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作者：陈之忍西北农林科技大学

学位级别：硕士

小麦是世界上重要的粮食作物之一,其产量的提高对解决当今日益严重的粮食短缺问题起着至关重要的作用。细胞色素P450是植物中最大的蛋白家族之一,其中CYP78A是其重要成员之一,许多CYP78A亚家族成员已被鉴定出在种子生长发育过程中起着... 详细信息

小麦是世界上重要的粮食作物之一,其产量的提高对解决当今日益严重的粮食短缺问题起着至关重要的作用。细胞色素P450是植物中最大的蛋白家族之一,其中CYP78A是其重要成员之一,许多CYP78A亚家族成员已被鉴定出在种子生长发育过程中起着调节作用。本课题组通过同源克隆的方法分离得到TaCYP78A3和TaCYP78A5,并通过拟南芥的过表达和小麦BSMV-VIGS(大麦条斑花叶病毒诱导的基因沉默)证实其与籽粒大小有关。为进一步研究TaCYP78A5基因的功能,本研究开展了以下研究:(1)TaCYP78A5的原核表达和蛋白纯化利用生物信息学预测分析了TaCYP78A5氨基酸序列的结构及基本理化性质,分析结果显示该蛋白无信号肽,具有一个跨膜结构,是亲水蛋白。TaCYP78A5蛋白分子量为55.805 kD,理论pI值是8.32,共含有510个氨基酸,属于不稳定蛋白。去掉跨膜结构的截短体TaCYP78A5蛋白和截短体融合蛋白GST-TaCYP78A5的蛋白分子量分别为51.973 kD和80.385 kD,理论pI值分别为8.71和7.00。以植物表达载体pCAMBIA3301-TaCYP78A5为模板扩增得到不含N端跨膜结构的TaCYP78A5基因,连接原核表达载体pGEX-6-p-1构建了重组质粒pGEX-6p1-A5,转入表达菌株*** BL21(DE3)pLysS进行诱导表达。GST-TaCYP78A5融合蛋白以包涵体的形式表达,对包涵体蛋白经过洗涤、复性后用Prescission Protease酶切去除GST标签,切胶纯化回收得到高纯度目的蛋白,然而免疫兔子后未能得到抗体。(2)TaCYP78A5遗传转化及转基因小麦后代鉴定分析利用含植物表达载体pCAMBIA3301-35S-TaCYP78A5的农杆菌EHA105转化小麦绵阳19愈伤组织,经PPT筛选和PCR鉴定,获得1株阳性植株,移栽温室后未能存活。以济南邦迪生物科技有限公司提供的pINO::TaCYP78A5基因过表达的T0代转基因小麦为材料,对其进行Bar试纸条检测、PCR鉴定和外源目标基因拷贝数检测,并对转基因植株筛选最适Basta涂抹浓度进行了摸索;同时还对T1代株系中外源目标基因的分离比及阳性株系籽粒大小变化进行了统计。结果显示,21株T0代再生苗中共有14株阳性植株,其中有6株为单拷贝,5株为2个拷贝,2株为3个拷贝,1株为7个拷贝;6个单拷贝株系外源基因遗传分离比结果显示只有有3个株系符合3:1的分离比;Basta叶片涂抹结果显示,浓度200 mg/L的Basta溶液可有效地筛选出含Bar基因的阳性转基因植株;与野生型相比,7个T1代阳性植株的种子在粒宽、粒厚均有不同程度的增加,有2个植株粒长有所减小,但所有植株粒重均极显著增加,达到107%。

关键词：小麦 TaCYP78A5 Bar 原核表达遗传转化转基因株系

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TaCYP78A5基因过表达小麦的遗传和功能初步分析

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麦类作物学报 2017年第6期37卷 721-729页

作者：陈之忍马猛申玉霞吴林楠刘香利赵惠贤西北农林科技大学生命科学学院陕西杨陵712100 西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室陕西杨陵712100

为了验证小麦籽粒大小相关基因TaCYP78A5在小麦籽粒发育中的功能,对pINO启动子驱动的TaCYP78A5基因过表达的转基因小麦后代株系进行了鉴定,检测了T_0代植株目标基因拷贝数,定量分析了7个T_1代阳性植株的目标基因表达,并对其籽粒大小进... 详细信息

为了验证小麦籽粒大小相关基因TaCYP78A5在小麦籽粒发育中的功能,对pINO启动子驱动的TaCYP78A5基因过表达的转基因小麦后代株系进行了鉴定,检测了T_0代植株目标基因拷贝数,定量分析了7个T_1代阳性植株的目标基因表达,并对其籽粒大小进行了统计。结果表明,利用Bar试纸条和目标基因特异PCR检测相结合的方法对21株转基因T_0代再生苗进行检测,共鉴定出14个阳性植株,除2个植株的目标基因拷贝数为3和1个植株为7外,其余11个T_0代转基因植株目标基因插入拷贝数均为1~2个,其中有6个单拷贝植株。与野生型相比,7个T_1代阳性植株目标基因表达量均极显著增加,粒厚和粒宽均有不同程度增加,粒重极显著增加。

关键词：小麦 TaCYP78A5基因 Bar基因转基因株系

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基于地下结构整体损伤表征的复合地震动参数构造及其性能验证

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土木工程学报 2024年第4期57卷 23-33页

作者：陈之毅余伟刘志谦同济大学上海200082

在地下结构抗震设计中,不同的输入地震动引起的地下结构响应有显著差异,因此,合理通过地震动参数选择输入地震动是正确开展地下结构抗震设计的重要前提。针对单一地震动参数难以表征地下结构地震动潜在破坏势问题,文章构造了能更好表征... 详细信息

在地下结构抗震设计中,不同的输入地震动引起的地下结构响应有显著差异,因此,合理通过地震动参数选择输入地震动是正确开展地下结构抗震设计的重要前提。针对单一地震动参数难以表征地下结构地震动潜在破坏势问题,文章构造了能更好表征地下结构损伤破坏的复合地震动参数。具体开展了以下工作:提出基于变形与滞回耗能的地下结构整体损伤指标作为结构需求参数,以定量化评估地下结构的整体破坏状态。选取64条真实地震动记录作为输入地震动,开展四层三跨地铁车站地震弹塑性动力时程分析。基于分析结果提供的数据样本,采用偏最小二乘法从统计角度构造复合地震动参数。最后,选用100条真实地震动记录开展两层三跨地铁车站弹塑性动力时程分析,对文章所构造的复合地震动参数进行验证。对比分析复合地震动参数、12个常用地震动参数与地下结构整体损伤指数的回归统计特征。结果表明:复合地震动参数与结构需求数之间具有更好拟合优度值,其Pearson相关性、有效性也优于单一地震动参数。

关键词：地下结构复合地震动参数整体损伤指数弹塑性动力时程分析偏最小二乘回归分析

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UHPC增强短搭接RC构件承载力可靠度分析与加固建议

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防灾减灾工程学报 2024年第3期44卷 605-615页

作者：马高马忍湖南大学土木工程学院湖南长沙410082 工程结构损伤诊断湖南省重点实验室(湖南大学) 湖南长沙410082

基于可靠度研究超高性能混凝土(Ultra‐High Performance Concrete,UHPC)增强钢筋短搭接RC构件的失效模式与承载力特征。首先阐述了UHPC加固机理,建立了包含活恒荷载效应比、搭接系数m、UHPC强度、混凝土强度、钢筋型号、考虑水平地震... 详细信息

基于可靠度研究超高性能混凝土(Ultra‐High Performance Concrete,UHPC)增强钢筋短搭接RC构件的失效模式与承载力特征。首先阐述了UHPC加固机理,建立了包含活恒荷载效应比、搭接系数m、UHPC强度、混凝土强度、钢筋型号、考虑水平地震作用的弯矩效应比和轴力效应比等关键参数的设计空间;确立分析RC构件承载力可靠度的功能函数,运用Monte Carlo法对设计空间中的关键参数组进行可靠指标计算,然后进行关键参数敏感性分析和计算结果拟合分区。结果表明:设计空间关键参数中,搭接系数、效应比、配筋率、钢筋型号和UHPC强度对可靠指标的影响均显著;UHPC不仅具有良好的承载力增强能力,还能改变失效模式,梁和柱屈服时可靠指标分别提高109.6%和12.9%,屈服时搭接系数分别为0.58和0.57;对于受弯RC梁(压弯柱),m>0.67(0.65)时,钢筋基本能屈服,建议采用UHPC加固;0.50(0.49)

关键词：短搭接 UHPC加固可靠度 Monte Carlo法承载力

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激励机制在少儿足球教学中的应用研究 ——以江苏福特宝WQK足球俱乐部9-11岁学员为例

激励机制在少儿足球教学中的应用研究 ——以江苏福特宝WQK足球俱...

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作者：郑陈之玥南京体育学院

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