产面临的关键问题。因此，中兽药的作用愈加明显。其中一个主要应用是作为饲料添加剂。中草药添加剂作为一种绿色添加剂，不仅可解决长期困扰畜牧业发展的抗生素残留问题，

关键词：中草药添加剂养禽生产应用中草药饲料添加剂滥用抗生素绿色畜牧业畜禽产品国际市场

罗非鱼无乳链球菌特异性IgM抗体ELISA检测方法的建立及对疫苗免疫效果的评估

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2016年第8期38卷 649-653页

作者：陈善真可小丽王志花王贵平卢迈新刘志刚杨洁李其昌广东海大畜牧兽医研究院广东广州511400 中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室广东广州510380

为建立检测罗非鱼无乳链球菌特异性抗体的方法及评价疫苗的免疫效果,本研究首先制备纯化罗非鱼无乳链球菌特异性IgM和兔抗罗非鱼无乳链球菌IgM的IgG,利用原核表达纯化的无乳链球菌ScpB蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立检测无乳... 详细信息

为建立检测罗非鱼无乳链球菌特异性抗体的方法及评价疫苗的免疫效果,本研究首先制备纯化罗非鱼无乳链球菌特异性IgM和兔抗罗非鱼无乳链球菌IgM的IgG,利用原核表达纯化的无乳链球菌ScpB蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立检测无乳链球菌特异性IgM抗体的ELISA方法,并通过比较测定无乳链球菌疫苗免疫后血清抗体水平变化与攻毒后相对免疫保护率的关系来评估该方法的有效性。结果表明:该方法仅能够特异性的检测罗非鱼的血清抗体,而与其它鱼类的血清抗体无交叉反应,特异性良好,其敏感性为1∶800,批内、批间变异系数均小于10%,具有较好的重复性,并且抗体水平的变化与相对免疫保护率(RPS)变化具有平行相关性,变化趋势基本一致。本研究首次建立了检测罗非鱼无乳链球菌特异性IgM抗体的ELISA方法,该方法可以作为评估无乳链球菌疫苗免疫效果的有效手段,也为罗非鱼无乳链球菌病的检测提供技术支撑。

关键词：罗非鱼无乳链球菌 IgM ScpB蛋白 ELISA

截短表达的TTSuV2 ORF1重组蛋白对猪血清的免疫学反应

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2015年第2期55卷 227-234页

作者：李中圣陈轶雯白挨泉陈善真王璐璐姚火春王贵平广东海大畜牧兽医研究院有限公司广东广州511400 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 佛山科学技术学院生命科学学院广东佛山528000

【目的】本文旨在了解猪细环病毒2(Torque teno sus virus 2,TTSu V2)病毒蛋白对猪血清的免疫学反应,明确TTSu V2 ORF1编码的氨基酸序列上特定片段的免疫原性,为TTSu V2的免疫学检测方法建立提供实验依据。【方法】以本实验室测序的TTSu... 详细信息

【目的】本文旨在了解猪细环病毒2(Torque teno sus virus 2,TTSu V2)病毒蛋白对猪血清的免疫学反应,明确TTSu V2 ORF1编码的氨基酸序列上特定片段的免疫原性,为TTSu V2的免疫学检测方法建立提供实验依据。【方法】以本实验室测序的TTSu V2毒株为研究对象,在大肠杆菌表达系统中克隆表达了TTSu V2ORF1基因上两相互重叠的基因片段,对表达产物进行纯化,分析了两重组蛋白(TTSu V2 ORF1a与TTSu V2ORF1ab)对猪血清抗体的免疫学反应。【结果】应用标签抗体进行Western Blotting分析的结果显示,重组TTSu V2 ORF1a与TTSu V2 ORF1ab蛋白成功表达。应用建立的ELISA方法对212份猪血清进行检测的结果表明,含有179个氨基酸的重组TTSu V2 ORF1a与含有416个氨基酸的重组TTSu V2 ORF1ab蛋白之间有显著的相关性,二者对猪血清的反应基本一致。采用猪血清进行Western Blotting分析的结果显示,血清抗体可特异性识别两重组蛋白。【讨论】TTSu V2 ORF1a与TTSu V2 ORF1ab相互重叠的179个氨基酸序列上(168-346)含有TTSu V2 ORF1关键的B细胞表位,重组蛋白TTSu V2 ORF1a适用于TTSu V2血清抗体免疫学检测。

关键词：猪细环病毒2 ORF1蛋白表达和纯化免疫学分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

田基黄的药理作用及其作用机理

兽医导刊 2009年第8期 41-42页

作者：宋敏吴海坤陈善真华南农业大学兽医学院广东广州510642

田基黄，又名地耳草，民间别名有小元宝草、雀舌草、七层塔等，为藤黄科金丝桃属植物地耳草（Hypericum ja-ponicum Thunb）的干燥全草。属一年生草本，野生于原野湿地，分布于华东、中南及西南，主产于四川、广东、广西、贵州、湖南、... 详细信息

田基黄，又名地耳草，民间别名有小元宝草、雀舌草、七层塔等，为藤黄科金丝桃属植物地耳草（Hypericum ja-ponicum Thunb）的干燥全草。属一年生草本，野生于原野湿地，分布于华东、中南及西南，主产于四川、广东、广西、贵州、湖南、江西、福建等地。味甘、性凉，归肝、胆、大肠经，具有清利温热，散瘀消肿之功效。现代药理研究表明，田基黄具有抑菌、抗肝损伤、抑制癌细胞、调节免疫功能、抗病毒、抗氧化、止血等多种药理功效。

关键词：药理作用机理金丝桃属植物药理功效一年生草本免疫功能肝损伤元宝草

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

罗非鱼无乳链球菌生物学特性与致病力研究

中国畜牧兽医 2013年第6期40卷 203-207页

作者：田珂贾爱卿陈善真李守军王贵平石和荣华南农业大学广东广州510642 广东现代农业集团研究院有限公司广东广州510630

本试验分离纯化1株致使罗非鱼具有链球菌发病症状的病原菌,药敏试验结果表明,该菌对氯霉素等10种药物敏感。PCR扩增该菌的cfb基因,将扩增片段测序后与GenBank上登录的罗非鱼无乳链球菌的cfb基因序列进行比对。同时对该病原菌的生物学特... 详细信息

本试验分离纯化1株致使罗非鱼具有链球菌发病症状的病原菌,药敏试验结果表明,该菌对氯霉素等10种药物敏感。PCR扩增该菌的cfb基因,将扩增片段测序后与GenBank上登录的罗非鱼无乳链球菌的cfb基因序列进行比对。同时对该病原菌的生物学特性进行研究,包括培养时间和pH对该菌生长的影响;培养温度对其致病力的影响;探讨了不同攻毒方式(腹腔、胸腔和背部肌肉注射)与鱼发病快慢的关系;并对不同规格(100和10g左右)的罗非鱼对该菌的易感性进行分析。试验结果表明,该病原菌为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae);该菌的最适培养时间为11.5h,最适培养pH为7.5;腹腔、胸腔和背部肌肉注射后,其发病时间几乎一致,但胸腔注射的试验鱼死亡速度最慢,背部肌肉注射是较安全可行的攻毒方式;33℃培养的无乳链球菌攻毒的罗非鱼发病最快,死亡最集中;100g的试验鱼比10g的试验鱼更易感染。

关键词：罗非鱼无乳链球菌药物敏感性生物学特性 PCR 致病力

新型维生素E类似物对南美白对虾生长性能、成分及生物学活性的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

饲料工业 2016年第20期37卷 12-16页

作者：刘博奇李其昌杨洁陈善真王志花陈克宏广东海大集团股份有限公司广东广州511400 广东海大畜牧兽医研究院广东广州511400

试验旨在探讨一种新型维生素E类似物（VE analogue,VEa）作为饲料添加剂取代传统维生素E（VE）后,对南美白对虾生长性能、虾体成分及生物学活性的影响。在基础虾料（不含VE）中分别添加不同剂量的VEa（40、80、160、200、250 IU/kg及300... 详细信息

试验旨在探讨一种新型维生素E类似物（VE analogue,VEa）作为饲料添加剂取代传统维生素E（VE）后,对南美白对虾生长性能、虾体成分及生物学活性的影响。在基础虾料（不含VE）中分别添加不同剂量的VEa（40、80、160、200、250 IU/kg及300 IU/kg）,并以基础虾料（不含VE）为负对照、商用虾料（基础饲料中添加VE200 IU/kg）为正对照。8组饲料等量投喂对应的8个试验对虾组[平均体重（0.62±0.03）g],每组3个重复（30尾/重复）,在循环水养殖池中养殖8周。结果表明：与常规VE200（＋）正对照比较,添加VEa160 IU/kg使对虾的平均饲料系数降低2.3%、成活率升高了1.1%,但差异不显著（P〉0.05）,6个VEa组虾肝胰指数均低于正对照组（P〉0.05）,各试验组对虾的肥满度、粗蛋白、粗脂肪含量无显著差异（P〉0.05）,可见添加VEa不会影响对虾生长;VEa各组对虾体内的铬元素含量普遍偏低（低34%~73%）,VEa160组的虾体内铁成分高出41.6%（P〈0.05）,VEa80组锰的含量高出35%,差异显著（P〈0.05）,各试验组对虾体内其它化学元素含量无显著变化;添加VEa80组（VE200组剂量的40%）使对虾血浆的酸性磷酸酶ACP活性显著增加（P〈0.05）,相反VEa250组和VEa300组（VE剂量的125%、150%）使血清ACP活性显著降低（P〈0.05）,VEa300组也使对虾血浆碱性磷酸酶（AKP）活性明显降低（P〈0.05）,而各组对虾肝胰腺酸性磷酸酶（ACP）活性差异不明显;VEa80、VEa160、VEa200三组使对虾肝胰腺的总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性显著递增（P〈0.05）,而VEa300组使T-SOD活性显著降低（P〈0.05）,各组对虾肝胰腺过氧化脂质降解产物（MDA）差异不明显（P〉0.05）。因此1VEa160 IU/kg可以取代常规VE 200 IU/kg,不但用量减少,而且使饲料系数有所降低、对虾成活率有所增加、体内铁含量明显增加41.6%;2VEa80 IU/kg（VE200组用量的40%）可明显增加生物酶活性;3高剂量添加（VEa250组、VEa300组）反而使酶活性降低。因此,VEa可以取代虾饲料中常规VE,合适用量为80~160 IU/kg。

关键词：新型维生素E类似物饲料添加剂南美白对虾生物学活性

含有Th细胞表位的合成PCV2 ORF2 Cap多肽抗原的表达及免疫原性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧兽医学报 2015年第12期46卷 2273-2281页

作者：陈善真赵焱李中圣罗均陈克宏王贵平李其昌广东海大畜牧兽医研究院有限公司广州511400

拟测定在PCV2ORF2Cap P1多肽抗原中添加从PCV2ORF1、ORF3中筛选的Th细胞表位多肽在促进其免疫原性中的作用,以及合成表达的PCV2ORF2Cap P1多肽抗原作为疫苗抗原的可行性。采用生物信息学及分子生物学方法,筛选获得1条泛宿主新型Th细胞... 详细信息

拟测定在PCV2ORF2Cap P1多肽抗原中添加从PCV2ORF1、ORF3中筛选的Th细胞表位多肽在促进其免疫原性中的作用,以及合成表达的PCV2ORF2Cap P1多肽抗原作为疫苗抗原的可行性。采用生物信息学及分子生物学方法,筛选获得1条泛宿主新型Th细胞表位多肽和3条PCV2特异的含有Th细胞抗原表位的多肽序列,然后将这4条Th细胞多肽氨基酸序列与筛选自ORF2Cap1上的1条B细胞表位多肽序列进行串联组合,密码子优化,插入酶切位点、终止密码子,然后进行密码子适应指数和分布频率分析,预测可以实现高效表达后再进行化学合成。合成的P1多肽抗原连接到pET-30a表达载体,并转化至BL21(DE3)pLysS感受态细胞中,构建表达工程菌BL21(DE3)pLysS-pET-30a-P1。经IPTG诱导表达后P1可实现高效表达,SDS-PAGE鉴定表达量,Western Blot鉴定其生物活性,然后分别免疫小鼠和猪,测定小鼠免疫后的抗体水平以及猪免疫后P1合成多肽抗原对外周血淋巴细胞的刺激增殖情况。结果表明,设计合成表达的PCV2P1多肽抗原序列,密码子适应性指数为0.89,能够实现高水平表达,目的片段大小约为28.29ku,具有良好的免疫原性;MTT试验结果表明,P1多肽抗原免疫后机体内IFN-γ和IL-4的表达量明显增加,且与对照组差异显著(P<0.05)。这说明P1能够诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应,为其作为疫苗用抗原的进一步研究奠定了理论基础。

关键词： PCV2 Th细胞表位多肽 Cap蛋白

副猪嗜血杆菌广东分离株外膜蛋白P5基因的克隆及蛋白结构预测

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2010年第2期30卷 206-210页

作者：陈善真王贵平曾振灵李春玲贾爱卿杨冬霞广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州510640 华南农业大学兽医学院广东广州510642

根据GenBank上发表的副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白基因的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,从广东省HPS分离株外膜蛋白P5基因中扩增出与预期设计的1116bp大小相符的片段,将扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析。结果表明,... 详细信息

根据GenBank上发表的副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白基因的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,从广东省HPS分离株外膜蛋白P5基因中扩增出与预期设计的1116bp大小相符的片段,将扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析。结果表明,克隆出HPS广东分离株的目的基因,核苷酸长为1116bp,共编码371个氨基酸,与已发表的HPS(SH0165)外膜蛋白基因核苷酸序列同源性100%,氨基酸同源性100%。生物学预测分析结果显示,HPS外膜蛋白是一种混合型结构蛋白,含有α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲,其β-转角和无规则卷曲区域可能形成抗原表位;其N端含有1个信号肽,最佳切割位点在21～22个氨基酸;有15个抗原决定簇;无跨膜区;同源建模分析,未见相似三维结构。

关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5基因基因克隆蛋白结构预测