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不透明红球菌生产谷氨酸氧化酶发酵过程优化

过程工程学报 2017年第4期17卷 814-820页

作者：刘佳徐继嗣罗秋玲陈修来刘立明江南大学食品科学与技术国家重点实验室工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 张家港市华天制药有限公司江苏张家港215633

优化了用不透明红球菌FMME1-41所产谷氨酸氧化酶(LGOX)转化L-谷氨酸产α-酮戊二酸(α-KG)的工艺条件.结果表明,最佳发酵培养基为酵母粉6 g/L,大豆蛋白胨2 g/L,(NH_4)_2SO_4 0.8 g/L,葡萄糖25 g/L,KH_2PO_4 3 g/L,MgSO_4 0.6 g/L,MnSO_4 ... 详细信息

优化了用不透明红球菌FMME1-41所产谷氨酸氧化酶(LGOX)转化L-谷氨酸产α-酮戊二酸(α-KG)的工艺条件.结果表明,最佳发酵培养基为酵母粉6 g/L,大豆蛋白胨2 g/L,(NH_4)_2SO_4 0.8 g/L,葡萄糖25 g/L,KH_2PO_4 3 g/L,MgSO_4 0.6 g/L,MnSO_4 0.3g/L,L-谷氨酸2.5 g/L,在其中发酵30 h,LGOX酶活达6.12 U/mL;在7.5 L发酵罐中优化发酵放大和补料策略,发酵40 h后LGOX酶活达21.5 U/mL;在2 L发酵罐中转化L-谷氨酸生产α-KG,产量达92.0 g/L,摩尔转化率为92.6%,生产强度为9.2 g/(L·h).

关键词： L-谷氨酸氧化酶不透明红球菌 α-酮戊二酸酶法优化

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“欲扬先抑”话写作

同学少年 2015年第8期 12-13页

作者：陈修来

许多同学在写作时,特别是写记叙类作文时,叙事总是过于平淡。其实,只要变换写作方法,运用一些写作技巧,同样的内容可能会达到不同的效果。"欲扬先抑"就是一沖很不错的方法,如能巧妙运用,必会使作文增色不少。

关键词：欲扬先抑范爱农

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调控辅因子水平减少酿酒酵母积累副产物乙醇

食品与发酵工业 2014年第10期40卷 6-10页

作者：徐国强陈修来吴满珍江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室江苏无锡214122 江南大学食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122 江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122

C4二元羧酸广泛用于食品、医药和化学等行业,市场潜在需求量巨大。酿酒酵母被认为是发酵生产C4二元羧酸的潜在最适微生物,却产生大量的乙醇,导致了碳流的损失。通过敲除硫胺素合成途径中的调控基因THI2,阻断了硫胺素的合成,使得副产物... 详细信息

C4二元羧酸广泛用于食品、医药和化学等行业,市场潜在需求量巨大。酿酒酵母被认为是发酵生产C4二元羧酸的潜在最适微生物,却产生大量的乙醇,导致了碳流的损失。通过敲除硫胺素合成途径中的调控基因THI2,阻断了硫胺素的合成,使得副产物乙醇产量从5.27±0.23 g/L下降到0.53±0.12 g/L,但影响了葡萄糖消耗和菌体的生长。在此基础上,通过外源添加0.04μmol/L的硫胺素二磷酸,促进了葡萄糖的消耗和菌体生长;进一步通过外源添加1 000μg/L的NAD+,使得葡萄糖的消耗量和菌体的生长分别提高了48.6%和47.2%,而乙醇产量仅增加了0.56 g/L。通过调控辅因子水平(硫胺素和NAD+)可以有效减少副产物乙醇的积累,为解决利用酿酒酵母生产C4二元羧酸中副产物乙醇积累这一普遍性问题提供了一个新的策略。

关键词： C4二元羧酸乙醇辅因子调控酿酒酵母发酵

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代谢工程改造大肠杆菌生产琥珀酸

化工进展 2022年第2期41卷 938-950页

作者：唐文秀王学明郭亮季立豪高聪陈修来刘立明江南大学食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122 江南大学国际食品安全联合实验室江苏无锡214122

琥珀酸(succinic acid)是一种四碳二羧酸,在食品、医药、塑料和化工行业具有广泛的应用。目前,微生物法生产琥珀酸存在得率低、生产强度低、副产物积累等问题。为此,本研究通过复合诱变(ARTP和^(60)Co-γ射线)筛选到一株耐高渗突变株FMM... 详细信息

琥珀酸(succinic acid)是一种四碳二羧酸,在食品、医药、塑料和化工行业具有广泛的应用。目前,微生物法生产琥珀酸存在得率低、生产强度低、副产物积累等问题。为此,本研究通过复合诱变(ARTP和^(60)Co-γ射线)筛选到一株耐高渗突变株FMME-N-2,其琥珀酸得率为0.70g/g葡萄糖,同时积累18.8g/L乳酸、7.6g/L甲酸和17.3g/L乙酸。为了提高琥珀酸得率,通过敲除乳酸脱氢酶基因(ldhA)、丙酮酸-甲酸裂解酶-甲酸转运蛋白基因(pflB-focA)、磷酸转乙酰基基因(pta)、丙酸激酶基因(tdcD)和a-酮丁酸甲酸酯裂解酶基因(tdcE),阻断冗余代谢支路减少副产物积累,获得工程菌株FMME-N-13,琥珀酸得率增加到0.92g/g葡萄糖,同时副产物大大降低,积累0.6g/L乳酸、3.6g/L甲酸和12.3g/L乙酸。同时,通过调控RBS强度组合优化来自产琥珀酸放线杆菌的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因(AsPCK)和来自博伊丁假丝酵母的甲酸脱氢酶基因(CbFDH)的表达水平,调控胞内ATP和NADH的浓度,最优工程菌FMME-N-26(FMME-N-13-L-AsPCK-L-CbFDH)的琥珀酸得率增加至1.04g/g葡萄糖,仅积累5.5g/L乙酸;最终,对厌氧阶段葡萄糖浓度进行优化,当葡萄糖浓度控制在0~5g/L时,菌株FMME-N-26的琥珀酸浓度增加到111.9g/L,得率为1.11g/g葡萄糖(理论产率的99%),生产强度为1.76g/L/h,为琥珀酸的工业化生产奠定了良好的基础。

关键词：琥珀酸大肠杆菌复合诱变副产物辅因子循环发酵优化

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细节描写作用漫谈

语文教学之友 2011年第12期30卷 35-36页

作者：陈修来高邮市龙虬初中

细节描写是刻画人物性格，揭示人物内心世界，表现人物细微复杂感情，点化人物关系，暗示人物身份、处境等最重要的方法。一篇文章，恰当地运用细节描写，能起到烘托环境气氛、刻画人物性格和揭示主题思想等作用。我们在很多的文章中可... 详细信息

细节描写是刻画人物性格，揭示人物内心世界，表现人物细微复杂感情，点化人物关系，暗示人物身份、处境等最重要的方法。一篇文章，恰当地运用细节描写，能起到烘托环境气氛、刻画人物性格和揭示主题思想等作用。我们在很多的文章中可欣赏到细节描写的精巧运用，我想从以下几个方面来体会其具体作用。

关键词：写作人物性格细节描写人物内心世界人物关系人物身份环境气氛主题思想

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生物酶法合成L-精氨酸衍生物的研究进展

生物工程学报 2018年第2期34卷 165-176页

作者：孙安然宋伟刘佳罗秋玲陈修来刘立明江南大学食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122 江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学食品微生物制造工程实验室江苏无锡214122

L-精氨酸是一种碱性氨基酸,具有多样化的官能团,是合成多种有用化合物的前体,其衍生物广泛应用于医疗、食品和化妆品等领域。L-精氨酸衍生物的合成方法有化学法、发酵法和酶法。在当前绿色经济和可持续发展的背景下,对比各种生产方法,... 详细信息

L-精氨酸是一种碱性氨基酸,具有多样化的官能团,是合成多种有用化合物的前体,其衍生物广泛应用于医疗、食品和化妆品等领域。L-精氨酸衍生物的合成方法有化学法、发酵法和酶法。在当前绿色经济和可持续发展的背景下,对比各种生产方法,生物酶法合成L-精氨酸衍生物具有明显优势。因此本文重点介绍了L-精氨酸衍生化的典型产品和合成技术,并介绍了生物酶法合成L-精氨酸衍生物未来可能的发展方向。

关键词：生物酶法 L-精氨酸衍生化反应鸟氨酸瓜氨酸胍基丁胺

光滑球拟酵母中AMP代谢对其生理功能的影响

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微生物学报 2016年第7期56卷 1113-1122页

作者：靳丛丛陈修来陈瑞东刘立明江南大学食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122 江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122

【目的】研究光滑球拟酵母(Candida glabrata)中AMP代谢影响其碳流代谢和耐酸胁迫的生理机制。【方法】同源重组法敲除基因cgade12(ORF CAGL0K05027g)和cgade13(ORF CAGL0B02794g)构建双缺菌株cgade12Δade13Δ,与出发菌株(ATCC55)比较ATP水平、碳流代谢酶活性和中间代谢物含量变化分析和AMP代谢对其碳流代谢的影响,对比菌株有机酸胁迫下生长情况及胞内环境变化,研究AMP代谢变化对光滑球拟酵母酸胁迫耐受性的影响。【结果】与出发菌株ATCC55相比,cgade12Δade13Δ的ATP水平下降了12.50%。与ATCC55相比,cgade12Δade13Δ中柠檬酸合成酶、苹果酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶的活性分别上升了31.26%、19.45%、28.96%、18.36%,柠檬酸、α-酮戊二酸、苹果酸、琥珀酸含量分别提高了44.11%、73.60%、50.00%、65.68%。胞内丙酮酸浓度下降20.00%,丙酮酸产量下降73.11%。与ATCC55相比,cgade12Δade13Δ在0.4%丙酮酸、0.6%苹果酸和0.2%乙酸胁迫下的菌体浓度分别提高了8.71%、11.21%和12.71%。在0.2%乙酸胁迫下,菌株cgade12Δade13Δ的H^+-ATPase活性、细胞膜完整度、细胞膜电势分别比出发菌株ATCC55上升了7.04%、8.71%、25.14%,ROS水平下降了19.51%。【结论】基因cgade12、cgade13的缺失导致菌株的ATP水平下降,TCA循环活性和有机酸耐受性上升。

关键词：光滑球拟酵母 AMP代谢碳流代谢耐酸性

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水稻DH群体苗期耐低氮能力QTL定位分析

江苏农业科学 2010年第3期38卷 42-43页

作者：郑修文张文会赵志超陈修来张博聊城大学生命科学学院山东聊城252059 中国农业科学院作物科学研究所北京100081

利用云南元江普通野生稻与优良籼稻品种"特青"构建的DH群体的139个家系,采用单标记分析法对DH群体中与耐低氮能力相关的QTL进行分析。以株高、鲜重和干重的平均抑制率作为指标,检测到7个与耐低氮相关的QTL,分别位于第4、5、7、10染色体... 详细信息

利用云南元江普通野生稻与优良籼稻品种"特青"构建的DH群体的139个家系,采用单标记分析法对DH群体中与耐低氮能力相关的QTL进行分析。以株高、鲜重和干重的平均抑制率作为指标,检测到7个与耐低氮相关的QTL,分别位于第4、5、7、10染色体上,在"特青"中定位到1个耐低氮QTL,在野生稻中定位到6个耐低氮QTL。其中,位于第4染色体RM307、RM335和RM303,第5染色体RM440,以及第7染色体RM481和RM172附近的QTL位点,来源于野生稻的等位基因表现为耐低氮胁迫;位于第10染色体RM222附近的QTL位点,来源于栽培稻"特青"的等位基因表现为耐低氮胁迫。检测到的QTL的贡献率均较小,没有定位到主效QTL。

关键词：水稻 DH群体耐低氮 QTL

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细胞寿命在大肠杆菌细胞工厂构建中的应用

生物工程学报 2021年第4期37卷 1277-1286页

作者：刘佳郭亮罗秋玲陈修来高聪宋伟刘立明江南大学食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122 江南大学药学院江苏无锡214122

微生物细胞工厂以可再生资源为原料,为工业化学品的可持续生产提供了一种有前景的替代方案。然而,不适的外界环境显著影响了微生物细胞的存活率,降低了微生物细胞工厂的生产性能。通过延长微生物细胞的时序寿命,可以显著提升微生物细胞... 详细信息

微生物细胞工厂以可再生资源为原料,为工业化学品的可持续生产提供了一种有前景的替代方案。然而,不适的外界环境显著影响了微生物细胞的存活率,降低了微生物细胞工厂的生产性能。通过延长微生物细胞的时序寿命,可以显著提升微生物细胞工厂的生产性能。首先,基于存活率的变化建立了细胞时序寿命和半时序寿命的评价体系;然后,发现半胱氨酸、肌肽、氨基胍和氨基葡萄糖抗衰老药物可以使大肠杆菌Escherichiacoli细胞的时序寿命分别延长80%、80%、50%和120%;最后,延长***时序寿命可以显著改善***细胞工厂的生产性能,可以用于改善具有本源代谢合成路径的***细胞工厂的生产性能,使乳酸和丙酮酸的得率分别提升30.0%和25.0%,也可以用于改善具有异源代谢合成路径的E. coli细胞工厂的生产性能,使苹果酸的得率提升27.0%。这些研究结果表明延长E. coli细胞寿命提供了一种潜在的改善细胞工厂的生产性能的方法。

关键词：大肠杆菌微生物细胞工厂时序寿命抗衰老药物