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肝细胞脂质代谢相关蛋白的研究进展

中华肝脏病杂志 2005年第4期13卷 318-320页

作者：陈压西黄爱龙重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室400010

肝脏作为能量代谢的中枢器官,在脂类代谢中起着十分重要的作用.肝细胞内的脂质总是处于动态平衡状态.肝脏脂质代谢稳态的变化是构成各种形式脂肪肝的基础,而肝脏脂质代谢又是受许多相关蛋白的调控和影响.

关键词：肝细胞脂质代谢相关蛋白研究进展脂肪肝载脂蛋白血浆脂酶受体

肝星状细胞SCAP特异性敲除对小鼠肝纤维化的影响

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中国病理生理杂志 2022年第2期38卷 250-258页

作者：侯晓俐饶雨涵姚盈程苏玉李丹阳陈压西重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆市重点实验室脂质研究中心重庆400016

目的:探讨固醇调节元件结合蛋白裂解活化蛋白(SCAP)在肝星状细胞中缺失能否延缓小鼠肝纤维化进程。方法:将SCAP^(loxP/loxP)小鼠与Lrat-Cre工具鼠繁殖得到Lrat-Cre^(+/+)SCAP^(fl/fl)、Lrat-Cre^(+/−)SCAP^(fl/fl)和Lrat-Cre^(−/−)SCAP^(fl/fl)小鼠,并用PCR法对小鼠基因型进行鉴定。选取4~6周龄Lrat-Cre^(−/−)SCAP^(fl/fl)小鼠(雄性,n=8)作为对照(Con)组,Lrat-Cre+/+SCAP^(fl/fl)和Lrat-Cre^(+/−)SCAP^(fl/fl)小鼠(雄性,n=8)作为实验(SCAP^(−/−))组,均给予高脂饮食16周。称量小鼠肝重和体重,计算肝指数;检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏形态,油红O染色观察肝脏脂质积聚,天狼星红染色评估肝脏纤维化程度;RT-qPCR和Western blot检测小鼠肝组织中TGF-β/Smad信号通路相关mRNA及蛋白表达。结果:小鼠基因型鉴定结果与预期一致。提取两组小鼠原代肝星状细胞,RT-qPCR结果显示SCAP^(−/−)小鼠肝星状细胞中SCAP mRNA表达显著降低(P<0.01),免疫荧光染色显示SCAP^(−/−)小鼠肝星状细胞中SCAP不表达,表明SCAP^(−/−)小鼠模型建立成功。与Con组相比,高脂饮食喂养的SCAP^(−/−)组小鼠体重(P<0.01)和肝重(P<0.05)显著降低,但肝指数无显著差异;血清中TC水平显著降低(P<0.05),TG、AST和ALT水平无显著差异;HE及油红O染色结果显示小鼠肝脏脂肪变性和脂质积聚无显著差异;天狼星红染色显示肝脏纤维化程度减轻(P<0.05);Smad2(P<0.05)和Smad3(P<0.01)的mRNA表达显著降低;Smad2/3和p-Smad2/3蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:肝星状细胞中SCAP缺失可延缓小鼠肝纤维化发展的进程,并与TGF-β/Smad信号通路有关。

关键词：固醇调节元件结合蛋白裂解活化蛋白肝星状细胞肝纤维化 TGF-β/Smad信号通路

血管平滑肌SCAP过表达抑制自噬促进脂质积聚的机制研究

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陆军军医大学学报 2022年第9期44卷 891-897页

作者：饶雨涵李丹阳侯晓俐姚盈程苏玉陈压西阮雄中重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆市重点实验室脂质研究中心重庆400016

目的探讨固醇调节元件结合蛋白裂解活化蛋白(sterol regulatory element binding proteins cleavage activating protein,SCAP)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)泡沫化的影响及其分子机制。方法构建LV-SCAP与LV-Control血管平滑肌细胞系,免疫印迹法检测SCAP及其下游相关蛋白nSREBP2表达水平;油红O染色观察负荷LDL胆固醇后脂滴积聚,酶标仪检测细胞总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)水平;单丹磺酰尸胺(monodansyl cadaverine,MDC)染色检测自噬小泡聚集;Western blot检测自噬相关蛋白LC3b、P62与AMPK-mTOR通路表达;mTOR抑制剂雷帕霉素处理LV-SCAP过表达细胞株,Western blot与油红O染色验证处理后效果。结果与LV-Control组相比,LV-SCAP组nSREBP2表达明显上调(P<0.05),经LDL胆固醇负荷后产生的脂滴增多,TC、TG水平明显增高(P<0.05);LV-SCAP组细胞内自噬小泡聚集减少,自噬相关蛋白LC3b下调,P62上调,p-AMPK/AMPK水平降低,p-mTOR/mTOR水平升高(P<0.05)。Rapa处理结果显示LC3b表达增加,P62水平降低(P<0.05),油红O染色脂滴沉积减少(P<0.05)。结论SCAP可能通过影响AMPK-mTOR信号通路抑制血管平滑肌细胞的自噬过程,促进其泡沫化,进而参与血管动脉粥样硬化的发生发展。

关键词： SCAP 血管平滑肌细胞自噬 AMPK-mTOR信号通路

碱性磷酸酶直接标记核酸探针检测乙型肝炎病毒DNA

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中华肝脏病杂志 2002年第6期10卷 429-431页

作者：陈压西黄爱龙齐珍元单幼兰孙航重庆医科大学病毒性肝炎研究所 400010

目的建立快速、特异、灵敏的碱性磷酸酶直接(AlkPhos Direc)标记核酸探针检测血清中乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)方法。方法应用 AlkPhos DirecTM将碱性磷酸酶直接标记在HBV DNA全基因序列上制备探针,与目标核酸杂交后加入CDP-Star化学... 详细信息

目的建立快速、特异、灵敏的碱性磷酸酶直接(AlkPhos Direc)标记核酸探针检测血清中乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)方法。方法应用 AlkPhos DirecTM将碱性磷酸酶直接标记在HBV DNA全基因序列上制备探针,与目标核酸杂交后加入CDP-Star化学发光试剂,用胶片放射自显影检测HBV DNA。同时检测探针的灵敏度和特异性。比较AlkPhos Direc标记HBV DNA探针与地高辛标记的HBV DNA探针检测临床血清标本80份结果,并对70份临床血清标本的荧光定量PCR方法检测的结果与AlkPhos Direc标记HBV DNA探针斑点杂交检测的结果作相关性分析。结果探针灵敏度至少为10pg,与地高辛探针比较,用AlkPhos Direct标记探针检测方法的灵敏度为100％,特异性为100％,符台率为100％,用HBV DNA荧光定量PCR方法和AlkPhos Direct标记探针核酸斑点定量方法检测的结果进行相关性比较,r=0.98,P<0.01。结论 AlkPhos Direc标记 HBVDNA探针检测血清中HBV DNA方法灵敏、特异,与地高辛标记的HBV DNA探针检测结果完全符合,与HBVDNA荧光定量PCR方法硷侧的结果有良好的相关性。

关键词：碱性磷酸酶核酸探针检测乙型肝炎病毒 DNA 荧光定量PCR法

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参灵益肝颗粒抗乙型肝炎病毒作用的实验研究

中国中西医结合杂志 2007年第3期27卷 244-246页

作者：张洪泉葛慧李心武玉清陈压西扬州大学医药研究所江苏225001 重庆医科大学肝炎病研究所

目的研究参灵益肝颗粒体内抗乙型肝炎病毒的作用。方法采用重庆麻鸭乙型肝炎动物模型,随机分为参灵益肝颗粒(简称参灵益肝)1．6 g/kg、3．2 g/kg、6．4 g/kg 3个剂量组,拉米夫定(阳性药)组及病毒对照组。检测血清中的DHBV-DNA、DHBsAg... 详细信息

目的研究参灵益肝颗粒体内抗乙型肝炎病毒的作用。方法采用重庆麻鸭乙型肝炎动物模型,随机分为参灵益肝颗粒(简称参灵益肝)1．6 g/kg、3．2 g/kg、6．4 g/kg 3个剂量组,拉米夫定(阳性药)组及病毒对照组。检测血清中的DHBV-DNA、DHBsAg的变化情况及观察肝脏病理改变情况。结果参灵益肝3个剂量组及阳性药组用药21天后血清中的DHBV-DNA显著降低(P＜0．05或P＜0．01),停药7天后阳性药组及参灵益肝小、大剂组出现反跳。参灵益肝3个剂量组血清中DHBsAg均无明显降低。镜下观察各组鸭肝脏的病理改变较轻,参灵益肝3个剂量组与阳性药组差异无显著性(P＞0．05)。结论参灵益肝颗粒在鸭体内有一定的抑制鸭乙型肝炎病毒DNA的作用。

关键词：参灵益肝颗粒鸭乙型肝炎病毒拉米夫定

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抗乙型肝炎病毒药物筛选模型的研究及评价

重庆医科大学学报 1994年第2期19卷 165-168页

作者：陈压西重庆医科大学

抗乙型肝炎病毒药物筛选模型的研究及评价病毒性肝炎研究所陈压西综述郭树华审校中图分类号Ｒ５１２·６目前常用的抗乙肝病毒药物筛选的体内和体外实验模型，前者主要有鸭乙型肝炎动物模型、转基因小鼠等；后者主要为细胞培养系统，常... 详细信息

抗乙型肝炎病毒药物筛选模型的研究及评价病毒性肝炎研究所陈压西综述郭树华审校中图分类号Ｒ５１２·６目前常用的抗乙肝病毒药物筛选的体内和体外实验模型，前者主要有鸭乙型肝炎动物模型、转基因小鼠等；后者主要为细胞培养系统，常用的有原代鸭肝细胞培养、ＨＢＶＤＮ...

关键词：乙型肝炎抗病毒药药物筛选

SM22启动SCAP真核表达质粒的构建及其在CHO细胞中的表达

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生物工程学报 2010年第1期26卷 114-120页

作者：王媛媛胡接力崔静黄爱龙阮雄中陈压西重庆医科大学附属第二医院教育部感染性疾病分子生物学重点实验室脂质研究中心重庆400016 Center for Nephrology Royal Free and University College Medical SchoolUniversity College LondonRoyal Free CampusLondonUK

为建立平滑肌特异的固醇调节元件结合蛋白(SREBP)的裂解激活蛋白(SCAP)超表达的转基因小鼠,深入探讨SCAP的功能,本实验构建了由平滑肌特异蛋白SM22启动子(pSM22)启动仓鼠SCAP443位点突变体——SCAP(D443N)的真核表达质粒,并在仓鼠卵巢细... 详细信息

为建立平滑肌特异的固醇调节元件结合蛋白(SREBP)的裂解激活蛋白(SCAP)超表达的转基因小鼠,深入探讨SCAP的功能,本实验构建了由平滑肌特异蛋白SM22启动子(pSM22)启动仓鼠SCAP443位点突变体——SCAP(D443N)的真核表达质粒,并在仓鼠卵巢细胞(CHO)验证其表达。利用巢式PCR从小鼠肝脏组织提取的基因组中扩增得到pSM22基因。先将其插入pMD-T载体,构建T-SM22,对pSM22测序后,通过双酶切将pSM22克隆到pGL3-control-Luc中,成为pGL3-SM22-Luc。转染pGL3-SM22-Luc到血管平滑肌(VSMCs)中,通过检测荧光素酶(Luc)值观察pSM22在VSMCs内的启动活性。利用PCR从pTK-HSV-SCAP(D443N)质粒中扩增出SCAP(D443N)后克隆入pGL3-control中,成为pGL3-SCAP。然后再将pSM22克隆入pGL3-SCAP中,成为表达质粒pGL3-SM22-SCAP(D443N)。转染表达质粒到CHO细胞,用real-timePCR和Western blotting验证SCAP(D443N)的表达。结果证实pSM22在体外VSMCs中能启动Luc的表达;表达质粒pGL3-SM22-SCAP(D443N)酶切及测序结果正确;将其转染到CHO细胞后,与转染pGL3-control的对照细胞相比SCAP(D443)mRNA和蛋白表达显著增强。

关键词： SM22 启动子 SREBP裂解激活蛋白质粒构建基因表达转染

代谢性炎症与非酒精性脂肪性肝病的发生与发展

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中华消化杂志 2020年第9期40卷 581-584页

作者：阮雄中陈压西重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆医科大学脂质研究中心重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆市重点实验室400016

代谢性炎症在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生与发展过程中扮演了极其重要的角色。现重点论述肝脏炎症的产生,以及炎症应激下肝细胞内脂质稳态失衡、脂质发生"二次异常转运",过多的脂质又通过内质网应激、氧化应激等发挥脂毒性作用,加... 详细信息

代谢性炎症在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生与发展过程中扮演了极其重要的角色。现重点论述肝脏炎症的产生,以及炎症应激下肝细胞内脂质稳态失衡、脂质发生"二次异常转运",过多的脂质又通过内质网应激、氧化应激等发挥脂毒性作用,加重和放大肝脏的炎症效应,从而导致NAFLD由单纯性肝脂肪变性向脂肪性肝炎演变的病理生理过程,旨在为临床深入了解NAFLD的发病机制和发现新的治疗靶点提供理论依据。

关键词：脂肪肝代谢性炎症脂质重分布脂质稳态

高脂饮食致C57BL/6J小鼠脂肪组织中胰岛素受体底物蛋白1异常磷酸化的分子机制

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重庆医科大学学报 2013年第4期38卷 350-355页

作者：吴瑜赵蕾李青阮雄中陈压西重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆市重点实验室、脂质研究中心重庆400016

目的:通过体内实验探讨高脂饮食(high fat diet,HFD)是否通过干扰哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target ofrapamycin,mTOR)/核糖体蛋白S6激酶(p70 S6 kinase,S6K)信号通路致C57BL/6J小鼠脂肪组织中胰岛素受体底物蛋白1(insulin receptor substrate protein1,IRS1)异常磷酸化。方法:8周龄的雄性C57BL/6J小鼠随机分为普通饮食(chow diet,CD)组、HFD组、HFD+溶媒(vehicle,Veh)组(HFD+Veh)及HFD+雷帕霉素(rapamycin,rapa)组(HFD+rapa),处理14周。ELISA、酶法分别测定血清及组织游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)、甘油三酯(triglyceride,TG)含量。葡萄糖耐量及胰岛素耐量实验用于分析机体胰岛素敏感性,判断是否存在胰岛素抵抗。Western blot技术检测胰岛素信号通路及mTOR/S6K信号通路相关蛋白表达水平。结果:HFD喂养14周后,小鼠体质量(CD组vs.HFD组:t=-4.370,P=0.007)及脂肪体质量比(CD组vs.HFD组:t=-4.441,P=0.004)明显增加,血清和脂肪组织中TG、FFA水平均明显升高(CD组vs.HFD组血清FFA:t=-3.849,P=0.005血清TG:t=-2.768,P=0.039;脂肪组织FFA:t=-6.501,P=0.001;脂肪组织TG:t=-2.838,P=0.03)。与CD组相比,HFD组小鼠脂肪组织中炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein1,MCP1)蛋白表达明显上调(Western blot定量结果:TNF-α/actin:t=-19.261,P=0.000;MCP1/actin:t=-52.345,P=0.000)。葡萄糖耐量和胰岛素耐量实验显示:HFD组小鼠空腹及葡萄糖负荷30、60、120 min时的血糖水平明显高于CD组(F=17.581,P=0.009);注射胰岛素后血糖水平都有所下降,但HFD组仍较CD组高(F=49.441,P=0.002)。小鼠脂肪组织中胰岛素信号通路及mTOR/S6K信号通路相关蛋白表达结果显示:HFD可增强mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化S6K(p-S6K)和丝氨酸(serine,Ser)磷酸化的IRS1[p-IRS1(Ser)]蛋白的表达,而降低总IRS1以及酪氨酸(tyrosine,Tyr)磷酸化的IRS1[p-IRS1(Tyr)]水平[Western blot定量结果CD组vs.HFD组:①IRS1/actin:t=28.460,P=0.000;②p-IRS1(Tyr632)/actin:t=30.343,P=0.000;③p-IRS1(Ser270)/actin:t=-16.473,P=0.000;④mTOR/actin:t=-5.067,P=0.007;⑤p-mTOR/actin:t=-13.525,P=0.000;⑥p-S6K/actin:t=-28.701,P=0.000]。Rapa作为mTOR信号通路特异性抑制剂,能明显抑制HFD诱导的p-S6K及p-IRS1(Ser)蛋白表达,并增加IRS1及p-IRS1(Tyr)蛋白水平[HFD+Veh组vs.HFD+rapa组:①IRS1/actin:t=-10.513,P=0.000;②p-IRS1(Tyr632)/actin:t=-19.879,P=0.000;③p-IRS1(Ser270)/actin:t=4.652,P=0.010;④p-mTOR/actin:t=19.306,P=0.000;⑤p-S6K/actin:t=9.393,P=0.001]。结论:HFD状态下,mTOR/S6K信号通路的异常激活可能是导致C57BL/6J小鼠脂肪组织中IRS1异常磷酸化的原因。

关键词：高脂饮食脂肪组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白核糖体蛋白S6激酶胰岛素抵抗