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CG8005在果蝇睾丸生殖干细胞微环境中介导氧化应激的功能和机制探讨

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CG8005在果蝇睾丸生殖干细胞微环境中介导氧化应激的功能和机制探...

作者：陈万银江苏大学

学位级别：硕士

研究目的:果蝇睾丸生殖干细胞（germline stem cells,GSCs）作为精子产生的源泉,其自我更新和分化过程受到干细胞微环境内在许多因子的严格调控,对于男性不育及生殖细胞肿瘤的发生至关重要。活性氧自由基（ROS）广泛存在于机体的代谢反... 详细信息

研究目的:果蝇睾丸生殖干细胞（germline stem cells,GSCs）作为精子产生的源泉,其自我更新和分化过程受到干细胞微环境内在许多因子的严格调控,对于男性不育及生殖细胞肿瘤的发生至关重要。活性氧自由基（ROS）广泛存在于机体的代谢反应中,参与干细胞的增殖、分化与凋亡影响干细胞行为,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）-核因子E2相关因子2（Nrf2）-抗氧化反应元件（ARE）信号通路是细胞氧化应激反应中的关键通路,为近年来抗氧化应激领域的研究热点。新挖掘出的果蝇睾丸生殖干细胞微环境调控网络因子之一是CG8005基因,目前其作用机理尚不明确。本课题研究和讨论的主要方向是围绕CG8005基因在果蝇睾丸生殖干细胞微环境中的功能和机制问题。研究方法:（1）通过UAS/Gal4介导的RNAi途径使得Nos-gal4、Tj-gal4和Bam-gal4在干细胞微环境中表达,从而介导CG8005染色标记物检测并分析CG8005基因在果蝇睾丸中的功能。（2）在果蝇S2细胞中利用小干扰RNA（si RNA）原理将CG8005基因表达沉默,通过CCK-8法检测si CG8005处理的果蝇S2细胞生长的情况,磷酸化组蛋白H3（PH3）免疫荧光染色检测果蝇S2细胞的增殖能力,初步探索CG8005基因在果蝇体外的功能。（3）利用si RNA的干扰原理在果蝇S2细胞中降低CG8005基因的表达,流式凋亡检测技术观察是否影响果蝇S2细胞的存活,TUNEL免疫荧光染色分析细胞的凋亡情况。（4）借助UAS/Gal4系统实现果蝇睾丸中CG8005基因的敲减,超氧化物阴离子荧光探针DHE检测果蝇睾丸中ROS的产生。（5）根据过氧化物敏感性荧光探针DCFH-DA和超氧化物阴离子荧光探针DHE的检测原理、利用免疫荧光染色法比较对照组与si CG8005组果蝇S2细胞中ROS的产生。（6）通过实时荧光定量PCR,检测与CG8005基因高度相关的促氧化因子及抗氧化因子。（7）运用果蝇UAS/Gal4系统,通过实时荧光定量PCR中所鉴定到的抗氧化因子（cnc）进行细胞特异性敲减,通过免疫荧光染色及ROS检测分析cnc是否与CG8005具有相似的表型,从而进一步探究CG8005基因在果蝇睾丸生殖干细胞微环境中的调控机理。（8）借助实时荧光定量PCR检测一批剪接体亚基的mRNA水平。研究结果:（1）激光共聚焦显微成像结果显示,果蝇睾丸顶端的生殖干细胞微环境发生了改变。使用Nos-gal4在早期生殖细胞中敲减CG8005基因,出现小睾丸表型并且生殖细胞完全缺失。利用Tj-gal4使包囊细胞中CG8005基因敲低,导致未分化的生殖细胞成团最终发展为生殖细胞肿瘤。而Bam-gal4在精原细胞中敲低CG8005基因,引起生殖细胞积累,分化过程出现障碍从而影响精子的发生。（2）果蝇S2细胞中敲减CG8005基因导致细胞增殖能力减弱,生长受到抑制。（3）果蝇S2细胞中敲减CG8005基因导致细胞凋亡水平增加,细胞存活障碍。（4）Tj-gal4和Bam-gal4分别在包囊细胞及精原细胞中敲低CG8005基因导致ROS水平增加。（5）CG8005基因敲低显著增加了果蝇S2细胞中ROS水平。（6）在果蝇S2细胞中缺失CG8005基因,抗氧化因子m RNA水平上调,促氧化因子mRNA水平下调。（7）cnc RNAi导致的自我更新和分化受阻,如同CG8005基因在果蝇睾丸生殖干细胞微环境中缺失的表型,并且敲低cnc同样抑制果蝇S2细胞增殖,促进果蝇S2细胞凋亡。（8）在果蝇S2细胞中敲减CG8005基因,一批剪接体亚基的m RNA水平上调。研究结论:果蝇体内实验表明,CG8005基因对于果蝇睾丸生殖细胞的自我更新与分化是必需的。果蝇体外研究表明,CG8005基因参与果蝇S2细胞增殖与凋亡的稳态调节过程,引起抗氧化因子cnc显著下调,另外可竞争性调节剪接体亚基的m RNA水平。同样的,cnc在果蝇体内和体外完全模仿生殖细胞自我更新及分化、果蝇S2细胞增殖和凋亡的表型。提示CG8005基因可能在果蝇睾丸生殖细胞的自我更新和分化过程中起重要作用,从而调节精子的发生,其表达由cnc活性调控的氧化应激所介导。该研究通过证明CG8005基因的作用提供了对于男性非梗阻性无精子症和生殖细胞肿瘤发病机制的新见解,CG8005和cnc的表达下调可能参与了男性不育及生殖细胞肿瘤的发病。因此,治疗方法目标这两个因素可能有效。

关键词： CG8005 果蝇生殖细胞自我更新分化氧化应激

CG8005基因在果蝇睾丸生殖细胞中的功能分析

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遗传 2020年第11期42卷 1122-1132页

作者：陈万银颜一丹栾晓瑾王敏方杰江苏大学附属医院妇科镇江212001

生殖细胞的自我更新及分化过程对于男性不育及生殖细胞肿瘤的发生至关重要,CG8005基因作为果蝇(Drosophila melanogaster)睾丸生殖干细胞的调控因子之一,其功能机制尚不清楚。为了探讨CG8005基因在果蝇睾丸生殖细胞中的生物学功能,本研... 详细信息

生殖细胞的自我更新及分化过程对于男性不育及生殖细胞肿瘤的发生至关重要,CG8005基因作为果蝇(Drosophila melanogaster)睾丸生殖干细胞的调控因子之一,其功能机制尚不清楚。为了探讨CG8005基因在果蝇睾丸生殖细胞中的生物学功能,本研究首先通过UAS-gal4系统介导的RNAi途径,驱动果蝇睾丸生殖细胞和包囊细胞中UAS-CG8005 RNAi的表达,观察后代雄性果蝇的生育能力;其次,通过免疫荧光染色方法检测对照组和CG8005 RNAi雄性果蝇睾丸中Vasa、IBI、锌指结构域1蛋白(Zn finger homeodomain 1,Zfh1)、眼缺陷蛋白(eyes absent,Eya)、DE-cad、FasIII以及磷酸化组蛋白H3(phospho-histone H3,PH3)、TUNEL等表达模式;最后,使用小干扰RNA(siRNA)在果蝇S2细胞中将CG8005基因表达沉默,用PH3检测对照组和CG8005siRNA组中果蝇S2细胞增殖能力,TUNEL及流式凋亡检测技术分析果蝇S2细胞凋亡情况;通过荧光定量PCR检测剪接体亚基的mRNA水平,观察剪接体的相对表达量。结果表明,与对照组果蝇比较,在生殖细胞和包囊细胞中缺失CG8005基因,雄性果蝇的生育能力降低甚至完全丧失;另外,nos-gal4驱动UAS-CG8005 RNAi的雄性果蝇中生殖细胞及生殖融合体消失,并且生殖细胞增殖能力减弱,而tj-gal4驱动UAS-CG8005 RNAi的果蝇睾丸中出现生殖细胞样肿瘤;在果蝇S2细胞中敲减CG8005基因导致细胞凋亡增加,增殖受到抑制;CG8005基因在果蝇S2细胞中沉默引起剪接体亚基的信使RNA水平升高。可见,CG8005基因在果蝇睾丸生殖细胞的自我更新与分化过程中必不可少,其缺失可能导致生殖细胞存活受限甚至生殖细胞样肿瘤的形成;并且CG8005基因可参与果蝇S2细胞的增殖和凋亡,对于细胞生命的维持至关重要,同时可竞争性调节剪接体亚基的mRNA水平。

关键词： CG8005基因果蝇睾丸生殖细胞自我更新与分化增殖与凋亡

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国内电石法PVC行业的发展探讨

新疆农垦科技 2012年第3期35卷 56-58页

作者：陈万银新疆天业集团化工研究院新疆石河子832000

本文简述了我国电石法PVC行业的发展状况及存在的问题,并对将来行业的可持续发展提出了建议。

关键词： PVC 乙烯循环经济

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乙炔氢氯化无汞催化剂研发进展

中国氯碱 2012年第4期 18-22页

作者：陈万银新疆天业集团化工研究院新疆石河子832000

分析了中国电石法PVC行业使用汞催化剂带来的汞消耗及环境问题,提出研发无汞催化剂的必要性及紧迫性。介绍了目前国内外无汞催化剂的研发进展情况。

关键词： PVC 无汞催化剂研发进展

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新闻监督与人大监督结合的现实思考

科技信息 2009年第1期 780-781页

作者：陈万银河南电视台都市频道广告部河南郑州450008

本文认为,人大监督和媒体监督的有机结合,可以对权力运行进行有效的监督和制约,不仅使人大监督更具有广泛性和权威性,也使传媒监督真正成为发挥社会监督功能的核心组成部分,成为多元化社会监督的重中之重。这样才能更好地建立健全决策... 详细信息

本文认为,人大监督和媒体监督的有机结合,可以对权力运行进行有效的监督和制约,不仅使人大监督更具有广泛性和权威性,也使传媒监督真正成为发挥社会监督功能的核心组成部分,成为多元化社会监督的重中之重。这样才能更好地建立健全决策、执行、监督既相互协调又相互制约的体制机制,将权力运行的每一个部位、每一个环节都置于有效的监督之下。

关键词：新闻监督人大监督

发现汉字之美步步高《汉字英雄》青少年市场传播案

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声屏世界（广告人） 2014年第9期 79-81页

作者：陈万银赵锐河南电视台卫星频道广告部

广告目标通过《汉字英雄》,让观众感受中华汉字之博大精深。同时,提升步步高教育电子的品牌价值,加深学生及家长群体对步步高家教机、步步高点读机的印象。策略亮点在当下音乐、选秀铺天盖地的荧屏中,《汉字英雄》从观众内心出发,发现... 详细信息

广告目标通过《汉字英雄》,让观众感受中华汉字之博大精深。同时,提升步步高教育电子的品牌价值,加深学生及家长群体对步步高家教机、步步高点读机的印象。策略亮点在当下音乐、选秀铺天盖地的荧屏中,《汉字英雄》从观众内心出发,发现观众深层文化需求,集综艺性和知识性于一体,将文化和娱乐相包容,文化名人鼎力加盟,寻找失落的汉字,给观众带来耳目一新的视听觉感受。

关键词：深层文化听觉感受广告目标节目策划河南卫视艺性中国电视节目整合传播节目宣传广告效果

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孩子之间起纠纷,家长咋办?

妇女生活（现代家长） 2002年第7期 19-20页

作者：晏扬陈万银

清华育才实验中学两名女生张菁和王依因一句玩笑发生争执,王依的母亲竟带领王依的姑父母等4人赶到学校兴师问罪。在学校政教处办公室里。

关键词：家长解决纠纷学校老师母亲实验中学办公室父母发生批评

历史自信视域下“政治三力”建设的价值意蕴和实现路径

维普期刊数据库评论

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南昌航空大学学报（社会科学版） 2023年第4期25卷 1-7页

作者：王员陈万银江西师范大学马克思主义学院南昌330222

历史自信是中国共产党对自身历史的深刻总结和高度肯定,是党进行“政治三力”建设的重要精神力量。历史自信与“政治三力”建设之间存在深刻的内在联系,在坚定历史自信中进行“政治三力”建设,对于丰富和拓展马克思主义关于党的政治建... 详细信息

历史自信是中国共产党对自身历史的深刻总结和高度肯定,是党进行“政治三力”建设的重要精神力量。历史自信与“政治三力”建设之间存在深刻的内在联系,在坚定历史自信中进行“政治三力”建设,对于丰富和拓展马克思主义关于党的政治建设的理论体系,彰显中国共产党对自身长期执政的自信,引导人民群众增强对党的历史认同和政治认同具有重要价值意蕴。在历史自信视域下探索“政治三力”建设的途径,需要从历史自觉、历史主动和历史担当三重维度加以把握。

关键词：历史自信中国共产党政治三力

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乙炔氢氯化无汞催化剂研发进展及前景分析

中国氯碱 2015年第8期 20-23,26页

作者：陈万银郑伟玲新疆兵团现代绿色氯碱化工工程研究中心有限公司新疆石河子832000

阐述了中国电石法PVC行业无汞催化剂的研发背景及紧迫性,介绍了新疆天业集团无汞催化剂的研发情况,提出了无汞催化剂的工业化应用面临的问题,展望了无汞催化剂的工业化应用前景。

关键词： PVC 无汞催化剂研发进展