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基于核酸适体的高通量模型筛选抗大口黑鲈虹彩病毒药物

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广东海洋大学学报 2024年第3期44卷 9-16页

作者：张帅帅刘明珠黄静师德强陈嘉柯珂竺利波韦云依牟容丽陆兰天杨辉余庆李鹏飞广西大学资源环境与材料学院广西南宁530000 广西科学院广西海洋科学院广西水产生物技术与现代生态养殖重点实验室广西渔业重大疫病防控与高效健康养殖产业技术工程研究中心广西南宁530007 南宁学院食品与质量工程学院广西南宁530200 中国-东盟现代渔业产业技术转移示范中心北部湾海洋产业研究院广西南宁530007

【目的】利用可特异性识别大口黑鲈(Micropterus salmoides)虹彩病毒(Largemouth bass virus,LMBV)的核酸适体LBVA1建立药物高通量筛选技术(Aptamer LBVA1-based high-throughput screening,LBVA1-AHTS),以快速筛选有效抗LMBV药物。【方法】用探针FAM-LBVA1检测感染不同浓度[感染复数(MOI)分别为0、0.05、0.10、0.20]LMBV 48 h,以及感染LMBV 0、6、12、24和48 h的胖头鱥(Pimephales promelas)肌肉细胞(Fathead minnow cells,FHM)荧光值,并用激光共聚焦及荧光定量PCR(RT-qPCR)验证LMBV感染情况;将利巴韦林、阿昔洛韦、加巴喷丁、茶多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯等9种药物分别以安全工作浓度与LMBV混匀,加入FHM细胞共孵育,运用探针FAM-LBVA1及RT-qPCR技术检测各组LMBV感染情况,比较两种方法检测的药物抗LMBV感染效果,筛选出有效抗LMBV药物。【结果】探针FAM-LBVA1检测及RT-qPCR技术验证结果均表明,在感染复数(MOI)为0.20、感染时间为48 h时,对LMBV感染的检测效果最佳。9种药物抗LMBV效果筛选结果表明,LBVA1-AHTS技术与RT-qPCR技术两种筛药方法筛选出利巴韦林、加巴喷丁、金刚烷胺、卡马西平、茶多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸酯7种药物的抗病毒效果一致,其中茶多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸酯3种药物具有抗LMBV的效果,其余4种药物无明显抗病毒效果,两种方法一致率近80%。【结论】建立的LBVA1-AHTS模型可快速、准确、高效筛选出抗LMBV病毒药物,为快速筛选抗病毒药物提供理论和技术基础。

关键词：大口黑鲈虹彩病毒核酸适体高通量筛选抗病毒药物

广西斑点叉尾鮰源嗜水气单胞菌灭活疫苗的制备

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广西科学院学报 2019年第3期35卷 239-245页

作者：刘明珠余庆肖贺贺吴思婷覃仙玲黎思巧陈宪云陆兰天聂振平罗永巨肖俊李鹏飞广西科学院广西壮族自治区海洋研究所广西海洋生物技术重点实验室广西北海536000 广西科学院广西近海海洋环境科学重点实验室广西南宁530007 河南师范大学生命科学学院河南新乡453007 广西壮族自治区水产科学研究院广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室广西南宁530021 广西海洋天然产物与组合生物合成化学重点实验室广西南宁530007

本研究针对广西地区分离到的致病性嗜水气单胞菌,开发区域定制化的灭活疫苗,以实现鱼病的有效预防和控制。首先,对斑点叉尾鮰源嗜水气单胞菌在LB培养基中的生长曲线,培养基的最适pH值,以及培养基中添加蔗糖对嗜水气单胞菌生长影响进行研... 详细信息

本研究针对广西地区分离到的致病性嗜水气单胞菌,开发区域定制化的灭活疫苗,以实现鱼病的有效预防和控制。首先,对斑点叉尾鮰源嗜水气单胞菌在LB培养基中的生长曲线,培养基的最适pH值,以及培养基中添加蔗糖对嗜水气单胞菌生长影响进行研究;随后探索嗜水气单胞菌灭活疫苗的制备方法,并在细胞水平和斑点叉尾鮰活体水平上研究疫苗的安全性,开展疫苗对斑点叉尾鮰的免疫保护实验。结果表明嗜水气单胞菌浓度与菌液OD值间具有较好的线性关系,其回归方程为y=2E-10 x+0.1399,R 2=0.975 4。用于培养嗜水气单胞菌的LB培养基最适pH值为7.0~7.5,且在培养基中添加蔗糖能显著促进嗜水气单胞菌的生长。研究制备的嗜水气单胞菌灭活疫苗在细胞水平和鱼活体水平均安全无毒,且对斑点叉尾鮰的免疫保护率可达到75%。据此,本研究初步建立起广西斑点叉尾鮰源嗜水气单胞菌灭活疫苗的制备工艺。

关键词：斑点叉尾鮰嗜水气单胞菌灭活疫苗制备条件优化免疫保护水产养殖

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珍珠龙胆石斑鱼工厂化健康育苗技术的研究

广西科学院学报 2019年第3期35卷 246-252页

作者：余庆刘明珠肖贺贺吴思婷董德信覃仙玲朱冬琳陈宪云陆兰天聂振平罗永巨李鹏飞广西科学院广西近海海洋环境科学重点实验室广西南宁530007 广西壮族自治区海洋研究所广西海洋生物技术重点实验室广西北海536000 广西壮族自治区水产科学研究院广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室广西南宁530021 河南师范大学生命科学学院河南新乡453007 广西海洋天然产物与组合生物合成化学重点实验室广西南宁530007

为突破广西地区珍珠龙胆石斑鱼工厂化健康育苗的技术瓶颈,提高广西地区珍珠龙胆石斑鱼人工育苗成活率和育苗质量,开展适合于广西地区的珍珠龙胆石斑鱼工厂化健康育苗技术的研究。本研究明确了珍珠龙胆石斑鱼工厂化育苗所需的适宜的光照... 详细信息

为突破广西地区珍珠龙胆石斑鱼工厂化健康育苗的技术瓶颈,提高广西地区珍珠龙胆石斑鱼人工育苗成活率和育苗质量,开展适合于广西地区的珍珠龙胆石斑鱼工厂化健康育苗技术的研究。本研究明确了珍珠龙胆石斑鱼工厂化育苗所需的适宜的光照强度、水体盐度、温度、溶氧和氨氮含量等水环境因子,探讨了生物饵料营养强化对育苗成活率的影响。试验表明,在光照强度为2 000~3 500 lux,水温28~31℃,盐度28‰~31‰,水体的溶氧量>6 mg/L的育苗条件下,石斑鱼鱼苗生长情况良好,育苗成活率达到10.5%,幼鱼平均全长25.5 mm。试验还表明,对生物饵料进行营养强化可以提高珍珠龙胆石斑鱼的育苗成活率。本研究成果有助于推动广西海水养殖业良种化进程、促进广西地区石斑鱼养殖业健康可持续发展。

关键词：珍珠龙胆石斑鱼工厂化健康育苗水环境因子生物饵料营养强化石斑鱼养殖广西

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黄连水提物对卵形鲳鲹源溶藻弧菌的抑菌作用

广西科学院学报 2019年第2期35卷 119-123页

作者：刘明珠肖贺贺余庆覃仙玲黎思巧陆兰天吴思婷王一兵 Dedi Fazriansyah Putra 王太霞李鹏飞广西科学院广西海洋研究所广西海洋生物技术重点实验室广西北海536000 河南师范大学生命科学学院河南新乡453007 广西近海海洋环境科学重点实验室广西南宁530007 广西民族大学海洋与生物技术学院广西南宁530006 印度尼西亚亚齐大学班达亚齐999006

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)是一种生长快速且肉质鲜美的经济型海水养殖鱼类,但是近些年为满足人们的日常需求,在不断扩大养殖的同时病菌也逐渐泛滥。溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是华南沿海地区海水养殖鱼类细菌性鱼病的主要致病... 详细信息

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)是一种生长快速且肉质鲜美的经济型海水养殖鱼类,但是近些年为满足人们的日常需求,在不断扩大养殖的同时病菌也逐渐泛滥。溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是华南沿海地区海水养殖鱼类细菌性鱼病的主要致病菌之一,给水产养殖业带来巨大损失。本研究对黄连(Coptis chinensis Franch)的抗菌作用进行系统研究,目的是为由溶藻弧菌引起的爆发性细菌性鱼病的高效防治提供科学的用药依据。本研究采用二倍稀释法测定黄连水提物对卵形鲳鲹源溶藻弧菌的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)和半数致死量(LD50),并使用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定细菌超声破碎上清液中可溶性蛋白含量。结果表明,黄连水提物对溶藻弧菌具有明显的抑制作用,其对溶藻弧菌的MIC、MBC和LD50的值分别为7.800mg/mL、31.250mg/mL和15.625mg/mL。胞内可溶性蛋白含量变化的结果提示:黄连发挥抑菌作用的机制可能是通过损伤细菌的细胞壁导致细菌内容物的释放并引起菌体裂解死亡。黄连具有发展成为一种高效抗水产病害中草药制剂的潜力。

关键词：黄连卵形鲳鲹溶藻弧菌细胞毒性抗菌活性

构建未来职业教育体系：OECD国家的推进逻辑、现实困境和改革经验

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职业技术教育 2025年第01期 72-79页

作者：陆维康浙江大学公共管理学院、中国科教战略研究院

劳动力市场的深刻变化，导致职业教育改革势在必行。OECD国家在构建未来职业教育体系过程中遵循三大推进逻辑：适应数字化和绿色化社会；提高响应市场的敏捷度；增强职业教育的包容性。在这样的逻辑指导下，OECD国家职业教育着重解决如... 详细信息

劳动力市场的深刻变化，导致职业教育改革势在必行。OECD国家在构建未来职业教育体系过程中遵循三大推进逻辑：适应数字化和绿色化社会；提高响应市场的敏捷度；增强职业教育的包容性。在这样的逻辑指导下，OECD国家职业教育着重解决如何促进社会参与、如何拓宽参与人员、如何强化过渡功能以及如何使用数字技术这四大难题。各国纷纷采取改革措施，构建面向未来的职业教育体系：政府引领，促进职业教育与社会合作；精准设计，建立灵活便捷的教育项目；上下联通，强化不同类型教育衔接；提供保障，鼓励创新使用数字化技术。

关键词：未来职业教育体系数字化绿色转型